透骨草殺蟲成分提取方法及分離研究.pdf

1、透骨草(Phryma lepwstachya L.)是透骨草科透骨草屬的多年生草本植物，在東亞一直作為傳統(tǒng)的殺蟲植物來(lái)使用。為了進(jìn)一步的研究和開發(fā)這一殺蟲植物，本論文以透骨草為研究對(duì)象，研究了其殺蟲活性成分在植株不同部位的分布情況，探討了其提取工藝，對(duì)殺蟲活性較高的部分進(jìn)行了分離純化并建立了快速分離高活性成分Haedoxan A的方法，并對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行了殺蟲活性評(píng)價(jià)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.針對(duì)透骨草植株的不同部位（根

2、和莖葉），采用不同提取方法（冷浸法和超聲法）以及不同溶劑（石油醚、乙酸乙酯、甲醇）進(jìn)行提取。結(jié)果表明:透骨草殺蟲活性成分主要分布在根中，而且處于中等偏小極性段中，乙酸乙酯部分最多。
　　2.在活性追蹤指導(dǎo)下，使用不同的常見色譜分離手段（萃取、硅膠柱色譜、半制備高效液相色譜）和重結(jié)晶等方法對(duì)活性高的部分進(jìn)行分離純化，根據(jù)所得化合物的理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)（質(zhì)譜、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC、COSY等），對(duì)

3、分離得到的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。一共分離鑒定了6個(gè)單體化合物，分別是透骨草靈Ⅰ、透骨草靈Ⅱ、雙氧木脂素A、雙氧木脂素E、豆甾醇、β-谷甾醇。
　　3.建立了快速獲取高殺蟲活性成分雙氧木脂素A的方法。將透骨草根用甲醇超聲提取后用乙酸乙酯萃取，用石油醚∶乙酸乙酯=100∶0-0∶100進(jìn)行硅膠柱層析，利用TLC紫外顯色合并相似流分，用粘蟲追蹤活性最高段組分，用石油醚∶丙酮=3∶1進(jìn)行硅膠柱層析，用粘蟲（Mythimna separa

4、ta）活性追蹤合并活性流分，用甲醇重結(jié)晶可直接得到雙氧木脂素A。
　　4.對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行了殺蟲活性評(píng)價(jià)。分離得到的化合物主要對(duì)鱗翅目的昆蟲具有較高活性且主要表現(xiàn)為胃毒活性，而對(duì)蘋果黃蚜(Aphis ciricola van der Goot)、溫室白粉虱（Trialeurodes vaporariorum）和酢漿草如葉螨（Tetranychina harti.Ewing）均無(wú)活性。其中透骨草靈Ⅰ對(duì)粘蟲（Mythimna s

5、eparata）僅表現(xiàn)麻醉活性，對(duì)3齡粘蟲4h時(shí)的麻醉中濃度NC50為3450μg/mL，而對(duì)小菜蛾（Plutella xylostella）有毒殺活性，48h胃毒致死中濃度為1432μg/mL。雙氧木脂素A對(duì)3齡粘蟲胃毒活性致死中濃度LC50為17.06μg/mL，對(duì)3齡粘蟲24 h觸殺LC50為1123μg/mL，對(duì)3齡小菜蛾幼蟲48 h的致死中濃度LC50分別為857μg/mL。雙氧木脂素E對(duì)3齡粘蟲胃毒活性致死中濃度LC50為6