葛根有效成分提取及分離純化工藝研究.pdf

1、葛根(Radix Puerariae)系豆科植物野葛Pueraia lobata(Willd.) Ohwi的干燥根,素有“千年人參”的美譽,是國家衛(wèi)生部批準的藥食兩用植物。具有提高免疫、解熱、護肝、抗氧化、降血糖、改善心腦血管疾病等功效,是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)上的常用藥物。大量研究表明,葛根黃酮是葛根中的主要活性成分,其中以葛根素的含量最高。葛根素與葛根總黃酮的含量通常被作為評價葛根質(zhì)量的標準。
　　本文以葛根為原料,主要從以下幾個方面進行了

2、研究。分別采用乙醇回流提取法、木瓜蛋白酶酶解輔助提取法研究了葛根有效成分的提取工藝;另外,對葛根有效成分進行了分離純化工藝研究,探索出了一條較為成熟的分離工藝路線。最后,對葛根提取物進行了抗氧化能力的比較。
　　1.乙醇回流法提取葛根中的有效成分:以葛根中主要活性成分葛根素和葛根總黃酮得率為指標,利用紫外分光光度計(UV)和高效液相色譜(HPLC)分別測定了葛根素和葛根總黃酮的含量,全面評價了不同提取條件對葛根素和葛根總黃酮得率的

3、影響。乙醇回流法提取葛根有效成分的提取工藝為:用20倍量50％的乙醇溶液作提取溶劑,每次提取120 min,提取2次。葛根素得率為1.998%,葛根總黃酮得率為8.914%。
　　2.木瓜蛋白酶酶解輔助提取葛根中的有效成分:首先考察了酶解時間、酶解濃度及酶解溫度等單因素對葛根素和葛根總黃酮得率的影響,進一步利用正交試驗,以葛根素和葛根總黃酮得率為綜合評價指標得出了最佳提取工藝條件,結(jié)果表明:當(dāng)酶解時間為4 h,酶解濃度為2%,酶解

4、溫度為60℃,酶解pH為6時,葛根素得率為2.201%,葛根總黃酮得率為10.613%,木瓜蛋白酶酶解輔助提取葛根有效成分的得率比乙醇回流法高。
　　3.通過大孔樹脂靜態(tài)吸附解析實驗,對HPD-750、FL-2、AB-8、X-5、NKA-Ⅱ五種大孔樹脂進行了比較,篩選出AB-8大孔樹脂作為分離葛根有效成分的柱材料。通過單因素實驗對上樣pH、飽和吸附量、上樣液濃度、徑高比、洗脫劑濃度和用量進行了考察,得到了最佳純化工藝條件。實驗結(jié)果

5、為:葛根醇提液濃縮后直接上樣,上樣液濃度7.59 mg/mL,徑高比1:6,上樣吸附后,先用3 BV水洗除雜,再用40%的乙醇洗脫3 BV。分離得到的提取物中葛根素含量為29.59%,葛根總黃酮含量為64.39%。
　　4.利用DPPH·法和2-脫氧核糖氧化降解法研究了葛根素純品和不同醇濃度葛根提取物的抗氧化活性。實驗結(jié)果表明:葛根素純品對DPPH·的清除能力很弱,且不能有效地抑制Fenton反應(yīng)誘導(dǎo)的2-脫氧核糖氧化降解;而不同