實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)法測定細(xì)胞生長曲線

1、1實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：內(nèi)容：計(jì)數(shù)法數(shù)法測定細(xì)胞生胞生長曲線作者：王衛(wèi)東實(shí)驗(yàn)日期：2001.10.242001.10.31實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模耗康模簩W(xué)習(xí)細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法；熟悉測定生長曲線的基本原理、方法，了解其應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理：原理：一般細(xì)胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁，隨后度過長短不一的潛伏期，即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長期，在達(dá)到飽和密度后，細(xì)胞停止生長，進(jìn)入平頂期，然后退化衰老。典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個(gè)部分，

2、其中的三個(gè)不同生長時(shí)相（潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期）是每個(gè)細(xì)胞系所共有的特征。通過測定生長曲線，不僅可以了解培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)、測定細(xì)胞絕對(duì)生長數(shù)、判斷細(xì)胞活力，而且也可用于測定藥物等外來因素對(duì)細(xì)胞生長的影響。本實(shí)驗(yàn)采用計(jì)數(shù)法測定細(xì)胞生長曲線，通過連續(xù)對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)（通常為7d，一般應(yīng)每次計(jì)數(shù)3瓶細(xì)胞取平均值），然后以存活細(xì)胞數(shù)對(duì)培養(yǎng)時(shí)間作圖，即得該種細(xì)胞的生長曲線。儀器、材料和器、材料和試劑試劑：1、儀器：器：CO2培養(yǎng)箱、超凈

3、工作臺(tái)、倒置顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板2、材料：材料：培養(yǎng)瓶、試管、吸管、移液管、廢液缸、HeLa細(xì)胞、蓋玻片、酒精燈3、試劑試劑：培養(yǎng)基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)步驟：1、細(xì)胞懸液制備：取生長良好接近匯合的HeLa細(xì)胞，胰酶消化，再加新鮮培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液后計(jì)數(shù)。33、分析與、分析與討論討論由上圖可以看出，實(shí)際所得生長曲線與理論生長曲線有一定差距，主要表現(xiàn)在潛伏期和倍增時(shí)間不明顯。這可能是由于計(jì)數(shù)誤差造成的。⑴、理論上應(yīng)該每人