實驗3-環(huán)境微生物的檢測

1、實驗三實驗三環(huán)境微生物的檢測環(huán)境微生物的檢測一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?.了解周圍環(huán)境中微生物的分布情況。2.懂得無菌操作在微生物實驗中的重要性。3.了解四大類微生物的菌落特征。二、實驗原理二、實驗原理在我們周圍的環(huán)境中存在著種類繁多的、數(shù)量龐大的微生物。土壤、江河湖海、塵埃、空氣、各種物體的表面以及人和動物體的口腔、呼吸道、消化道等都存在著各種微生物。由于它們體積微小，人們用肉眼無法觀察到它們個體的存在。但是只要稍加留意，我們就可以在發(fā)

2、霉的面包、朽木上看到某些微生物群體。這些現(xiàn)象表明，自然界只要有微生物可以利用的物質(zhì)和環(huán)境條件，微生物就可以在其上生長繁殖。據(jù)此，我們在實驗室里就可以用培養(yǎng)基來培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)基是用人工配制的、適合微生物生長繁殖和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合養(yǎng)料。其中含有微生物所需要的六大營養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機鹽、生長因子、氣體和水分。此外，根據(jù)不同的微生物的要求，在配制培養(yǎng)基時還需用酸液或堿液調(diào)節(jié)至適宜的pH。配制好的培養(yǎng)基必須進行滅菌。所謂滅菌是指采用各

3、類的物理或化學因素，使物體內(nèi)外的所有微生物喪失其生長繁殖能力的措施。經(jīng)過滅菌后的物體是無菌的。消毒是與滅菌完全不同的概念，它是指用較溫和的物理因素殺死物體表面和內(nèi)部病原微生物的一種常用的衛(wèi)生措施。滅菌的方法較多，廣泛使用的是高溫滅菌，其中最常用的是高壓蒸汽滅菌法。此法是把待滅菌的物品放在一個可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進行的。在1.05kgcm2的蒸汽壓力下，溫度可達121℃。一般只要維持15~20min，就可殺死一切微生物的營養(yǎng)體和它們的

4、各種孢子。微生物的接種技術(shù)是生物科學研究中的一項最基本操作技術(shù)。為了確保純種不被雜菌污染，在整個接種過程中，必須進行嚴格的無菌操作。在實驗過程中必須牢固樹立無菌概念，經(jīng)常保持實驗臺及周圍環(huán)境的清潔，嚴格無菌操作，避免雜菌的污染，這是保證實驗成功的必要條件。II、倒平板有持皿法和疊皿法，操作要點如下：1.持皿法(1)將無菌培養(yǎng)皿疊放在酒精燈左側(cè)，以便拿取。(2)點燃酒精燈。(3)酒精燈旁，左手握三角瓶底部，傾斜三角瓶，右手旋松棉塞，用右手

5、小指與小尾魚際(即小指邊緣)夾住棉塞并將其拔出(切勿將棉塞放在桌上)，隨之將瓶口在火焰上過一下(不可灼燒，以防爆裂)，以殺死可能沾在瓶口的雜菌。然后將三角瓶從左手換至右手(用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部)。操作中瓶口應(yīng)保持在火焰2~3cm，瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。左手拿起一套平皿，用無名指和小指托住皿底，用中指和拇指夾住皿蓋，食指于皿蓋上為支點，在火焰旁，打開皿蓋，讓三角瓶伸入，隨后倒入培養(yǎng)基。一般倒入15ml左右

6、培養(yǎng)基即可鋪滿整個皿底。蓋上皿蓋，置水平位置待凝。然后將三角瓶移至左手，瓶口在次過火并塞緊瓶蓋。2.疊皿法此法適于在超干凈臺上操作，基本步驟同持皿法。不同之處是左手不必持皿，而是將瓶皿疊放在酒精燈的左側(cè)并靠近火焰。按上述方法用右手拿三角瓶，左手打開最上面的皿蓋，倒入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋后即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平皿。操作中瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。III、貼標簽待培養(yǎng)基完全凝固后，在皿底帖上標簽，注明檢測類型，組別