基于CdSe-ZnS量子點(diǎn)熒光免疫吸附法對(duì)炎癥類因子的檢測(cè).pdf

1、酶聯(lián)免疫吸附法（ Enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA），由于靈敏度高，特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)如今已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于定量診斷分析中。但是由于酶易受到外部條件的干擾，穩(wěn)定性不高；并且 ELISA實(shí)驗(yàn)操作繁瑣復(fù)雜，這些因素限制了其應(yīng)用推廣。量子點(diǎn)（quantum dots，QDs），因具有熒光單色性好，抗光漂白性強(qiáng)等優(yōu)異的光學(xué)性質(zhì)，而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)方面。本論文中，我們利用水相量子點(diǎn)作為熒光探針

2、，通過改進(jìn) ELISA方法，發(fā)展了量子點(diǎn)熒光免疫吸附法（ quantum dot-based fluorescence-linked immunosorbent assay，F(xiàn)LISA），并對(duì)炎癥類因子C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）和降鈣素原（procalcitonin，PCT）進(jìn)行了準(zhǔn)確、定量的檢測(cè)。
　　具體內(nèi)容包括：
　?。?）聚合物包覆-量子點(diǎn)熒光免疫吸附法對(duì)C-反應(yīng)蛋白的檢測(cè)。經(jīng)過兩親

3、性聚合物（PMAH）修飾的油溶性CdSe/ZnS量子點(diǎn)，在碳化二亞胺鹽酸鹽（EDC·HCl）和N-羥基硫代琥珀酰亞胺磺酸鹽（S-NHS）的作用下，成功與抗體蛋白質(zhì)發(fā)生偶聯(lián)。我們根據(jù)抗原與抗體之間的特異性反應(yīng)，設(shè)計(jì)“包被抗體-待測(cè)抗原-標(biāo)記抗體”的雙夾心法實(shí)驗(yàn)。在本章節(jié)中，我們優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)過程中的條件，包括包被過程，封閉過程，以及孵育過程等，從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)CRP的定量檢測(cè)。這種方法相比于ELISA法，具有最低檢出限低，線性范圍更寬，縮短反應(yīng)時(shí)

4、間等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)量子點(diǎn)熒光探針穩(wěn)定性高。由于該檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確和高靈敏度，在體外診斷試劑盒研發(fā)方向具有巨大的潛力。
　?。?）包硅-量子點(diǎn)熒光免疫吸附法對(duì) C-反應(yīng)蛋白的檢測(cè)。經(jīng)過二氧化硅修飾的油溶性量子點(diǎn)，熒光強(qiáng)度以及穩(wěn)定性有了進(jìn)一步的提高。通過對(duì)比，包硅-量子點(diǎn)探針與聚合物包覆-量子點(diǎn)探針相比，水合粒徑有所增加，熒光回收率提高，具有更好的穩(wěn)定性。通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，在包硅-量子點(diǎn)熒光免疫吸附法實(shí)驗(yàn)中，探針用量為聚合物包覆-量子點(diǎn)

5、探針中的1/16，線性范圍擴(kuò)大2.5倍，靈敏度與準(zhǔn)確度均良好。包硅-量子點(diǎn)在臨床檢測(cè)方面有更大的價(jià)值與意義。
　　（3）聚合物包覆-量子點(diǎn)熒光免疫吸附法對(duì)降鈣素原的檢測(cè)。對(duì)PCT的檢測(cè)方法類似于（1）中，為“抗體-抗原-抗體”的雙夾心法實(shí)驗(yàn)。在本章中，經(jīng)兩親性聚合物（PMAH）包覆的水溶性量子點(diǎn)，與PCT抗體進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，之后對(duì)PCT抗原進(jìn)行定量檢測(cè)。其檢測(cè)結(jié)果也顯示該量子點(diǎn)熒光免疫吸附法具有靈敏度高，線性相關(guān)度良好，精密度好，準(zhǔn)