水中苯酚含量的測(cè)定及其對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育的生態(tài)毒性診斷研究.pdf

1、苯酚是一種重要的苯系中間體，主要用于生產(chǎn)酚醛樹脂、己內(nèi)酰胺、雙酚A、己二酸、苯胺、水楊酸等，此外還可用作溶劑和消毒劑。環(huán)境中的苯酚主要來源于工廠排出的廢氣和廢水，進(jìn)入大氣，土壤和水體，從而對(duì)人體及其他生物產(chǎn)生危害。除此，還有一些日常生活使用的含苯酚產(chǎn)品也可以使人體暴露于苯酚，如潤(rùn)喉片，消毒劑等，在飲用水中、香煙的煙霧中也發(fā)現(xiàn)了苯酚。苯酚可以通過呼吸道，消化道及皮膚三種途徑進(jìn)入人體，國(guó)內(nèi)關(guān)于苯酚的毒性研究基本上都是苯酚中毒的病例報(bào)告，人群

2、流行病學(xué)調(diào)查及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究較少。由于苯酚廣泛存在于環(huán)境中，因此研究苯酚的毒性即顯得尤為重要。本文建立了活性炭富集.高效液相色譜法測(cè)定水中痕量苯酚，并通過研究苯酚與DNA的相互作用及其對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育的生態(tài)毒性診斷研究，以評(píng)價(jià)苯酚對(duì)生物體健康的影響。 目的： 1.建立水體中苯酚含量測(cè)定的方法，并通過研究苯酚在水體中的暴露水平，以評(píng)價(jià)苯酚對(duì)環(huán)境的污染程度。 2.研究苯酚與DNA之間的相互作用模式。 3

3、.觀察苯酚對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育各階段毒理學(xué)終點(diǎn)的影響，以評(píng)價(jià)苯酚及對(duì)硝基苯胺對(duì)生物體的單一毒性和聯(lián)合毒性。 方法： 1.用活性炭富集自來水及河水中的苯酚，富集后的活性炭加入0.5mol/L的NaOH，同時(shí)超聲進(jìn)行解吸，濾過后加H2SO4將pH值調(diào)至5左右，高效液相熒光檢測(cè)器檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為273nm，發(fā)射波長(zhǎng)為300nm，流動(dòng)相為乙腈：磷酸鹽緩沖液(0.05mol/L，pH為6.87)=45:55。 2.采用紫

4、外分光光度法，熒光分光光度法觀察了不同濃度DNA對(duì)苯酚的紫外光譜、熒光光譜的影響，同時(shí)研究了離子強(qiáng)度和溫度對(duì)苯酚-DNA混合體系的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Stem-Volmer方程進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。 3.不同濃度的苯酚、對(duì)硝基苯胺對(duì)受精后0小時(shí)的斑馬魚胚胎進(jìn)行染毒，觀察染毒后4、8、12、16、24、36、48、72小時(shí)不同的毒理學(xué)終點(diǎn)，并用LD50統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算各個(gè)終點(diǎn)的EC50值。用聯(lián)合效應(yīng)相加指數(shù)法評(píng)價(jià)苯酚和對(duì)硝基苯胺聯(lián)合對(duì)斑馬魚胚胎

5、各發(fā)育階段的聯(lián)合效應(yīng)。 結(jié)果： 1.建立了檢測(cè)水體中痕量苯酚的活性炭富集-高效液相色譜法，該方法標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：Y=1.1×103X+19.37，r=0.9991，加標(biāo)回收率為83.2％-88.2％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.1％，方法的檢出限為30ng/L。自來水中未檢測(cè)到苯酚，河水中的苯酚含量為73.75μg/L。 2.在pH 7.0的磷酸鹽緩沖溶液中，苯酚的熒光激發(fā)峰和發(fā)射峰分別位于273nm和299nm

6、處。小牛胸腺DNA的加入對(duì)苯酚的熒光存在著猝滅作用，室溫條件下測(cè)定ct-DNA對(duì)苯酚的動(dòng)態(tài)猝滅常數(shù)為7.062×103L/mol。 3.本實(shí)驗(yàn)各濃度組均未觀察到苯酚、對(duì)硝基苯胺對(duì)斑馬魚胚胎的眼點(diǎn)、耳石發(fā)育及20秒內(nèi)主動(dòng)運(yùn)動(dòng)三個(gè)毒理學(xué)終點(diǎn)的影響。斑馬魚胚胎對(duì)苯酚最敏感的毒理學(xué)終點(diǎn)為48小時(shí)黑素細(xì)胞不發(fā)育，EC50=52.14 mg/L；斑馬魚胚胎對(duì)對(duì)硝基苯胺最敏感的毒理學(xué)終點(diǎn)為72小時(shí)發(fā)育畸形，EC50=26.11mg/L。苯酚

7、和對(duì)硝基苯胺對(duì)斑馬魚胚胎的聯(lián)合毒性因毒理學(xué)終點(diǎn)不同而表現(xiàn)不同，32小時(shí)無血液循環(huán)、48小時(shí)無心率，48小時(shí)心包水腫表現(xiàn)為弱的協(xié)同作用；32小時(shí)心律減慢表現(xiàn)為相加作用；24小時(shí)尾部延展，48小時(shí)卵凝結(jié)，72小時(shí)發(fā)育畸形和孵化率表現(xiàn)為弱的拮抗作用。 結(jié)論: 1.活性炭富集-高效液相色譜法測(cè)定水中苯酚的方法成本低，靈敏度高，測(cè)定樣品結(jié)果滿意。 2.ct-DNA對(duì)苯酚的熒光猝滅作用屬于動(dòng)態(tài)猝滅，在體外實(shí)驗(yàn)條件下，苯