生物樣品微量藥物的分析技術(shù)(130535)

1、1生物樣品微量藥物的分析技術(shù)體內(nèi)藥物分析是指體內(nèi)樣品（生物體液、器官或組織）中藥物及其代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)的定量分析。體內(nèi)藥物分析與體內(nèi)藥代動力學(xué)研究和臨床治療藥物監(jiān)測密切相關(guān)，它直接關(guān)系到藥物的體內(nèi)作用機(jī)制探討與質(zhì)量評價(jià)和藥物臨床使用的安全、有效與合理。藥物產(chǎn)生藥理作用的強(qiáng)度與其在體內(nèi)作用部位（受體組織）的濃度直接相關(guān)，而藥物在體內(nèi)主要依靠血液輸送至作用部位，因此血藥濃度可作為藥物在作用部位濃度的表觀指標(biāo)，即血液是體內(nèi)藥物分析的

2、主要樣品。另外，尿液、唾液、頭發(fā)和臟器組織等也可作為體內(nèi)樣品。藥物在體內(nèi)的某些代謝產(chǎn)物常具有一定的生理活性，它們在體內(nèi)的變化規(guī)律對母體藥物的藥理學(xué)與毒理學(xué)評價(jià)極為重要；機(jī)體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)往往參與機(jī)體重要的生理過程，其變化規(guī)律的異常改變也與某些疾病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。所以，體內(nèi)特定藥物代謝物和機(jī)體內(nèi)源性生物活性物質(zhì)也是體內(nèi)藥物分析監(jiān)測的目標(biāo)。藥物進(jìn)入體內(nèi)后，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與存在狀態(tài)均可能發(fā)生顯著變化。在體液中，藥物的存在形式多樣化，除游離

3、型的原形藥物或其代謝物，也有原形藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等內(nèi)源性小分子經(jīng)共價(jià)結(jié)合的結(jié)合物（或稱綴合物，conjugate），還有與蛋白質(zhì)分子經(jīng)氫鍵及其他分子間力結(jié)合的結(jié)合型藥物；而且藥物及其代謝物的濃度通常很低、干擾物質(zhì)多。在測定體內(nèi)藥物及其特定代謝物或內(nèi)源性生物活性物質(zhì)時(shí)，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后可直接測定外，通常在測定之前要對體內(nèi)樣品進(jìn)行分離凈化與濃集等樣品前處理，從而為體內(nèi)樣品中藥物的測定提供良好的環(huán)境與條件。常用的樣品前處

4、理方法包括：去除蛋白質(zhì)、綴合物水解、化學(xué)衍生化、分離濃集等方法。其中，去除蛋白質(zhì)法主要有溶劑沉淀法、中性鹽析法、強(qiáng)酸沉淀法、超濾法及熱凝固法；分離濃集法通常采用液相萃取、固相萃取與膜分離技術(shù)。從藥物的研究到臨床應(yīng)用，藥物質(zhì)量的正確評價(jià)尺度是有效性和安全性，即根據(jù)藥物在體內(nèi)的表現(xiàn)作出評價(jià)。新藥進(jìn)入臨床之前，首先在試驗(yàn)動物體內(nèi)進(jìn)行藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)研究。所以，體內(nèi)藥物分析的對象不僅是人體，也包括試驗(yàn)動物。對體內(nèi)藥物進(jìn)行研究時(shí)，要求分析方

5、法的靈敏度、專屬性和可靠性的程度均較高，建立有效的分析方法是體內(nèi)藥物分析的首要任務(wù)。其次，在新藥研究過程中，按照國家新藥注冊審批有關(guān)規(guī)定，要提供藥物在動物和人體內(nèi)的藥物動力學(xué)參數(shù)、生物利用度及血漿蛋白結(jié)合率等基本數(shù)據(jù)，這些研究工作要靠體內(nèi)藥物分析來完成。再者，為保證臨床用藥安全有效，體內(nèi)藥物分析也應(yīng)為治療藥物監(jiān)測（TherapeuticDrugMoniting，TDM）提供準(zhǔn)確的血藥濃度測定值，并對血藥濃度進(jìn)行具體分析和合理解釋，提供藥

6、學(xué)情報(bào)和信息，參與指導(dǎo)臨床合理用藥、確定最佳劑量、制訂治療方案。另外，監(jiān)測和研究體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)的濃度變化，對于某些疾病的診斷及治療具有重要意義；對于麻醉藥品和精神藥品濫用的檢測和運(yùn)動員體內(nèi)違禁藥物的監(jiān)測，也必須依據(jù)體內(nèi)藥物分析手段和技術(shù)才能完成。3體內(nèi)樣品。在特殊情況下亦有采用乳汁、精液、淚液等生物體液。二、體內(nèi)樣品的采集與制備（一）血樣血藥濃度通常是指血漿（plasma）或血清（serum）中的藥物濃度，而不是指全血藥物濃度。因?yàn)楫?dāng)藥

7、物在體內(nèi)達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度時(shí)，血漿中藥物濃度被認(rèn)為與藥物在作用部位（靶器官）的濃度緊密相關(guān)，即血漿中的藥物濃度可以反映藥物在體內(nèi)作用部位的狀況。所以，血漿和血清是體內(nèi)藥物分析最常用的樣本，其中選用最多的是血漿。1血樣的采集供測定的血樣應(yīng)代表整個(gè)血藥濃度，所以應(yīng)待藥物在血液中分布均勻后取樣。通常從靜脈采集血樣，并根據(jù)血中藥物濃度和分析方法靈敏度的要求，一般每次采血1~5ml；動物實(shí)驗(yàn)時(shí)，采血量不宜超過動物總血量的十分之一。血樣通常從肘靜脈采

8、集，有時(shí)從毛細(xì)血管采血（成人多從手指或耳垂取血，小兒多從腳趾取血）用于臨床化驗(yàn)。2血漿的制備將采集的靜脈血液置含有抗凝劑的試管中，混合后，以約1000?g離心力，離心5~10分鐘，使與血細(xì)胞分離，所得淡黃色上清液即為血漿。最常用的抗凝劑是肝素（heparin）。肝素是體內(nèi)正常生理成分，因此不致改變血樣的化學(xué)組成或引起藥物的變化，一般不會干擾藥物的測定。其他抗凝劑是一些能與血液中的Ca2結(jié)合的試劑，如：EDTA、枸櫞酸鹽、氟化鈉、草酸等。

9、目前，采血常用的負(fù)壓式采血管通常預(yù)加有抗凝劑。3血清的制備將采集的靜脈血液置離心試管中，放置30分鐘~1小時(shí)。然后以約1000?g離心力，離心5~10分鐘，上層澄清的淡黃色液體即為血清。因藥物與纖維蛋白幾乎不結(jié)合，所以血漿與血清中的藥物濃度通常是相同的。作為血藥濃度測定的樣品，血漿和血清可任意選用。但無論是采用血漿還是血清，現(xiàn)有的文獻(xiàn)、資料所列的血藥濃度，均系指血漿或血清中藥物的總濃度（游離的和與血漿蛋白結(jié)合的總濃度）。血漿比血清分離得

10、快，而且制取的量約為全血的50％~60％（血清只為全血的20％~40％），多數(shù)研究者使用血漿樣品。若血漿中含有的抗凝劑對藥物濃度測定有影響時(shí)，則應(yīng)使用血清樣品。4全血的制備將采集的血液置含有抗凝劑的試管中，但不經(jīng)離心操作，保持血漿和血細(xì)胞處于均相，則稱為全血（wholeblood）。全血樣品放置或自貯存處取出恢復(fù)室溫之后，可明顯分為上、下兩層，上層為血漿、下層為血細(xì)胞，但輕微搖動即可混勻。若需專門測定平均分布于血細(xì)胞內(nèi)、外的藥物濃度，則