工程大腸桿菌生產(chǎn)酪醇葡萄糖苷.pdf

1、苯乙醇糖苷是一類植物源天然產(chǎn)物，以苯乙醇基及其衍生物（羥基、甲氧基苯乙醇）為苷元，以葡萄糖、鼠李糖等為糖配基。苯乙醇糖苷具有免疫調(diào)節(jié)、抗癌癥、抗疲勞、抗衰老，保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理活性，廣泛應(yīng)用于保健食品、環(huán)境適應(yīng)藥品以及化妝品行業(yè)。由于直接從植物提取或者化學(xué)合成制備糖苷工藝復(fù)雜且效率很低，通過合成生物學(xué)策略，構(gòu)建微生物細(xì)胞工廠合成苯乙醇糖苷，成為新的研究熱點(diǎn)。
　　本文針對最簡單的苯乙醇衍生物——酪醇的糖基化產(chǎn)物為研究對象，設(shè)計(jì)

2、了大腸桿菌異源合成酪醇葡萄糖苷的生物合成途徑。利用酪氨酸合成途徑的4-羥基苯丙酮酸，經(jīng)過酮基脫羧和醇脫氫酶催化，生成酪醇；以UDP-葡萄糖為糖供體，由糖基轉(zhuǎn)移酶催化合成兩種酪醇糖苷——紅景天苷和苯乙醇基糖苷。設(shè)計(jì)并全合成了來源于畢赤酵母和釀酒酵母的酮基脫羧酶基因（synkdc3和 synkdc4， synaro10），在大腸桿菌中異源表達(dá)，發(fā)現(xiàn)synkdc4生成酪醇能力最強(qiáng)。改造高產(chǎn)酪氨酸底盤大腸桿菌 BAK10，敲除酪醇合成競爭途徑關(guān)

3、鍵基因 feaB，表達(dá)synkdc4，構(gòu)建了高產(chǎn)酪醇的底盤細(xì)胞 BMT19，通過分批補(bǔ)糖發(fā)酵96h，酪醇產(chǎn)量最高達(dá)到916.22mg/L。
　　利用λRed同源重組技術(shù)，改造BL21（DE3），通過敲除feaB、ushA和過表達(dá)pgm和galU的整合，構(gòu)建了UDP-葡萄糖強(qiáng)化的底盤菌株BMS10。設(shè)計(jì)并合成了來源于紅景天植物和地衣芽孢桿菌的糖基轉(zhuǎn)移酶基因（synugt72b14和synugt73b6， synyjic），進(jìn)行優(yōu)化，