用于檢測(cè)活性氧自由基的熒光探針研制及其分析應(yīng)用.pdf

1、生物新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生眾多的活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)，包括超氧陰離子自由基(O<,2>)、過(guò)氧化氫(H<,2>O<,2>)、羥基自由基(OH)、一氧化氮(NO)、過(guò)氧亞硝基(ONOO<'->)等，這些自由基與癌癥、機(jī)體炎癥、組織過(guò)氧化、蛋白質(zhì)交聯(lián)變性、DNA損傷和信號(hào)傳導(dǎo)等有直接的關(guān)系，被統(tǒng)一稱為對(duì)機(jī)體的氧化脅迫。 然而，由于生物體內(nèi)活性氧的壽命非常短，導(dǎo)致通常情況下穩(wěn)態(tài)濃度極低，而短壽

2、命和低濃度意味著活性氧的測(cè)定非常困難。目前測(cè)定自由基的方法主要有電了自旋共振法(ESR)、高效液相色譜法(HPLC)、化學(xué)發(fā)光法(CL)等，相比于以上方法，熒光法結(jié)合共聚焦顯微成像技術(shù)和微區(qū)光譜檢測(cè)技術(shù)，是唯一使活細(xì)胞和組織內(nèi)的ROS“實(shí)時(shí)、可見、定量”的檢測(cè)方法，，而在600-1000nm的近紅外光區(qū)，生物基體光吸收或熒光強(qiáng)度很小，且致密介質(zhì)(如組織)的光散射大大降低，激發(fā)光的穿透性更大，因而自發(fā)熒光的背景干擾大大降低，且能量較低減少

3、光照對(duì)細(xì)胞的損傷，所以近紅外熒光探針擁有良好的發(fā)展前景。因此，設(shè)計(jì)合成選擇性好，靈敏度高，具有生物兼容性的紅外、近紅外熒光探針用來(lái)檢測(cè)活細(xì)胞和組織內(nèi)的活性氧是生命化學(xué)學(xué)科發(fā)展中具有挑戰(zhàn)性的前沿課題之一。 本論文基于活性氧引起探針熒光增強(qiáng)的機(jī)理，開展了三方面的工作。 (一)設(shè)計(jì)合成了新型近紅外順磁性自旋標(biāo)記氮氧自由基熒光探針Cy.7.TEMPO，基于非氧化機(jī)理對(duì)羥基自由基進(jìn)行檢測(cè)，并利用激光共聚焦成像技術(shù)對(duì)細(xì)胞內(nèi)羥基自由基