參與脂肪酸和糖類合成的兩個酶的克隆、表達純化及晶體學研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、微生物中的各種酶類具有巨大的潛在應用價值。它的開發(fā)和利用，對于提高人們生活質量有重要意義。對于這些蛋白酶的理化性質、生物活性和催化機理等方面的基礎研究有助于發(fā)現(xiàn)它更廣闊的應用前景。如今，酶類在食品發(fā)酵工業(yè)生產，生物制劑等方面己得到廣泛的應用。
　　 本文借助結構生物學中晶體學的方法，通過獲悉蛋白酶的空間結構來推測酵的功能，探討催化機理。研究中以激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中潛在的參與脂肪酸合成酶類PFS(

2、PF2046)和脆弱擬桿菌(Bacteroides.fragilis 9343)中的糖合成酶FKP為研究對象，將其基因構建至原核表達載體。pMCSG7中，使用大腸桿菌E.coli BL21(DE3)大量表達出帶有His標簽的可溶性融合蛋白，經鎳離子柱親和層析，離子交換及分子篩層析純化后，得到純度達95％以上蛋白。使用商品化試劑盒進行晶體生長條件篩選，解析了PFS的三維結構，并對其功能進行初步研究。同時得到了FKP蛋白的微晶，經過結晶條件

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