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1、一.常用貯液與溶液1molL亞精胺(Sperine):溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于20℃。1molL精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于20℃。10molL乙酸胺(ammoniumacetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。10mgml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(
2、組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí),無(wú)DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動(dòng),直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于20℃。1molL二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于20℃。或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管,加0.65ml的水配制成1molL二硫蘇糖醇溶液。8molL乙酸鉀(potassi
3、umacetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中,加水定容到100ml。1molL氯化鉀(KCl):溶解7.46g氯化鉀于足量的水中,加水定容到100ml。3molL乙酸鈉(sodiumacetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中,用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。0.5molLEDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5molL),混合后形成EDTA的三鈉鹽?;蚍Q(chēng)取186.1g的
4、Na2EDTA2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。1molLHEPES:將23.8gHEPES溶于約90ml的水中,用NaOH調(diào)pH(6.88.2),然后用水定容至100ml。1molLHCl:加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。25mgmlIPGT:溶解250mg的IPGT(異丙基硫代βD半乳糖苷)于10ml水中,分成小份貯存于20℃。1molLMgCl2:溶解20.3gMgCl26H2O于足量的水中,定容到10
5、0ml。成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量0.5molLTrisHCl100mmolLMgCl2100mmolLDTT2mmolLATP5mmolL鹽酸亞精胺(可選)0.5mgmlBSA(組分V)(可選)水5ml1molL貯液1ml1molL貯液1ml1molL貯液200ul100mmolL貯液50ul1mmolL貯液0.5ml10mgmL貯液2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份,貯存于20℃。100mmolLdNTP溶液(dN
6、TPsolutions)可以購(gòu)買(mǎi)到100mmolL純dNTPs貯液,80℃可貯存至少6個(gè)月。10mmolLdNTP混合液成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmolLdATP10mmolLdCTP10mmolLdGTP10mmolLdTTP水2ul100mmolLdATP貯液2ul100mmolLdCTP貯液2ul100mmolLdGTP貯液2ul100mmolLdTTP貯液12ul20%PEG80002.5MNaCl成分及終濃
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