離心運(yùn)動誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞微管損傷的機(jī)制及針刺干預(yù)研究.pdf

1、目的：觀察離心運(yùn)動對大鼠骨骼肌微管蛋白以及相關(guān)蛋白的影響，分析其對微管的調(diào)控作用；探討離心運(yùn)動對大鼠骨骼肌微管損傷的分子機(jī)制；觀察針刺干預(yù)對離心運(yùn)動后骨骼肌微管的影響，闡明其作用的機(jī)理。
　　方法：以雄性SD大鼠為研究對象。實驗一分為單純對照組和離心運(yùn)動組（下坡跑，坡度-16°，速度16m/min，時間90min）；實驗二分為單純對照組、安慰劑組（腹腔注射30％DMSO的生理鹽水）、單純阻斷組（腹腔注射SB203580，15mg/

2、kg體重）、單純運(yùn)動組和阻斷運(yùn)動組；實驗三分為單純對照組、單純針刺組（小腿三頭肌縱向從遠(yuǎn)端斜刺，進(jìn)針角度約30°，進(jìn)針止于小腿三頭肌肌腹處，留針2分鐘）、單純運(yùn)動組和針刺運(yùn)動組。各組又按時相點分為0h、12h、24h、48h和72h小組，大鼠在對應(yīng)時間點取比目魚肌進(jìn)行檢測。采用免疫印跡法檢測α-tubulin和MAP4蛋白表達(dá)、Op18和p38蛋白表達(dá)及磷酸化表達(dá)情況，免疫共沉淀法檢測MAP4和p38/MAPK之間的相互作用，免疫熒光組

3、織化學(xué)（激光共聚焦法）觀察和定量α-tubulin的分布和表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）離心運(yùn)動后大鼠骨骼肌比目魚肌中的微管蛋白出現(xiàn)一過性的表達(dá)降低；MAP4蛋白出現(xiàn)一過性的升高，Op18蛋白表達(dá)及磷酸化均出現(xiàn)一過性的降低，但磷酸化表現(xiàn)更為明顯。免疫熒光結(jié)果和蛋白表達(dá)結(jié)果一致。（2）使用p38特異性抑制劑SB203580結(jié)合離心運(yùn)動后MAP4蛋白表達(dá)減少，Op18蛋白表達(dá)特別是其磷酸化表達(dá)增加，骨骼肌微管蛋白的解聚出現(xiàn)緩解；免疫共沉淀顯

4、示MAP4和p38/MAPK激酶之間有相互作用。（3）運(yùn)動后針刺使骨骼肌微管蛋白α-tubulin表達(dá)上調(diào)，下調(diào)MAP4的蛋白表達(dá)及上調(diào)Op18磷酸化的表達(dá)，同時下調(diào)了p38蛋白及磷酸化表達(dá)。
　　結(jié)論：（1）離心運(yùn)動誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞微管損傷，其相關(guān)蛋白MAP4和Op18參與了這一過程的調(diào)控。（2）離心運(yùn)動激活p38激酶，導(dǎo)致MAP4蛋白增加、Op18蛋白減少，二者協(xié)同調(diào)控引起微管結(jié)構(gòu)的改變。（3）運(yùn)動后針刺可以緩解骨骼肌微管的損傷