生物大分子光譜探針的研究及其分析應(yīng)用.pdf

1、核酸與蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。核酸是生物的基本遺傳物質(zhì),參與著生命活動(dòng)的各個(gè)階段。蛋白質(zhì)是生物體含量最豐富的高分子物質(zhì),肩負(fù)著各種生理功能,是生物性狀的直接表達(dá)者。因此研究核酸和蛋白質(zhì)與小分子相互作用,建立高靈敏度、低檢出限的核酸和蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法,不但對(duì)新型的藥物設(shè)計(jì)、藥理和毒件的研究提供幫助,而且在臨床檢測(cè)等方面也具有重要意義,因此成為當(dāng)前生物分析化學(xué)研究的前沿和熱點(diǎn)之一。
　　 本論文以熒光和共振光散射技術(shù)為主要研究手

2、段,結(jié)合多種分析技術(shù)尋找新的核酸和蛋白質(zhì)探針,建立了靈敏的定量檢測(cè)新方法,并進(jìn)行了機(jī)理研究和探討。本文共四部分。
　　 論文第一部分綜述了熒光和共振光光譜探針以及納米粒子在核酸和蛋白質(zhì)生物大分了分析中的研究進(jìn)展。
　　 論文第二部分,研究了金霉素、納米金和核酸的相互作用。研究表明:核酸的加入,可使得金霉素.納米金的共振光散射強(qiáng)度顯著增強(qiáng),且體系共振光散射增強(qiáng)程度與核酸的濃度在一定范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,據(jù)此建立了定量測(cè)

3、定核酸的新方法。fsDNA和smDNA的線性范圍分別為:5.0×10-8～1.5×10-5 g mL-1和6.0×10-8～1.0×10-5 g mL-1,檢出限分別為1.2×10-9 g mL-1和1.5×10-9 g mL-1,并成功應(yīng)用于實(shí)際樣品中DNA的定量測(cè)定。體系的相互作用機(jī)理研究表明:CTC-AuNPs與fsDNA之間發(fā)生了長(zhǎng)距組裝作用,導(dǎo)致了體系共振光散射強(qiáng)度的增強(qiáng)。
　　 論文第三部分,研究了異金霉素、納米金和

4、核酸的熒光猝火作用。研究發(fā)現(xiàn),核酸的加入可以使異金霉素-納米金體系的熒光發(fā)生猝滅,由此建立了一種測(cè)定核酸的簡(jiǎn)單、靈敏的熒光方法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,核酸濃度與熒光強(qiáng)度猝滅程度之間具有良好的線性關(guān)系,fsDNA和ctDNA線性范圍分別為:1.0×10-8～2.0×10-6 gmL-1和1.0×10-8～1.6×10-6 g mL-1,檢出限分別為3.2×10-9 g mL-1和4.0×10-9 g mL-1。機(jī)理研究表明:異金霉素能吸附在納

5、米金表面,產(chǎn)生表而熒光增強(qiáng)效應(yīng),而異金霉素一納米金與核酸之間主要以溝槽式結(jié)合,同時(shí)存在靜電作用。
　　 論文第四部分,研究了亞甲基蘭-SDBS和蛋白質(zhì)的相互作用,建立了定量測(cè)定蛋白質(zhì)的同步熒光方法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,MB-SDBS-蛋白質(zhì)體系同步熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)程度與蛋白質(zhì)的濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,BSA和EA的線性范圍分別是:8.0×10-8～4.0×10-5 g mL-1和1.0×10-7～3.5×10-5 g mL

6、-1,檢出限分別達(dá)到8.9×10-g mL-1和1.0×10-8 g mL-1。該方法具有穩(wěn)定性好,操作簡(jiǎn)單和靈敏度高等特點(diǎn)。機(jī)理研究表明:MB二聚體的解聚,MB-SDBS-BSA復(fù)合物的形成以及BSA-SDBS提供的疏水微環(huán)境是該體系同步熒光增強(qiáng)的主要原因。
　　 本論文的主要特點(diǎn):
　　 1、利用核酸對(duì)金霉素-納米金的共振光散射強(qiáng)度增強(qiáng)作用,建立了靈敏度高,穩(wěn)定性好的定量測(cè)定核酸的共振光散射新方法,探討其相互作用機(jī)理