細胞凝集反應實驗報告 山東大學

1、山東大學實驗報告2013年9月30日科目細胞生物學實驗題目細胞凝集反應第1頁共4頁細胞生物學實驗報告細胞凝集反應細胞凝集反應【實驗目的】1.1.了解細胞膜的表面結構；2.2.掌握凝集素促使細胞凝集的原理；3.3.學習研究細胞凝集反應的方法?！緦嶒炘怼?.1.凝集素凝集素凝集素是一類含糖（少數(shù)例外）并能與糖轉移結合的蛋白質，它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的作用。目前已發(fā)現(xiàn)近千種植物中含有凝集素，在各種真菌、無脊椎動物、脊椎動物，人體的各種

2、組織和器官中及某些病毒體內也含有凝集素，在各種真菌、無脊椎動物、脊椎動物，人體的各種組織和器官中及某些病毒體內也含有凝集素。常用的為植物凝集素，通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麥胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他們的總稱。在細胞表面，組成細胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖鏈，形成細胞外被（又稱為糖萼）。凝集素能與細胞外被中的糖分子連接，在細胞間形成“橋”，從而引起細胞凝集。凝集素引起的血細胞凝集，其細胞膜結構沒有發(fā)生變

3、化，與血液凝固中發(fā)生的復雜生物化學過程完全不同；另外，凝集素能與不同的糖蛋白特異結合，加入與凝集素互補的糖可以抑制細胞的凝集，但是凝集素不是來源或參與免疫反應的產物，因此，Ponder提出應稱“凝集素組織化學”而不能稱為“凝集素免疫組織化學”。人們利用凝集素與不同的糖蛋白特異性結合的原理，識別和研究不同類型膜結構的生物學特征，以及進行血型鑒定。ABO血型鑒定主要用于臨床輸血，在皮膚、腎等器官移植的時候選擇ABO血型相符的供體；不孕癥和新

4、生兒溶血癥病因的分析及親子鑒定等。另外，凝集素在臨床疾病防治、機體生理活動調控以及生物工程等方面展示出了十分廣闊的應用前景。如：植物凝集素可抑制受精；蕓豆凝集素可直接抑制HIV1反轉錄酶的活性，減少HIV感染者的病毒載量；細胞膜表面糖復合物的糖鏈結構與腫瘤細胞增殖、侵染、轉移等發(fā)展過程密切相關，凝集素芯片技術實現(xiàn)了對癌癥的快速、高通量檢測，有助于篩選出癌癥相關的糖鏈標志物。2.細胞凝集細胞凝集細胞凝集是指細胞彼此聚集在一起，成為一簇不規(guī)

5、則的細胞團。細胞膜是雙層脂鑲嵌蛋白質結構，脂和蛋白質又能與糖分子結合為細胞表面的分枝狀糖外被。目前認為，細胞間的聯(lián)系，細胞的生長和分化，免疫反應和腫瘤發(fā)生都和細胞表面的分枝狀糖分子有關。凝集素是一類含糖的（少數(shù)例外）并能與糖專一結合的蛋白質，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集細胞核刺激細胞分裂的作用。凝集素使細胞凝集是由于它與細胞表面的糖分子連接，在細胞間形成“橋”的結果，加入與凝集素互補的糖可以抑制細胞的凝集。3

6、.3.細胞凝集的反應技術細胞凝集的反應技術一、直接凝集反應技術顆粒性抗原(細菌、螺旋體、紅細胞等)與相應的抗體血清混合后，在電解質的參與下，經過一定時間，抗原抗體凝聚成肉眼可見的凝集塊，這種現(xiàn)象稱為凝集反應。血清中的抗體稱為凝集素?？乖Q為凝集原。細菌或其他凝集原都帶有相同的電荷（陰電荷），在懸液中相互排斥而呈均勻的分散狀態(tài)?？乖c抗體相遇后，由于抗原和抗體分子表面存在著相互對應的化學基團，因而發(fā)生特異性結合，稱為抗原抗體復合物。由于抗

7、體與抗原結合，降低了抗原分子間的經典排斥力，抗原表面的親水基團減少，由親水狀態(tài)變?yōu)槭杷疇顟B(tài)，此時已有凝集的趨向，在電解質（如生理鹽水）參與下，由于例子的作用，中山東大學實驗報告2013年9月30日科目細胞生物學實驗題目細胞凝集反應第3頁共4頁細胞生物學實驗報告6.先以白紙為襯托，直接觀察雙凹片凹槽內混合樣品發(fā)生凝集的現(xiàn)象，注意左右凹槽內不同現(xiàn)象的對比，對于發(fā)生凝集的一邊注意觀察凝集與不發(fā)生凝集的區(qū)別。直接觀察后在光學顯微鏡下觀察兩凹槽內

8、現(xiàn)象的區(qū)別，并用照相機拍攝實驗結果?！緦嶒灲Y果】1.肉眼觀察，對照組中紅細胞沉積在雙凹片凹槽底部呈大紅點；用凝集素處理的實驗組。顏色越來越淺，透明度逐漸變高，經過1分30秒，背景顏色變?yōu)橥该鳎t細胞呈顆粒狀聚集2.低倍鏡下可以看到對照組中紅細胞分布較均一，無凝集；實驗組中紅細胞聚集在一起對照組實驗組【實驗結果分析與注意事項實驗結果分析與注意事項】分析：1.把液體滴加到雙凹片上時，注意用量，防止懸液過多而溢出，使兩個細胞懸液接觸，導致實驗