赤潮生物的分子探針檢測方法及其應用研究.pdf

1、有害赤潮正成為越來越嚴重的全球性海洋災害。本文針對目前赤潮藻分類鑒定和快速檢測方法中的不足,從最基本的檢測方法與技術的建立和優(yōu)化入手,對赤潮生物分類、鑒定中的形態(tài)學、化學分類學和分子分類學問題以及赤潮生物原位增長率測定等基礎性科學問題開展了研究,同時也在寡核苷酸、肽核酸和細胞凝集素3類探針的設計、篩選、驗證、開發(fā)等方面開展了系列研究,建立和發(fā)展了上述3類探針的檢測應用技術,并對這些探針進行了實驗室驗證和在現場樣品的檢測中進行了應用。本文

2、的主要研究內容和結果包括以下幾個方面：1.建立了赤潮監(jiān)測中樣品采集處理、分離和純化培養(yǎng)的技術體系；建立和優(yōu)化了裸甲藻(Gymnodinium)掃描電鏡觀察技術和環(huán)境樣品的掃描電鏡觀察方法；提出了庫爾特計數是相對簡便、快捷、準確、可行的細胞計數方法；應用基于反相高效液相色譜(HPLC)的光合色素分析技術及原位熒光激發(fā)光譜測定方法,得出不同類群浮游植物對不同的營養(yǎng)鹽限制存在不同響應機制的結論；用熒光強度來監(jiān)測浮游植物生理狀態(tài)及營養(yǎng)狀態(tài)變化具

3、有一定的可行性,HPLC和原位熒光兩種方法指示浮游植物的生理狀態(tài)存在一定差異。2.基于光合色素分析的化學分類方法能從光合色素組成和比例上區(qū)分一些赤潮藻的不同屬、屬下不同種甚至同種的不同地理株系,并可為進一步鑒定和細分這些赤潮生物提供重要的分類依據；用光合色素組成及其比值構建的聚類分析能較好地反映赤潮生物間的親緣關系。用PCR產物分析的分子分類方法表明,基于18S rRNA序列檢測分析的變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術分類精確度不高；rD

4、NA序列分析相對可靠,尤其是針對轉錄間隔區(qū)(ITS)的長度和序列分析以及基于28S rRNA的D1、D2區(qū)序列分析,可以提供相對準確的分類信息,為設計分子探針提供了依據；AP-PCR是以基因組的差異分析為基礎,所以其分類信息較為豐富和全面。基于ITS序列建立的系統(tǒng)進化樹能顯示Takayama pulchellum和相關屬的親緣關系；用核糖體大亞基序列建立的系統(tǒng)發(fā)育樹可把Karlodinium屬和Takayama屬區(qū)分開,但不能很好地把環(huán)