離心運(yùn)動對大鼠骨骼肌細(xì)胞凋亡和增殖的時序性影響——運(yùn)動性骨骼肌損傷及修復(fù)機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：凋亡作為程序性死亡的一種方式在生長，發(fā)育調(diào)節(jié)和疾病中發(fā)揮著重要角色。它在骨骼肌細(xì)胞損傷的病理生理中扮演著重要的角色。本研究觀察重復(fù)三天力竭性離心運(yùn)動對骨骼肌微損傷、細(xì)胞凋亡和增殖的時序性影響，旨在探討運(yùn)動性骨骼肌微損傷和修復(fù)的機(jī)制。 研究方法：50只8周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為安靜組（A）和運(yùn)動組（B1，B2，B3，B4），運(yùn)動組進(jìn)行重復(fù)三天的力竭性離心運(yùn)動，速度為16m/min，坡度為-16°。運(yùn)動方案結(jié)束后，眼球取血

2、20ul用于血常規(guī)測定，另取1.5ml進(jìn)行離心，分離血清后用分光光度法測定血清中CK、LDH、SOD的活性；取右側(cè)肱三頭肌內(nèi)側(cè)頭用于制作電鏡標(biāo)本和石蠟切片，電鏡下主要觀察肌細(xì)胞核的凋亡情況、骨骼肌細(xì)胞損傷情況及肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分化情況，石蠟切片后用TUNNEL法檢測細(xì)胞凋亡、免疫組化檢測PCNA的表達(dá)和波形蛋白（vimentin）的表達(dá)，同時石蠟切片用HE染色后在光鏡下觀察骨骼肌的損傷程度。采用計(jì)算機(jī)顯微圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行凋亡細(xì)胞、PC

3、NA和vimentin的定位和陽性表達(dá)進(jìn)行半定量分析。 研究結(jié)果： （1）經(jīng)過重復(fù)三天力竭性離心運(yùn)動后，大鼠肱三頭肌內(nèi)側(cè)頭組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)都表現(xiàn)不同程度的變化。在運(yùn)動后即刻、運(yùn)動后3小時，骨骼肌細(xì)胞組織損傷率和Z線損傷率逐漸增加，損傷程度逐漸加劇，運(yùn)動后24小時達(dá)到峰值，運(yùn)動后48小時損傷率和損傷程度都有所減輕。離心運(yùn)動后CK、LDH都出現(xiàn)不同程度的升高，但CK的峰值在24小時，而LDH卻在運(yùn)動后即刻和運(yùn)動后24

4、小時兩個峰值出現(xiàn)雙相變化，SOD活性在運(yùn)動后即刻顯著下降，以后逐漸恢復(fù)。 （2）經(jīng)過重復(fù)三天力竭性離心運(yùn)動后，細(xì)胞凋亡指數(shù)在運(yùn)動后即刻明顯升高，運(yùn)動后24小時達(dá)到峰值，運(yùn)動后48小時凋亡指數(shù)有所下降，但是與對照組有顯著的差異。 （3）經(jīng)過重復(fù)三天離心運(yùn)動后，骨骼肌細(xì)胞增殖也出現(xiàn)時序性變化，在運(yùn)動后即刻增殖指數(shù)顯著升高，與對照組具有顯著性差異（P<0.05），而且在電鏡下觀察到成肌細(xì)胞與肌細(xì)胞的融合情況；運(yùn)動后3小時，肌衛(wèi)

5、星細(xì)胞的增殖指數(shù)反而下降；運(yùn)動后24小時達(dá)到最高值；到運(yùn)動后48小時，肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖指數(shù)減小，但還未恢復(fù)到對照組。 （4）離心運(yùn)動后波形蛋白的陽性表達(dá)面積明顯增大，而且在運(yùn)動后24—48小時達(dá)到峰值，但波形蛋白的平均光密度卻在運(yùn)動后即刻最強(qiáng)，以后逐漸變淡。而波形蛋白的免疫組化分值卻在運(yùn)動后即刻顯著升高，運(yùn)動后24小時達(dá)到峰值，運(yùn)動后48小時有所下降，但未恢復(fù)到對照組。 研究結(jié)論： （1）三天重復(fù)性力竭離心運(yùn)動能