重組大腸桿菌生物合成白藜蘆醇的條件研究.pdf

1、白藜蘆醇（Resveratro1）是許多植物受到真菌感染、紫外照射或病理狀況下產(chǎn)生的一種植物抗毒素。具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌消炎、免疫調(diào)節(jié)等功效，不僅如此，研究表明，白藜蘆醇還具有延年益壽的功能?？蓮V泛應(yīng)用于藥物、保健食品和護膚品等領(lǐng)域，市場需求巨大，目前主要由虎杖花生等植物提取，產(chǎn)品產(chǎn)品純度較差，多以粗產(chǎn)品使用或出口，產(chǎn)品附加值較低。也可以化學(xué)合成但各種方法存在合成線路長、生產(chǎn)成本高、環(huán)境污染嚴重等問題，因此植物提取和化學(xué)合成無法規(guī)模

2、化生產(chǎn)。目前國外通過將影響白藜蘆醇生產(chǎn)的兩種酶STS(茋合酶)和4CL（香豆酰連接酶）導(dǎo)入大腸桿菌和酵母菌中，添加代謝前體底物對香豆酸經(jīng)過微生物代謝生成白藜蘆醇。
　　本研究采用通過基因工程技術(shù)將STS和4CL基因?qū)氲玫降闹亟M大腸桿菌，所使用的質(zhì)粒攜帶大腸桿菌組成型強啟動子，無需誘導(dǎo)劑的加入，保證了酶的表達和安全性。通過質(zhì)粒提取以及PCR測序等操作來確定工程菌的準確性以及其質(zhì)粒穩(wěn)定性的測定。隨后對大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)白藜蘆醇過程中發(fā)

3、酵培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)化條件進行了優(yōu)化，通過單因素實驗確定了轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中最優(yōu)培養(yǎng)基是 YM9培養(yǎng)基。最優(yōu)培養(yǎng)條件如下：最適培養(yǎng)溫度為37℃，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，培養(yǎng)基初始pH為7.0，最適底物添加方式為重懸后添加，最適底物添加濃度1.2g/L，最適重懸時間重懸前培養(yǎng)10h。實驗過程中建立了白藜蘆醇的液相檢測體系：C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相:乙腈:水=40:60（0.1％乙酸），VVD306nm，流速0.5mL/min