溶菌酶-果膠復(fù)合體系的構(gòu)建及其在營養(yǎng)與藥物遞送體系中的應(yīng)用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)和多糖是食品體系的主要大分子成分，兩者間的相互作用某種程度上決定了食品的結(jié)構(gòu)特征，因此，研究此相互作用可為結(jié)構(gòu)化食品設(shè)計(jì)提供思路?；诘鞍踪|(zhì)與多糖相互作用而構(gòu)建的蛋白/多糖微納復(fù)合體系，因其天然無毒、生物相容性好及生物可降解性佳，成為新型營養(yǎng)素及藥物的包埋和輸送載體，應(yīng)用于食品和健康領(lǐng)域。本論文系統(tǒng)研究了不同條件下溶菌酶與果膠的相互作用機(jī)制，探討了溶菌酶/果膠納米復(fù)合物及納米凝膠作為營養(yǎng)素及藥物遞送載體的應(yīng)用前景。主要研究內(nèi)容和結(jié)

2、果如下:
　　(1)溶菌酶與果膠相互作用的研究。通過測定復(fù)合體系的濁度、電位及微觀結(jié)構(gòu)來研究pH、蛋白/多糖質(zhì)量比、離子強(qiáng)度和溫度對溶菌酶與果膠形成的復(fù)合物的影響。結(jié)果顯示:在一定的質(zhì)量比，高pH區(qū)域(pH＞pI)，溶菌酶與果膠均帶負(fù)電荷，兩者在溶液中呈現(xiàn)共溶;隨著pH降低至pI以下，溶菌酶帶正電荷與帶負(fù)電荷的果膠形成復(fù)合物;進(jìn)一步酸化，體系不穩(wěn)定聚集形成不溶性復(fù)合物，當(dāng)果膠的羧基質(zhì)子化后不溶性復(fù)合物解離。溶菌酶/果膠復(fù)合體系的可

3、溶性復(fù)合物開始形成(pHc)和不溶性復(fù)合物開始形成(pHψ)的pH值隨質(zhì)量比的增加而增大。溫度對體系濁度基本無影響，而離子強(qiáng)度極大地影響復(fù)合物的形成，因此推斷溶菌酶與果膠的相互作用是靜電相互作用。利用DSC、CD等手段表征發(fā)現(xiàn)溶菌酶與果膠形成復(fù)合物后，提高溶菌酶的熱穩(wěn)定性及二級結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
　　(2)溶菌酶/果膠復(fù)合體系對EGCG的包載作用。利用熒光、CD等光譜手段研究EGCG與溶菌酶互作后溶菌酶分子構(gòu)象的變化，利用EGCG對溶菌

4、酶內(nèi)源熒光的猝滅作用研究其與溶菌酶的相互作用、結(jié)合常數(shù)及結(jié)合力。結(jié)果顯示:EGCG對溶菌酶的猝滅為靜態(tài)猝滅過程，兩者形成復(fù)合物，結(jié)合力為氫鍵作用，EGCG與溶菌酶/果膠復(fù)合體系的結(jié)合常數(shù)比與純的溶菌酶作用的低;EGCG與溶菌酶互作后引起溶菌酶微環(huán)境及構(gòu)象的改變，二級結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)向折疊狀態(tài)。采用動態(tài)光散射(DLS)、HPLC，測定負(fù)載EGCG溶菌酶/果膠復(fù)合體系的粒徑及包封率隨溶菌酶/EGCG摩爾比的變化。果膠的加入可有效抑制高濃度EGCG誘導(dǎo)

5、溶菌酶聚集現(xiàn)象，質(zhì)量比為1∶1，負(fù)載EGCG的溶菌酶/果膠復(fù)合體系的粒徑變化較小，負(fù)載量較高。以EGCG對DPPH、ABTS的自由基清除能力來評價(jià)抗氧化活性，納米復(fù)合體系包埋的EGCG仍具有較好的抗氧化能力。溶菌酶/果膠納米復(fù)合體系對EGCG的包埋效果和穩(wěn)定能力更佳，拓寬了EGCG在食品中的應(yīng)用。
　　(3)溶菌酶/果膠納米凝膠的構(gòu)建及藥物遞送的研究。溶菌酶與果膠形成靜電復(fù)合物，加熱使溶菌酶凝膠化，可制備納米凝膠。采用DLS測定p

6、H、質(zhì)量比、加熱時(shí)間對納米凝膠的粒徑、分散性、ξ-電位的影響，通過TEM、FT-IR、XPS表征納米凝膠的形貌和組裝機(jī)理。在最佳參數(shù)下制備的納米凝膠為規(guī)則的球形，平均粒徑為109 nm，PDI為0.12，ξ-電位為-38.5mV。利用該納米凝膠實(shí)現(xiàn)了對甲氨蝶呤(MTX)的包載，并評價(jià)包載后藥物的抗癌特性。MTX-納米凝膠仍為規(guī)則球形、平均粒徑為91.36 nm、包封率為58.6％、負(fù)載量為17.6％。透析法研究MTX-納米凝膠的體外釋藥