透骨草殺蟲成分提取方法及分離研究.pdf

1、透骨草(Phryma lepwstachya L.)是透骨草科透骨草屬的多年生草本植物，在東亞一直作為傳統(tǒng)的殺蟲植物來使用。為了進一步的研究和開發(fā)這一殺蟲植物，本論文以透骨草為研究對象，研究了其殺蟲活性成分在植株不同部位的分布情況，探討了其提取工藝，對殺蟲活性較高的部分進行了分離純化并建立了快速分離高活性成分Haedoxan A的方法，并對分離得到的化合物進行了殺蟲活性評價。主要研究結(jié)果如下:
　　1.針對透骨草植株的不同部位（根

2、和莖葉），采用不同提取方法（冷浸法和超聲法）以及不同溶劑（石油醚、乙酸乙酯、甲醇）進行提取。結(jié)果表明:透骨草殺蟲活性成分主要分布在根中，而且處于中等偏小極性段中，乙酸乙酯部分最多。
　　2.在活性追蹤指導下，使用不同的常見色譜分離手段（萃取、硅膠柱色譜、半制備高效液相色譜）和重結(jié)晶等方法對活性高的部分進行分離純化，根據(jù)所得化合物的理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)（質(zhì)譜、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC、COSY等），對

3、分離得到的單體化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。一共分離鑒定了6個單體化合物，分別是透骨草靈Ⅰ、透骨草靈Ⅱ、雙氧木脂素A、雙氧木脂素E、豆甾醇、β-谷甾醇。
　　3.建立了快速獲取高殺蟲活性成分雙氧木脂素A的方法。將透骨草根用甲醇超聲提取后用乙酸乙酯萃取，用石油醚∶乙酸乙酯=100∶0-0∶100進行硅膠柱層析，利用TLC紫外顯色合并相似流分，用粘蟲追蹤活性最高段組分，用石油醚∶丙酮=3∶1進行硅膠柱層析，用粘蟲（Mythimna separa

4、ta）活性追蹤合并活性流分，用甲醇重結(jié)晶可直接得到雙氧木脂素A。
　　4.對分離得到的化合物進行了殺蟲活性評價。分離得到的化合物主要對鱗翅目的昆蟲具有較高活性且主要表現(xiàn)為胃毒活性，而對蘋果黃蚜(Aphis ciricola van der Goot)、溫室白粉虱（Trialeurodes vaporariorum）和酢漿草如葉螨（Tetranychina harti.Ewing）均無活性。其中透骨草靈Ⅰ對粘蟲（Mythimna s

5、eparata）僅表現(xiàn)麻醉活性，對3齡粘蟲4h時的麻醉中濃度NC50為3450μg/mL，而對小菜蛾（Plutella xylostella）有毒殺活性，48h胃毒致死中濃度為1432μg/mL。雙氧木脂素A對3齡粘蟲胃毒活性致死中濃度LC50為17.06μg/mL，對3齡粘蟲24 h觸殺LC50為1123μg/mL，對3齡小菜蛾幼蟲48 h的致死中濃度LC50分別為857μg/mL。雙氧木脂素E對3齡粘蟲胃毒活性致死中濃度LC50為6