黃原膠發(fā)酵microsoftword文檔

1、黃原膠發(fā)酵工藝1、培養(yǎng)基1.1斜面培養(yǎng)基（100ml）葡萄糖3.0；蛋白胨0.5；酵母粉0.3；氯化鈉0.5；瓊脂2.0；pH7.0~7.3滅菌條件：1℃，20min；培養(yǎng)溫度：30℃；培養(yǎng)時(shí)間：2448h1.2種子培養(yǎng)基（100ml）葡萄糖2.0；蛋白胨0.5；酵母粉0.1；牛肉膏0.3；pH7.07.3；滅菌條件：115℃，20min；培養(yǎng)溫度：30℃；培養(yǎng)時(shí)間：1015h1.3發(fā)酵培養(yǎng)基（100ml）葡萄糖3.0；蛋白胨0.2；酵

2、母粉0.1；NaHPO40.1；KH2PO40.3；K2SO40.1；MgSO47H2O0.1pH7.07.3；滅菌條件：115℃，20min；培養(yǎng)溫度：30℃；培養(yǎng)時(shí)間：4862h2培養(yǎng)過程2.1斜面培養(yǎng)基1）配置400ml的斜面培養(yǎng)基，分裝試管，于115℃下滅菌20分鐘，之后擺斜面，冷卻至室溫后，將凝固后的斜面放于30℃培養(yǎng)箱過夜。2）轉(zhuǎn)接斜面菌種，將轉(zhuǎn)接好的斜面菌放于30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2448小時(shí)。2.2一級(jí)種子培養(yǎng)1）配置種子培養(yǎng)

3、基：按照種子培養(yǎng)基配方配置3000ml分別裝到5000ml和500ml的三角瓶中，裝液量分別為100ml500ml三角瓶（用于一級(jí)種子培養(yǎng)）；1000ml50000ml三角瓶（用于二級(jí)種子培養(yǎng)），于115℃下滅菌20分鐘。2）接種：將培養(yǎng)好的斜面菌種接種到一級(jí)種子培養(yǎng)基中（100ml500ml三角瓶），接種量為每瓶23接種環(huán)（將整個(gè)斜面上的菌種全部刮下，接種到一級(jí)種子培養(yǎng)基中），放在30℃搖床培養(yǎng)1015小時(shí)，轉(zhuǎn)速為200rpm。2.3

4、二級(jí)種子培養(yǎng)將培養(yǎng)好的一級(jí)種子接種到二級(jí)種子培養(yǎng)基中（1000ml5000ml三角瓶），接種量為10%（vv），放在30℃搖床培養(yǎng)68小時(shí)，轉(zhuǎn)速為200rpm。3發(fā)酵罐培養(yǎng)1）配置發(fā)酵培養(yǎng)基20L，考慮到接入的種子液的體積（10%，2000ml），所以培養(yǎng)基配置定容時(shí)為18L。2）將培養(yǎng)好的二級(jí)種子接種到發(fā)酵罐中，接種量為10%（vv，）溫度30℃發(fā)酵罐初始攪拌轉(zhuǎn)速為100rpm，通風(fēng)量為1.52。0vvm，初始pH為7.07.3，中間

5、過程不控制pH。4產(chǎn)物提取取一定體積的發(fā)酵液，加入三倍體積的無水乙醇沉淀過夜，過濾得到沉淀物，放置于50℃通風(fēng)箱內(nèi)干燥，至恒重，稱重。5發(fā)酵過程中需要檢測(cè)的數(shù)據(jù)及測(cè)定方法1）發(fā)酵液OD取一定體積的發(fā)酵液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專缓笥梅止夤舛扔?jì)在620nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。2）葡萄糖含量取一定發(fā)酵液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專?000rpm離心15min，取上清，采用SBA檢測(cè)。3）發(fā)酵液黏度發(fā)酵過程中取大約100ml發(fā)酵液，用Blankspoon粘度計(jì)（D

6、VEVISCOMETER）測(cè)定其黏度。4）黃原膠產(chǎn)量測(cè)定發(fā)酵結(jié)束后取10ml發(fā)酵液，用三倍體積無水乙醇沉淀黃原膠，8000rpm離心15min，去上清，沉淀的黃原膠50℃通風(fēng)箱內(nèi)干燥至恒重，用分析天平稱重。5）pH值測(cè)定用pH計(jì)測(cè)定發(fā)酵液的pH值。6）菌體干重的測(cè)定取發(fā)酵液10ml加入20ml去離子水稀釋，放置在80℃水浴鍋中用1molLNaOH調(diào)節(jié)pH10后，水浴15min，然后用1molLHCl調(diào)節(jié)pH7.0，迅速12000rpm離