12148.生物探針在dna損傷檢測中的應(yīng)用研究

1、THEAPPLICATIoNoFBIoPRoBEINTHEDETECTIoNoFDNADAMAGEAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofScienceBYXiongYanxiangSupervisedbyAssociateProfessorWeiWIeiSchoolofChemistryandChemicalEngineeringSouthe

2、astUniversityJune2014論文名稱：生物探針在DNA損傷檢測中的應(yīng)用研究學(xué)生姓名：熊艷翔指導(dǎo)老師：衛(wèi)偉學(xué)校名稱：東南大學(xué)摘要DNA是機(jī)體生命活動(dòng)最重要的遺傳物質(zhì)，其分子結(jié)構(gòu)完整性和穩(wěn)定性的保持對于細(xì)胞的存活和正常生理活動(dòng)的發(fā)揮具有重要意義。外界環(huán)境因素造成的DNA損傷以及基因本體在復(fù)制后修飾過程中出現(xiàn)的異常會(huì)導(dǎo)致腫瘤、胚胎發(fā)育障礙等多種疾病，對DNA損傷的研究也越來越具有生物學(xué)意義。因此建立準(zhǔn)確性好、靈敏度高、操作簡單的

3、DNA損傷檢測方法可以為某些疾病的早期預(yù)防和診斷提供重要的依據(jù)。本文圍繞DNA損傷開展了如下兩方面的工作：DNA發(fā)卡結(jié)構(gòu)通常是由分子內(nèi)雙鏈堿基問的沃森克里克氫鍵作用力形成的。本論文研究內(nèi)容之一是利用基于銀離子調(diào)節(jié)的c—Ag一c作用力形成的分子信標(biāo)來檢測DNA損傷。這種金屬離子調(diào)節(jié)形成的探針DNA較傳統(tǒng)的發(fā)卡型結(jié)構(gòu)探針更靈活，更易變換結(jié)構(gòu)。在此基礎(chǔ)上，我們結(jié)合DNA鏈置換反應(yīng)設(shè)計(jì)了一種簡單，快捷檢測DNA的方法。這種方法能夠靈敏檢測DNA

4、，特異性強(qiáng)，可以區(qū)分單堿基錯(cuò)配，并成功運(yùn)用于檢測一些有毒化學(xué)試劑，如氧化苯乙烯和亞砷酸鈉引起的DNA損傷。傳統(tǒng)的甲基化檢測方法如凝膠電泳，操作繁瑣且耗時(shí)。本文中，我們發(fā)展了一種基于氧化石墨烯和限制性內(nèi)切酶HpalI的熒光檢測DNA甲基化的新方法。HpalI能夠特異性識(shí)別切割雙鏈序列5CCGG3’。末端修飾FAM的探針DNA和目標(biāo)DNA雜交形成雙鏈DNA，探針DNA比目標(biāo)DNA多l(xiāng)o個(gè)堿基。通過調(diào)節(jié)氧化石墨烯的濃度使得雙鏈DNA未能完全脫

5、離氧化石墨烯表面，此時(shí)熒光仍然被猝滅。但是當(dāng)加入限制性內(nèi)切酶HpalI后，HpaII特異性識(shí)別雙鏈5CCGG一3’序列并且切割，形成修飾FAM的小片段DNA，這些修飾FAM的小片段DNA則不會(huì)依附在氧化石墨烯表面，熒光恢復(fù)。如果用甲基化轉(zhuǎn)移酶(MSssI)、二甲亞砜(DMSO)和乙醛(CH3CHO)處理DNA后，體系熒光無法恢復(fù)。據(jù)此，可建立DNA甲基化的熒光檢測新方法，該方法簡單，快速，有效，在甲基化酶抑制劑藥物篩選方面有很大的應(yīng)用潛