實驗計數(shù)法測定細胞生長曲線

1、1實驗實驗內容：內容：計數(shù)法數(shù)法測定細胞生胞生長曲線作者：王衛(wèi)東實驗日期：2001.10.242001.10.31實驗實驗目的：目的：學習細胞計數(shù)的方法；熟悉測定生長曲線的基本原理、方法，了解其應用。實驗實驗原理：原理：一般細胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁，隨后度過長短不一的潛伏期，即進入大量分裂的指數(shù)生長期，在達到飽和密度后，細胞停止生長，進入平頂期，然后退化衰老。典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個部分，

2、其中的三個不同生長時相（潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期）是每個細胞系所共有的特征。通過測定生長曲線，不僅可以了解培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數(shù)、測定細胞絕對生長數(shù)、判斷細胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對細胞生長的影響。本實驗采用計數(shù)法測定細胞生長曲線，通過連續(xù)對細胞計數(shù)（通常為7d，一般應每次計數(shù)3瓶細胞取平均值），然后以存活細胞數(shù)對培養(yǎng)時間作圖，即得該種細胞的生長曲線。儀器、材料和器、材料和試劑試劑：1、儀器：器：CO2培養(yǎng)箱、超凈

3、工作臺、倒置顯微鏡、血球計數(shù)板2、材料：材料：培養(yǎng)瓶、試管、吸管、移液管、廢液缸、HeLa細胞、蓋玻片、酒精燈3、試劑試劑：培養(yǎng)基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶實驗實驗步驟：1、細胞懸液制備：取生長良好接近匯合的HeLa細胞，胰酶消化，再加新鮮培養(yǎng)基制成細胞懸液后計數(shù)。33、分析與、分析與討論討論由上圖可以看出，實際所得生長曲線與理論生長曲線有一定差距，主要表現(xiàn)在潛伏期和倍增時間不明顯。這可能是由于計數(shù)誤差造成的。⑴、理論上應該每人