落射熒光顯微術(shù)高通量分析單細(xì)胞中的酯酶.pdf

1、本論文用落射熒光顯微術(shù)對單細(xì)胞分析進(jìn)行了一些研究。共分三章：第一章落射熒光顯微術(shù)檢測胃癌細(xì)胞中的酯酶。第二章．落射熒光顯微術(shù)高通量檢測單個(gè)胃癌細(xì)胞中的酯酶。第三章．高通量微流控芯片分析單個(gè)胃癌細(xì)胞中的酯酶。 第一章我們采用落射熒光顯微術(shù)對胃癌細(xì)胞提取液中酯酶的活性進(jìn)行了鑒定。在這部分實(shí)驗(yàn)中是以FDA作為底物，F(xiàn)DA這種物質(zhì)可以通過細(xì)胞膜自由地滲透到細(xì)胞里面去，在細(xì)胞內(nèi)酯酶的催化作用下發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生一種新的物質(zhì)，這種物質(zhì)在激光的激發(fā)

2、下會(huì)產(chǎn)生熒光，我們通過分析這種生成物質(zhì)的熒光強(qiáng)度來實(shí)現(xiàn)對酯酶的測定。我們首先對實(shí)驗(yàn)的最佳條件進(jìn)行研究，包括采用底物FDA的濃度、緩沖溶液的pH、FDA在酯酶作用下反應(yīng)的時(shí)間與生成物質(zhì)熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系等。最終通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量。 第二章我們用落射熒光顯微術(shù)高通量檢測單個(gè)胃癌細(xì)胞中的酯酶，研究了一種高通量檢測細(xì)胞的方法。我們將細(xì)胞在滅菌之后的反應(yīng)池中貼壁以后，加入FDA溶液進(jìn)行孵育。FDA會(huì)自由地滲透到細(xì)胞里面去，在細(xì)胞內(nèi)

3、酯酶的作用下產(chǎn)生一種物質(zhì)。我們通過分析這種物質(zhì)的熒光強(qiáng)度來檢測細(xì)胞內(nèi)的酯酶。在這部分實(shí)驗(yàn)中我們對底物的濃度、反應(yīng)時(shí)間等進(jìn)行了研究。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法對單個(gè)細(xì)胞中的酯酶活性進(jìn)行了高通量測定。 第三章我們用微流控芯片通過落射熒光顯微鏡對細(xì)胞中的酯酶進(jìn)行了高通量分析。在這部分實(shí)驗(yàn)中，我們自己制作了微流控芯片，芯片通道采用PDMS膜制成，然后將膜封接到蓋玻片上。以FDA作為細(xì)胞中酯酶的底物，我們利用這種簡易微流控芯片對由酯酶引起反應(yīng)