斷乳后小鼠長期腸道菌群失衡對(duì)免疫功能的影響.pdf

1、目的：
　　研究斷乳后長期腸道菌群缺失和菌群自然恢復(fù)，來觀察微生態(tài)菌群的恢復(fù)規(guī)律和免疫系統(tǒng)的影響變化，闡述腸道菌群與宿主免疫系統(tǒng)的發(fā)生與發(fā)展關(guān)系，為利用腸道菌群改善免疫功能打下基礎(chǔ)，也為臨床上長期免疫低下患者的免疫功能的恢復(fù)，提供新思路。
　　方法：
　　選擇斷乳后清潔級(jí)別Balb/c雄性小鼠60只，分兩組，頭孢曲松鈉灌服組和正常組。頭孢曲松鈉灌服組小鼠用200mg/ml/kg頭孢曲松鈉灌服，一日2次，間隔6-8小時(shí)，

2、連續(xù)灌服90天，之后停止頭孢曲松鈉干預(yù)，觀察60天，兩組分別于第30天、60天、90天、120天、150天處死小鼠稱重，收集樣本進(jìn)行腸道菌群、免疫組織、免疫細(xì)胞、免疫分子的檢測。
　　應(yīng)用PCR-DGGE方法對(duì)各組小鼠腸道菌群進(jìn)行分析，對(duì)有明顯差異的條帶進(jìn)行切膠回收、純化、測序，比對(duì)細(xì)菌種類。
　　應(yīng)用ELISA方法對(duì)兩組小鼠血清IgG、IL-4和IL-17水平進(jìn)行檢測；對(duì)胸腺中SCF、GMCSF和IL-7水平進(jìn)行檢測；對(duì)小

3、腸粘液中sIgA水平進(jìn)行檢測。
　　應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)脾臟中T細(xì)胞和B細(xì)胞的含量進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：
　　1.長期灌服頭孢曲松鈉對(duì)斷乳小鼠體重的影響
　　與正常組比較，頭孢曲松鈉灌服組小鼠體重在30天時(shí)有所升高（p<0.05），隨著時(shí)間推移，兩組小鼠體重均有所上升；頭孢曲松鈉灌服組小鼠體重始終高于正常組，在停止灌服頭孢曲松鈉后，灌服組小鼠體重恢復(fù)正常。
　　2.長期灌服頭孢曲松鈉對(duì)斷乳小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的

4、影響
　　與正常組小鼠相比，頭孢曲松鈉灌服組斷乳小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)沒有變化。停止使用頭孢曲松鈉干預(yù)后的第30天，第60天，脾指數(shù)、胸腺指數(shù)沒有變化（p>0.05）。
　　3.長期灌服頭孢曲松鈉對(duì)斷乳小鼠脾臟內(nèi)T、B細(xì)胞含量的影響
　　與正常組小鼠相比，頭孢曲松鈉灌服斷乳小鼠脾臟內(nèi)T細(xì)胞含量沒有變化（p>0.05）。頭孢曲松鈉灌服的第60天，第90天，脾臟內(nèi)B細(xì)胞含量下降（p<0.05）,停止頭孢曲松鈉干預(yù)后的第30天

5、，第60天，脾臟內(nèi)B細(xì)胞含量上升，與正常組無差異（p>0.05）。
　　4.長期灌服頭孢曲松鈉對(duì)斷乳小鼠血清免疫因子的影響
　　與正常組相比，灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠血清IgG含量在第30天，60天沒有變化，在第90天降低（p<0.05），在停止灌服頭孢曲松鈉后，第30天，60天，小鼠血清IgG濃度明顯降低（p<0.01）；與正常組相比，灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠血清IL-4含量在第30天、60天有所下降，在第60天明顯降低（

6、p<0.01），在90天有所上升（p<0.05）。在停止灌服頭孢曲松鈉后第30天，60天時(shí)，血清IL-4含量有所上升（p<0.05），且高于正常組值趨于穩(wěn)定；正常組相比，灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠血清IL-17含量始終高于正常組（p<0.05），在停止灌服抗生素后第30天，第60天，血清IL-17含量均高于正常值（p<0.05），且在第60天時(shí),血清IL-17含量明顯升高（p<0.01）。
　　5.長期灌服頭孢曲松鈉對(duì)斷乳小鼠胸腺免

7、疫分子的影響
　　與正常組相比，灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠胸腺SCF分子含量始終低于正常組（p<0.05），在停止灌服頭孢曲松鈉后第30天，SCF的含量略有升高，但幅度依然低于正常組（p<0.05）；灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠胸腺GMCSF分子含量始終低于正常組（p<0.05），在停止灌服頭孢曲松鈉后，GMSCF的含量略有升高，但幅度依然低于正常組（p<0.05）；灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠胸腺IL-7含量始終低于正常組（p<0.05）

8、，在停止灌服頭孢曲松鈉自然恢復(fù)后，IL-7含量略有升高，但幅度依然低于正常組（p<0.05）。
　　6.長期灌服頭孢曲松鈉對(duì)斷乳小鼠小腸粘液sIgA的影響
　　與正常組相比，灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠腸粘液sIgA含量始終低于正常組（p<0.05），在停止灌服頭孢曲松鈉后第30天，SCF的含量略有下降，在停止灌服頭孢曲松鈉后第60天，SCF的含量略有上升，但幅度依然低于正常組（p<0.05）7.長期灌服頭孢曲松鈉對(duì)斷乳小鼠腸道

9、菌群的影響
　　與正常組比較，灌服頭孢曲松鈉期間，灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠腸道菌群DGGE電泳條帶數(shù)顯著減少（p<0.05）。停止灌服頭孢曲松鈉后第30天，灌服頭孢曲松鈉組斷乳小鼠腸道菌群條帶數(shù)明顯增加，至第60天，DGGE電泳條帶數(shù)恢復(fù)，接近正常組斷乳小鼠DGGE電泳條帶數(shù)的水平。
　　結(jié)論：
　　1.長期灌服頭孢曲松鈉可導(dǎo)致斷乳小鼠腸道菌群失衡，在停止灌服頭孢曲松鈉后，菌群得到自然恢復(fù)。
　　2.長期菌群失衡

10、可導(dǎo)致斷乳小鼠體重升高，脾指數(shù)，胸腺指數(shù)沒有變化，對(duì)脾臟內(nèi)T細(xì)胞含量影響不大，可導(dǎo)致脾臟內(nèi)B細(xì)胞含量下降。
　　3.長期菌群失衡可導(dǎo)致斷乳小鼠血清IgG含量降低、血清IL-4含量降低、血清IL-17含量升高；菌群自然恢復(fù)后，斷乳小鼠血清IgG含量持續(xù)下降、血清IL-4含量和血清IL-17含量較之前無明顯變化。
　　4.長期菌群失衡可導(dǎo)致斷乳小鼠胸腺SCF含量降低、胸腺GMCSF含量降低、胸腺IL-7含量降低；菌群自然恢復(fù)后，