擬南芥CDR6基因在調(diào)控鉛脅迫響應(yīng)中的功能研究.pdf

1、土壤重金屬污染已成為一個(gè)嚴(yán)重的環(huán)境問題，其中重金屬鉛通過生物鏈累積到人類的組織和器官中，對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。植物修復(fù)技術(shù)與基因工程技術(shù)結(jié)合，被應(yīng)用于解決土壤重金屬污染問題，而該研究的關(guān)鍵就在于植物耐受重金屬毒害的關(guān)鍵基因的克隆及其分子機(jī)制的認(rèn)識。在前期工作中通過擬南芥基因表達(dá)譜分析，發(fā)現(xiàn)CDR6基因可被鉛脅迫誘導(dǎo)表達(dá)。在此基礎(chǔ)上，獲得了一個(gè)功能缺失的突變體cdr6-1，并構(gòu)建了CDR6過表達(dá)載體及轉(zhuǎn)基因植株，對CDR6基因在植物應(yīng)對

2、重金屬脅迫過程中的生物學(xué)功能進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下:
　　1.利用組織活性染色和qRT-PCR方法對CDR6基因的組織特異性表達(dá)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)該基因在擬南芥各個(gè)組織中均有表達(dá)，其中在花、莖與果莢中表達(dá)量較高，而在根、蓮座葉與苞葉中表達(dá)量相對較低。
　　2.利用激光共聚焦顯微鏡，對CDR6基因所編碼蛋白的亞細(xì)胞定位進(jìn)行了觀察，發(fā)現(xiàn)該蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)。
　　3.通過分子鑒定和遺傳分析，獲得了CDR6功能缺失的突變體cd

3、r6-1;同時(shí)，構(gòu)建CDR6過量表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化野生型植株，篩選鑒定獲得CDR6過表達(dá)植株。
　　4.對cdr6-1突變體與CDR6過表達(dá)株系進(jìn)行了鉛脅迫耐受的表型分析發(fā)現(xiàn)，與野生型相比，cdr6-1純合突變體表現(xiàn)對鉛脅迫耐受，而CDR6過表達(dá)植株表現(xiàn)對鉛脅迫敏感。表明CDR6基因負(fù)調(diào)控鉛脅迫響應(yīng)。
　　5.進(jìn)一步分析了鉛脅迫應(yīng)答相關(guān)基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)cdr6-1突變體經(jīng)重金屬鉛脅迫處理后AtPDR12、GSH1基因的轉(zhuǎn)錄水平與