擬南芥AtMAP4Kα2與AtMO25的克隆、表達(dá)、純化及初步晶體學(xué)研究.pdf

1、擬南芥AtMAP4Ks屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族。AtMAP4K家族有10個(gè)成員，即:AtMAP4K1-10。它們的N末端是保守的激酶結(jié)構(gòu)域，C端是二聚化結(jié)構(gòu)域。它們包含一個(gè)共同的序列基序:TFVGTPxWMAPEV。擬南芥AtMAP4Kα2在哺乳動(dòng)物中的同源蛋白是MST4。AtMAP4Kα2與MST4的序列同源性高達(dá)63％。MST4是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族中GCKⅢ亞家族成員之一，而GCKⅢ家族在擬南芥中的同源蛋白只有一個(gè)成員

2、，即AtMAP4Kα2，因此，AtMAP4Kα2也稱AtGCKⅢ。GCKⅢ激酶廣泛參與細(xì)胞的生長、凋亡、細(xì)胞極化等重要生理活動(dòng)。擬南芥AtMO25在哺乳動(dòng)物的同源蛋白是MO25。它們的序列同源性高達(dá)44％。擬南芥AtMO25的名字由此而來。哺乳動(dòng)物中的MO25是一個(gè)腳手架蛋白，作為GCKⅢ亞家族蛋白的接頭蛋白促進(jìn)其激酶活性。
　　前人通過結(jié)構(gòu)生物學(xué)的方法，解析了哺乳動(dòng)物MST4與MO25復(fù)合體的三維結(jié)晶結(jié)構(gòu)，揭示了MO25激活MS

3、T4的分子機(jī)制，即:MO25通過介導(dǎo)MST4形成二聚體，從而MST4發(fā)生交互自磷酸化而被激活。
　　本研究結(jié)果如下:
　　1、TEV酶的純化。AtMAP4Kα2、AtMO25與標(biāo)簽連接處含有TEV酶切位點(diǎn)，因此，TEV酶可用于AtMAP4Kα2、AtMO25標(biāo)簽的去除。
　　2、AtMAP4Kα2的克隆、表達(dá)、純化及初步晶體學(xué)研究。首先構(gòu)建了AtMAP4Kα2的3個(gè)克隆片段，包括AtMAP4Kα2全長（1-690aa）

4、、AtMAP4Kα2激酶結(jié)構(gòu)域(1-290αa)和AtMAP4Kα2激酶結(jié)構(gòu)域及WEF基序(1-338aa)。著重純化并結(jié)晶了AtMAP4Kα2激酶結(jié)構(gòu)域。最終獲得AtMAP4Kα2激酶結(jié)構(gòu)域的晶體衍射數(shù)據(jù)。AtMAP4Kα2激酶結(jié)構(gòu)域的衍射分辨率為1.9(A)，屬于空間群C2221，晶胞參數(shù)為a=55.27，b=82.93，c=133.15(A)。
　　3、AtMO25的克隆、表達(dá)、純化及初步晶體學(xué)研究。首先克隆了AtMO25全