基于CdSe-ZnS量子點熒光免疫吸附法對炎癥類因子的檢測.pdf

1、酶聯(lián)免疫吸附法（ Enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA），由于靈敏度高，特異性強等優(yōu)點，現(xiàn)如今已經(jīng)被廣泛應用于定量診斷分析中。但是由于酶易受到外部條件的干擾，穩(wěn)定性不高；并且 ELISA實驗操作繁瑣復雜，這些因素限制了其應用推廣。量子點（quantum dots，QDs），因具有熒光單色性好，抗光漂白性強等優(yōu)異的光學性質，而被廣泛應用于生物醫(yī)學檢測方面。本論文中，我們利用水相量子點作為熒光探針

2、，通過改進 ELISA方法，發(fā)展了量子點熒光免疫吸附法（ quantum dot-based fluorescence-linked immunosorbent assay，F(xiàn)LISA），并對炎癥類因子C-反應蛋白（C-reactive protein，CRP）和降鈣素原（procalcitonin，PCT）進行了準確、定量的檢測。
　　具體內(nèi)容包括：
　?。?）聚合物包覆-量子點熒光免疫吸附法對C-反應蛋白的檢測。經(jīng)過兩親

3、性聚合物（PMAH）修飾的油溶性CdSe/ZnS量子點，在碳化二亞胺鹽酸鹽（EDC·HCl）和N-羥基硫代琥珀酰亞胺磺酸鹽（S-NHS）的作用下，成功與抗體蛋白質發(fā)生偶聯(lián)。我們根據(jù)抗原與抗體之間的特異性反應，設計“包被抗體-待測抗原-標記抗體”的雙夾心法實驗。在本章節(jié)中，我們優(yōu)化了實驗過程中的條件，包括包被過程，封閉過程，以及孵育過程等，從而實現(xiàn)了對CRP的定量檢測。這種方法相比于ELISA法，具有最低檢出限低，線性范圍更寬，縮短反應時

4、間等優(yōu)點，同時量子點熒光探針穩(wěn)定性高。由于該檢測方法簡單、準確和高靈敏度，在體外診斷試劑盒研發(fā)方向具有巨大的潛力。
　　（2）包硅-量子點熒光免疫吸附法對 C-反應蛋白的檢測。經(jīng)過二氧化硅修飾的油溶性量子點，熒光強度以及穩(wěn)定性有了進一步的提高。通過對比，包硅-量子點探針與聚合物包覆-量子點探針相比，水合粒徑有所增加，熒光回收率提高，具有更好的穩(wěn)定性。通過優(yōu)化實驗條件，在包硅-量子點熒光免疫吸附法實驗中，探針用量為聚合物包覆-量子點

5、探針中的1/16，線性范圍擴大2.5倍，靈敏度與準確度均良好。包硅-量子點在臨床檢測方面有更大的價值與意義。
　　（3）聚合物包覆-量子點熒光免疫吸附法對降鈣素原的檢測。對PCT的檢測方法類似于（1）中，為“抗體-抗原-抗體”的雙夾心法實驗。在本章中，經(jīng)兩親性聚合物（PMAH）包覆的水溶性量子點，與PCT抗體進行偶聯(lián)反應，之后對PCT抗原進行定量檢測。其檢測結果也顯示該量子點熒光免疫吸附法具有靈敏度高，線性相關度良好，精密度好，準