醫(yī)學(xué)免疫學(xué)雙擴(kuò)凝集反應(yīng)

1、請(qǐng)不要開(kāi)電腦,沉淀反應(yīng)與凝集反應(yīng),,抗原（antigen, Ag）: 能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)。,抗體(antibody, Ab)： B細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的可特異性結(jié)合抗原的一組糖蛋白。,,,抗原-抗體反應(yīng)的特點(diǎn)與影響因素,反應(yīng)條件： 適當(dāng)?shù)臏囟?電解質(zhì) 酸堿度,特點(diǎn)： 特異性 可逆性

2、 可見(jiàn)性（合適的抗原抗體比例）,凝集反應(yīng)(agglutination):顆粒性抗原與抗體的反應(yīng)。,沉淀反應(yīng)(precipitation):可溶性抗原與抗體的反應(yīng)。,補(bǔ)體參與的反應(yīng),免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabelling technique）:用示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)的檢測(cè)。,,抗原-抗體反應(yīng)的基本檢測(cè)方法,沉淀反應(yīng) ——雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn),原理 用半固

3、體瓊脂凝膠作為介質(zhì)，可溶性抗原、抗體在其中能自由擴(kuò)散。將可溶性抗原和抗體分別加入瓊脂板上相對(duì)應(yīng)的孔中，兩者各自向四周擴(kuò)散，如果抗原和抗體相對(duì)應(yīng)，則在兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀線。,主要材料,器材：載玻片、EP管、微量加樣器、槍頭、 試劑：生理鹽水 抗原（正常小鼠IgG）、 抗體（兔抗小鼠IgG血清）,配制1%瓊脂：用生理鹽水配制，加熱溶解制板：趁熱將3.5ml融化瓊脂水平鋪在玻片上，

4、室溫下冷卻凝固打孔：用打孔器按圖示打孔稀釋抗體：取5支EP管，將抗體倍比稀釋加樣：周?chē)准尤氩煌♂尪鹊目贵w，中間孔加入抗原瓊脂板放入濕盒內(nèi)，置4℃，24-48小時(shí)后觀察結(jié)果。,實(shí)驗(yàn)步驟,Ag,1,2,3,4,5,control,6,,結(jié)果判斷,,,應(yīng)用,測(cè)定抗體的效價(jià)用特異性抗體檢測(cè)抗原檢查抗原和免疫血清的特異性、純度或濃度，比較抗原之間的異同點(diǎn),凝集反應(yīng) ——ABO血型鑒定,原理

5、 顆粒性抗原(完整的病原微生物或紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的條件下，形成肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)塊?；绢?lèi)型 直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)、凝集抑制反應(yīng)等。,直接凝集實(shí)驗(yàn)（ABO血型鑒定）,器材：酒精棉球、滅菌干棉球、微量加樣器、 滅菌槍頭、玻片、一次性采血針試劑 抗A試劑（藍(lán)色）、抗B試劑（黃色）,主要材料,實(shí)驗(yàn)原理,人類(lèi)ABO血型抗原主要有A和B兩種，根據(jù)紅細(xì)胞表面這兩種抗原的有無(wú)可把血型

6、分為四種。據(jù)此，將抗A和抗B抗體分別與待測(cè)紅細(xì)胞混合，抗A或（和）抗B抗體與紅細(xì)胞表面上的相應(yīng)抗原結(jié)合而引起紅細(xì)胞凝集，據(jù)其凝集情況便可判定出受試者的血型。,ABO血型的劃分,3,3,3,1,,ABO和Rh血型是與人類(lèi)輸血關(guān)系最為密切的兩個(gè)血型系統(tǒng)。當(dāng)一個(gè)人的紅細(xì)胞上存在一種D血型物質(zhì)（抗原）時(shí)，則稱為Rh陽(yáng)性，用Rh（+）表示；當(dāng)缺乏D抗原時(shí)即為Rh陰性，用Rh（-）表示。,,Rh（-）的分布因種族不同而差異很大:白種人中的比例較

7、高，約百分之十五中國(guó)人群中； 新疆維吾爾等少數(shù)民族: 5%； 蒙古族人接近1%； 漢族人所占的比例極少，0.3%,1．取潔凈載玻片1塊，并標(biāo)記（如圖）2．將抗A、B分型試劑分別加1滴于 標(biāo)記有A、B的玻片兩側(cè)。3．用酒精棉消毒被檢者手指尖端，以采血針刺破皮膚，稍加擠壓，使血液流出。用另一載玻片一端取適量血液加入抗抗A分型試劑，并混勻；用另一端再取適量血液加入抗抗B分型試劑，并混勻。用干棉花止血。