生物樣品微量藥物的分析技術(130535)

1、1生物樣品微量藥物的分析技術體內藥物分析是指體內樣品（生物體液、器官或組織）中藥物及其代謝物或內源性生物活性物質的定量分析。體內藥物分析與體內藥代動力學研究和臨床治療藥物監(jiān)測密切相關，它直接關系到藥物的體內作用機制探討與質量評價和藥物臨床使用的安全、有效與合理。藥物產(chǎn)生藥理作用的強度與其在體內作用部位（受體組織）的濃度直接相關，而藥物在體內主要依靠血液輸送至作用部位，因此血藥濃度可作為藥物在作用部位濃度的表觀指標，即血液是體內藥物分析的

2、主要樣品。另外，尿液、唾液、頭發(fā)和臟器組織等也可作為體內樣品。藥物在體內的某些代謝產(chǎn)物常具有一定的生理活性，它們在體內的變化規(guī)律對母體藥物的藥理學與毒理學評價極為重要；機體內源性生物活性物質往往參與機體重要的生理過程，其變化規(guī)律的異常改變也與某些疾病的發(fā)病機制密切相關。所以，體內特定藥物代謝物和機體內源性生物活性物質也是體內藥物分析監(jiān)測的目標。藥物進入體內后，其化學結構與存在狀態(tài)均可能發(fā)生顯著變化。在體液中，藥物的存在形式多樣化，除游離

3、型的原形藥物或其代謝物，也有原形藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等內源性小分子經(jīng)共價結合的結合物（或稱綴合物，conjugate），還有與蛋白質分子經(jīng)氫鍵及其他分子間力結合的結合型藥物；而且藥物及其代謝物的濃度通常很低、干擾物質多。在測定體內藥物及其特定代謝物或內源性生物活性物質時，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后可直接測定外，通常在測定之前要對體內樣品進行分離凈化與濃集等樣品前處理，從而為體內樣品中藥物的測定提供良好的環(huán)境與條件。常用的樣品前處

4、理方法包括：去除蛋白質、綴合物水解、化學衍生化、分離濃集等方法。其中，去除蛋白質法主要有溶劑沉淀法、中性鹽析法、強酸沉淀法、超濾法及熱凝固法；分離濃集法通常采用液相萃取、固相萃取與膜分離技術。從藥物的研究到臨床應用，藥物質量的正確評價尺度是有效性和安全性，即根據(jù)藥物在體內的表現(xiàn)作出評價。新藥進入臨床之前，首先在試驗動物體內進行藥代動力學和毒代動力學研究。所以，體內藥物分析的對象不僅是人體，也包括試驗動物。對體內藥物進行研究時，要求分析方

5、法的靈敏度、專屬性和可靠性的程度均較高，建立有效的分析方法是體內藥物分析的首要任務。其次，在新藥研究過程中，按照國家新藥注冊審批有關規(guī)定，要提供藥物在動物和人體內的藥物動力學參數(shù)、生物利用度及血漿蛋白結合率等基本數(shù)據(jù)，這些研究工作要靠體內藥物分析來完成。再者，為保證臨床用藥安全有效，體內藥物分析也應為治療藥物監(jiān)測（TherapeuticDrugMoniting，TDM）提供準確的血藥濃度測定值，并對血藥濃度進行具體分析和合理解釋，提供藥

6、學情報和信息，參與指導臨床合理用藥、確定最佳劑量、制訂治療方案。另外，監(jiān)測和研究體內內源性物質的濃度變化，對于某些疾病的診斷及治療具有重要意義；對于麻醉藥品和精神藥品濫用的檢測和運動員體內違禁藥物的監(jiān)測，也必須依據(jù)體內藥物分析手段和技術才能完成。3體內樣品。在特殊情況下亦有采用乳汁、精液、淚液等生物體液。二、體內樣品的采集與制備（一）血樣血藥濃度通常是指血漿（plasma）或血清（serum）中的藥物濃度，而不是指全血藥物濃度。因為當藥

7、物在體內達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度時，血漿中藥物濃度被認為與藥物在作用部位（靶器官）的濃度緊密相關，即血漿中的藥物濃度可以反映藥物在體內作用部位的狀況。所以，血漿和血清是體內藥物分析最常用的樣本，其中選用最多的是血漿。1血樣的采集供測定的血樣應代表整個血藥濃度，所以應待藥物在血液中分布均勻后取樣。通常從靜脈采集血樣，并根據(jù)血中藥物濃度和分析方法靈敏度的要求，一般每次采血1~5ml；動物實驗時，采血量不宜超過動物總血量的十分之一。血樣通常從肘靜脈采

8、集，有時從毛細血管采血（成人多從手指或耳垂取血，小兒多從腳趾取血）用于臨床化驗。2血漿的制備將采集的靜脈血液置含有抗凝劑的試管中，混合后，以約1000?g離心力，離心5~10分鐘，使與血細胞分離，所得淡黃色上清液即為血漿。最常用的抗凝劑是肝素（heparin）。肝素是體內正常生理成分，因此不致改變血樣的化學組成或引起藥物的變化，一般不會干擾藥物的測定。其他抗凝劑是一些能與血液中的Ca2結合的試劑，如：EDTA、枸櫞酸鹽、氟化鈉、草酸等。

9、目前，采血常用的負壓式采血管通常預加有抗凝劑。3血清的制備將采集的靜脈血液置離心試管中，放置30分鐘~1小時。然后以約1000?g離心力，離心5~10分鐘，上層澄清的淡黃色液體即為血清。因藥物與纖維蛋白幾乎不結合，所以血漿與血清中的藥物濃度通常是相同的。作為血藥濃度測定的樣品，血漿和血清可任意選用。但無論是采用血漿還是血清，現(xiàn)有的文獻、資料所列的血藥濃度，均系指血漿或血清中藥物的總濃度（游離的和與血漿蛋白結合的總濃度）。血漿比血清分離得

10、快，而且制取的量約為全血的50％~60％（血清只為全血的20％~40％），多數(shù)研究者使用血漿樣品。若血漿中含有的抗凝劑對藥物濃度測定有影響時，則應使用血清樣品。4全血的制備將采集的血液置含有抗凝劑的試管中，但不經(jīng)離心操作，保持血漿和血細胞處于均相，則稱為全血（wholeblood）。全血樣品放置或自貯存處取出恢復室溫之后，可明顯分為上、下兩層，上層為血漿、下層為血細胞，但輕微搖動即可混勻。若需專門測定平均分布于血細胞內、外的藥物濃度，則