參與脂肪酸和糖類合成的兩個(gè)酶的克隆、表達(dá)純化及晶體學(xué)研究.pdf

1、微生物中的各種酶類具有巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值。它的開發(fā)和利用，對(duì)于提高人們生活質(zhì)量有重要意義。對(duì)于這些蛋白酶的理化性質(zhì)、生物活性和催化機(jī)理等方面的基礎(chǔ)研究有助于發(fā)現(xiàn)它更廣闊的應(yīng)用前景。如今，酶類在食品發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)，生物制劑等方面己得到廣泛的應(yīng)用。
　　 本文借助結(jié)構(gòu)生物學(xué)中晶體學(xué)的方法，通過(guò)獲悉蛋白酶的空間結(jié)構(gòu)來(lái)推測(cè)酵的功能，探討催化機(jī)理。研究中以激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)中潛在的參與脂肪酸合成酶類PFS(

2、PF2046)和脆弱擬桿菌(Bacteroides.fragilis 9343)中的糖合成酶FKP為研究對(duì)象，將其基因構(gòu)建至原核表達(dá)載體。pMCSG7中，使用大腸桿菌E.coli BL21(DE3)大量表達(dá)出帶有His標(biāo)簽的可溶性融合蛋白，經(jīng)鎳離子柱親和層析，離子交換及分子篩層析純化后，得到純度達(dá)95％以上蛋白。使用商品化試劑盒進(jìn)行晶體生長(zhǎng)條件篩選，解析了PFS的三維結(jié)構(gòu)，并對(duì)其功能進(jìn)行初步研究。同時(shí)得到了FKP蛋白的微晶，經(jīng)過(guò)結(jié)晶條件