堿性體系下高穩(wěn)纖維素酶的構(gòu)建.pdf

1、纖維素是儲(chǔ)量最多的可再生資源，充分地利用纖維素資源得到了普遍的關(guān)注。由于纖維素的自身高度結(jié)晶結(jié)構(gòu)嚴(yán)重阻礙了纖維素的利用，因此尋找有效溶解纖維素的綠色溶劑成為了關(guān)鍵。氫氧化鈉/尿素水溶液是目前公認(rèn)的有效溶解纖維素的綠色溶劑。但是纖維素酶在堿性體系下，活性會(huì)降低，給降解纖維素帶來了許多困難。本課題采用大分子結(jié)合修飾的方法構(gòu)建在堿性體系下具有高穩(wěn)性的纖維素酶并對(duì)其動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了測(cè)定，為纖維素的綜合利用提供了有利的參考。
　　本文主要采用分

2、子量為5000,10000,20000單甲氧基聚乙二醇馬來酰亞胺和分子量為5000的單甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺對(duì)纖維素酶巰基和氨基進(jìn)行化學(xué)修飾，制得了四種修飾纖維素酶。測(cè)定了修飾纖維素酶的平均巰基修飾度和氨基修飾度及在氫氧化鈉/尿素體系中的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。利用紅外光譜和原子力顯微鏡對(duì)修飾纖維素酶和天然纖維素酶進(jìn)行了表征。
　　利用修飾纖維素酶和天然纖維素酶在同種體系下進(jìn)行降解羧甲基纖維素，測(cè)定修飾纖維素酶活性。將修飾纖維素酶降解羧甲基

3、纖維素的反應(yīng)液分別放置在0℃,-5℃,-10℃和-15℃進(jìn)行纖維素酶的析出。并將析出的修飾纖維素酶通過兩種方法來測(cè)其酶活，一種是直接向反應(yīng)液中加入羧甲基纖維素，另一種是將反應(yīng)液倒出在加入羧甲基纖維素。
　　根據(jù)纖維素酶由三種單酶組成，分別降解了不同的底物：外切葡聚糖酶降解微晶纖維素、內(nèi)切葡聚糖酶降解羧甲基纖維素和纖維二糖酶降解纖維素二糖，以測(cè)其酶活，結(jié)果表明纖維二糖酶的活性為最高，纖維二糖酶對(duì)復(fù)合纖維素酶降解纖維素的影響最大。向復(fù)