黃鯽蛋白肽美拉德產(chǎn)物的抑菌機(jī)理及對(duì)小鼠免疫功能的影響.pdf

1、黃鯽魚(Setipinna taty)營養(yǎng)豐富，味美價(jià)廉。但由于黃鯽魚體積小，不論是食用還是加工，利用率比較低。在前期研究中，以蛋白酶水解法制備的黃鯽蛋白抗菌肽具有很強(qiáng)的抑菌作用，但是魚腥味較重。而后通過美拉德反應(yīng)提高了黃鯽蛋白抗菌肽的風(fēng)味性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)黃鯽蛋白抗菌肽美拉德產(chǎn)物(HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物)具有較強(qiáng)的抑菌活性。因此，本論文在前期研究基礎(chǔ)上，以HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物為研究對(duì)象，探究其抑菌機(jī)制和有效抑菌組分結(jié)構(gòu)，并對(duì)其在免

2、疫提高方面的應(yīng)用進(jìn)行探討。主要研究包括:(1)HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物的抑菌機(jī)理;(21)HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物中抗菌肽組分的分離與鑒定;(3)HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物對(duì)小鼠免疫功能的影響。
　　HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物與處于對(duì)數(shù)生長期的大腸桿菌菌懸液作用，通過掃描電鏡-觀察菌體超微結(jié)構(gòu)變化，結(jié)合外膜和內(nèi)膜檢測，分析胞內(nèi)各種酶的釋放情況，同時(shí)采用馬爾文電位儀測定人工脂質(zhì)體與HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物作用后粒徑變化。結(jié)果表

3、明:HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物與大腸桿菌作用1h即可造成細(xì)胞膜損傷;與大腸桿菌作用1h，外膜和內(nèi)膜的滲透性增強(qiáng);作用5h胞內(nèi)乳酸脫氫酶釋放量增加，大腸桿菌的ATP含量也顯著降低。人工脂膜與黃鯽蛋白肽美拉德產(chǎn)物作用后，平均粒徑從170 nm增加到230 nm，說明HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞膜具有聚集作用。由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物可通過吸附作用達(dá)到菌體表面，引起菌體聚集，而后通過膜損傷方式增加外膜和內(nèi)膜滲透性，造成

4、胞內(nèi)物質(zhì)外泄，從而達(dá)到抑菌作用。
　　采用離子交換層析、分子篩分離和反相高效液相色譜分離技術(shù)，通過抑菌活性跟蹤檢測法從HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物中分離得到一抑菌組分。然后，采用LC-ESI-MS聯(lián)用分析法分離鑒定出7條抗菌肽，分別是RVAPEEHPTL、WLPVVR、 FFTQATDLLSR、 VLLLWR、 VLLVLLR、 VLLALWR和LLSWYDNEFGYSNR?；瘜W(xué)合成其中5條肽(肽1 RVAPEEHPTL，肽2WLP

5、VVR，肽3 VLLLWR，肽4 VLLVLLR和肽5 VLLALWR)，抑菌結(jié)果顯示除了肽4外，其余4條合成肽對(duì)大腸桿菌均有抑菌活性。進(jìn)一步選擇肽2(WLPVVR)為出發(fā)肽，合成3條類似肽2-1(WLPVVH)、肽2-2(WLPVVE)和肽2-3(LPVVR)，抑菌結(jié)果表明合成的類似肽雖然保留了抑菌作用，但抑菌活性發(fā)生不同程度改變，說明肽序列組成對(duì)其抑菌性有影響。
　　以昆明種小鼠為對(duì)象，通過小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，測定小鼠胸腺指數(shù)和脾臟

6、指數(shù)，同時(shí)測定小鼠血清和肝勻漿谷胱甘肽過氧化物酶、總超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活力，以及測定脂質(zhì)過氧化物含量和還原型谷胱甘肽含量。結(jié)果表明:HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物對(duì)胸腺指數(shù)以及脾臟指數(shù)的影響較小，與對(duì)照組相比，差異不顯著。高劑量的HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物對(duì)小鼠肝臟與血清中谷胱甘肽過氧化物酶活力值增加有一定的幫助。高劑量組小鼠肝臟中總超氧化物酶活力也有所提高。HAHp-葡萄糖美拉德產(chǎn)物對(duì)于降低小鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物含量與提高還原型谷胱