基于貴金屬納米顆粒的表面增強(qiáng)拉曼散射免疫層析分析方法的研究.pdf

1、表面增強(qiáng)拉曼光譜（Surface-Enhanced Raman Scattering，SERS）由于其對(duì)樣品檢測(cè)的非破壞性及高靈敏性等優(yōu)勢(shì)被廣泛應(yīng)用于無(wú)機(jī)材料、單分子檢測(cè)、化工檢測(cè)、醫(yī)學(xué)研究、傳感器及生物檢測(cè)方向。免疫層析技術(shù)分析（Immunochromatographic Assay，ICA）由于其操作簡(jiǎn)便、成本低及易于保存等優(yōu)勢(shì)被廣泛應(yīng)用于食品安全、毒品的快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。我們通過(guò)結(jié)合表面增強(qiáng)拉曼光譜和免疫層析技術(shù)開(kāi)發(fā)出了一種新型的檢測(cè)

2、手段即表面增強(qiáng)拉曼光譜免疫層析技術(shù)（SERS-ICA）。
　　本研究主要內(nèi)容為以下三個(gè)部分：
　　一．通過(guò)在膠體金納米粒子上連接拉曼標(biāo)記物[即對(duì)巰基苯甲酸（MBA）]和抗呋喃它酮代謝產(chǎn)物[即3-氨基-5-嗎啉基甲基-2-惡唑烷酮（AMOZ）]的單克隆抗體（Ab），制備了Ab-Au-MBA免疫探針，并將其應(yīng)用到SERS-ICA中，定量檢測(cè)組織樣品和尿樣中的AMOZ。該層析分析在15min內(nèi)結(jié)束，通過(guò)對(duì)免疫層析試劑條檢測(cè)線（T線

3、）上MBA的信號(hào)的測(cè)定對(duì)AMOZ進(jìn)行定量檢測(cè)。最終檢測(cè)AMOZ的IC50和檢出限分別為0.04ng mL-1和0.28pg mL-1。并且與其它三種硝基呋喃類藥物和五種非硝基呋喃類的化合物不存在交叉反應(yīng)。在動(dòng)物組織樣品和尿樣中的加標(biāo)回收率在87.8-105.9％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4-9.0%（n=3）。結(jié)果顯示該 SERS-ICA方法可直接檢測(cè)AMOZ，靈敏度高、特異性、穩(wěn)定性及精密度均良好。
　　二．應(yīng)用一種新型核殼型Au

4、@Ag納米粒子，并將MBA包裹在核殼中間形成一種夾心結(jié)構(gòu)，在Ag殼連接上抗苯乙醇胺A（一種新出現(xiàn)的β-激動(dòng)劑）的多克隆抗體，制備了帶有拉曼活性物的免疫探針，該核殼型納米探針的拉曼增強(qiáng)效果明顯優(yōu)于單純的膠體金。我們將這種探針用于免疫層析分析對(duì)苯乙醇胺A（PA）進(jìn)行檢測(cè)，層析分析在15min內(nèi)結(jié)束，IC50和檢出限分別為0.06ng mL-1和0.32pg mL-1，相對(duì)于其它免疫分析方法提高了1-3個(gè)數(shù)量級(jí)，顯示出了高的靈敏性。另外三種β

5、-激動(dòng)劑（萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅及沙丁胺醇）不存在交叉反應(yīng)，證明該SERS-ICA有良好的特異性。通過(guò)對(duì)尿樣進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其加標(biāo)回收率在99.9%-101.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.6-5.8%。結(jié)果顯示該SERS-ICA方法可以高靈敏、特異性、準(zhǔn)確分析尿樣中的苯乙醇胺A，并可推廣用于食品中其它分析物的檢測(cè)。
　　三．在成功開(kāi)發(fā)出兩種基于SERS-ICA的分析方法之后，我們對(duì)其它可以進(jìn)行拉曼增強(qiáng)的新型納米粒子進(jìn)行了研究，