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文檔簡介
1、臨床基礎(chǔ)檢驗學 實驗一,牛鮑計數(shù)板的使用 和白細胞計數(shù) 南通大學第二附屬醫(yī)院 檢驗醫(yī)學中心 陸永輝,實驗一、 白細胞計數(shù),1.原理:血液經(jīng)稀乙酸定量稀釋并破壞成熟紅細胞,在血細胞計數(shù)池內(nèi)計數(shù)規(guī)定區(qū)域內(nèi)的白細胞總數(shù),換算成每升血液中白細胞數(shù)。2.試劑器
2、材 白細胞稀釋液:冰乙酸 2.0ml 10g/L亞甲藍 3滴 加蒸餾水 至100ml,器材 改良牛鮑血細胞計數(shù)板及專用蓋片、微量吸管、帶孔吸頭、1ML刻度移液管、小試管、潔凈軟紗布、干棉球、光學顯微鏡。,毛細血管采血標準操作程序,操作步驟:1 采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜,半歲以下嬰幼兒通常自拇指內(nèi)
3、側(cè)或足跟兩側(cè)采血。2 輕輕按摩采血部位。3 用棉簽蘸消毒液消毒局部皮膚、待干。,4 緊捏刺血部位,使其自然充血。5 用無菌刺針穿刺取血,動作應迅速,深度 2~3mm,稍加擠壓以血液流出為宜。6 用干棉球擦去第一滴血。7 按需要依次采血。8 采血完畢,用干棉球壓住傷口,止血片刻。,微量吸管的使用,1將帶孔乳膠吸頭輕輕套在微量吸管上,連接緊密不漏氣;2拇指和中指夾住吸頭中下端,示指蓋住吸頭小孔,拇、中指輕微擠壓排出適量空
4、氣;3將微量吸管插入抗凝血,拇、中指緩慢松勁(松動快血液會吸入吸頭),吸取抗凝血至所需刻度略上方(不能有氣泡),吸管呈水平略下垂,松開示指;4用干棉球順吸管向下拭盡管外余血(保證血量準確),輕觸吸管下口吸去多余血量,使管內(nèi)抗凝血正處所需刻度;5將微量吸管插入小試管底部,三指輕微用力慢慢排出血液,用上清液沖洗管內(nèi)余血2-3次,輕搖試管混勻;6拔出微量吸管棄入污物桶。,3.操作步驟(1)加稀釋液 用移液管向小試管內(nèi)加入0.
5、38ml白細胞稀釋液。(2)采血、稀釋 用微量吸管采血20ul,拭去管外余血,釋放于小試 管底部,用上部稀釋液洗凈吸管內(nèi)余血,輕搖試管混勻,靜置等其溶血。(3)清潔計數(shù)板及蓋片(動作輕柔),夾持蓋片緣縱向前推輕放于兩側(cè)支持堤上。(4)充計數(shù)池 將小試管輕微振蕩2min,立即以一次性微量吸管吸取混勻后的白細胞懸液,充入計數(shù)池內(nèi)。靜置2-3min,使細胞沉于計數(shù)池底面。(5)調(diào)試顯微鏡 將計數(shù)板放置載物臺上,選擇(4 ×
6、; )低倍鏡,調(diào)節(jié)聚光器使光線較暗,調(diào)節(jié)旋鈕找到方格線,轉(zhuǎn)至低倍鏡(10×),調(diào)節(jié)光亮 。(6)計數(shù) 低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細胞總數(shù),壓線細胞數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右。,血細胞計數(shù)板的方格,計數(shù)板上下各一個計數(shù)池計數(shù)區(qū)域分為9個大方格四角的大方格各劃分為16個中方格中央大方格劃分為25個中方格四角的大方格為白細胞計數(shù)區(qū)中央大方格四角和正中5個中方格為紅細胞計數(shù)區(qū),結(jié)果計算白細胞總數(shù) =4大格白細胞數(shù)(N
7、) /4×10 ×20 ×106 = N÷ 20 ×109/L用△. △ ×109/L(小數(shù)點后一位)表示,注意事項,⊙稀釋液,小試管、計數(shù)板⊙采血⊙充池 ⊙計數(shù)原則⊙ WBC過多⊙ WBC過少 ⊙ WBC校正⊙顯微鏡調(diào)試,5.注意事項,(1).稀釋液密封保存,防止污染,小試管、計數(shù)板、蓋片均須清潔,以免雜質(zhì)、微粒等被誤認為
8、細胞。(2).采血時針刺深度必須適當,不能過度擠壓,防止組織液滲入或采血時間太長引起血液凝固。(3).稀釋液和采血量要準確,充分混勻,充液適量,無不足、外溢和氣泡,細胞分布均勻。(4).白細胞總數(shù)在參考范圍內(nèi),大方格間的細胞數(shù)不得相差10個以上,兩次重復計數(shù)誤差不得超過10%。(5).白細胞數(shù)量過高時,可加大稀釋倍數(shù),白細胞數(shù)量過低時,可計數(shù)8個大方格的白細胞數(shù)或取雙倍血量。,(6).一些貧血患者血液中有核紅細胞增多,會計數(shù)在白
9、細胞總數(shù)內(nèi),應校正。校正公式:白細胞校正數(shù)/L=M×(100/100+N)M為未校正前白細胞數(shù),N為在白細胞分類時,計數(shù)100個白細胞的同時計數(shù)到的有核紅細胞數(shù)。(7).調(diào)試顯微鏡將血細胞計數(shù)板平放于載物臺,低倍鏡處所充計數(shù)池正中蓋片略上方,向下微調(diào)載物臺(防止壓碎蓋片)至看清計數(shù)區(qū)域內(nèi)分隔線條為止。,6.細胞計數(shù)原則,大方格四邊壓線細胞數(shù)左不數(shù)右,數(shù)上不數(shù)下,弓形移動,7.正常參考值成人 : ( 4.
10、0-10.0)×109/L新生兒: (15.0-20.0)×109/L,8.考核評價 a. 常規(guī)考核標準 (RCS)RCS= ×100%評價: 白細胞≤ 4.0×109/L者, RCS<30%
11、 白細胞在(4.1-14.9)×109/L者 RCS<20% 白細胞≥15.0 ×109/L者 RCS<15% 超過上述標準者為不合格 b. 其他方法,,四大格所見白細胞最大值—最小值,四大格所見白細胞數(shù)平均值,9.思考題,1、某標本W(wǎng)BC為11.0x109/L,分類100個WBC見到10
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