血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)及藥物保護(hù)研究.pdf

1、細(xì)胞是生物體基本結(jié)構(gòu)和功能的單位，細(xì)胞研究是征服疾病和揭示生命奧秘的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)之一。本文針對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞，利用壓電傳感技術(shù)和電化學(xué)方法等，開展了在不同的界面上對(duì)細(xì)胞的粘附、生長(zhǎng)、增殖、損傷等細(xì)胞行為和形態(tài)變化的研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴將半胱氨酸與甲硫氨酸分別修飾在QCM金電極上，構(gòu)建兩種不同的電極表面:親水性電極表面和疏水性電極表面。以修飾電極為工作電極，利用循環(huán)伏安法(CV)和交流阻抗技術(shù)(EIS)，結(jié)合顯微鏡觀察結(jié)果

2、和MTT實(shí)驗(yàn)分別對(duì)不同電極表面人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC-C的粘附生長(zhǎng)及H2O2誘導(dǎo)的氧化損傷結(jié)果進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:親水性電極表面有利于促進(jìn)細(xì)胞的粘附和增殖，而疏水性電極表面對(duì)細(xì)胞的粘附生長(zhǎng)有一定的抑制作用。過氧化氫的強(qiáng)氧化性導(dǎo)致貼壁細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的氧化損傷。相對(duì)于親水性電極表面，疏水性電極表面的細(xì)胞的損傷程度更大，這與甲硫氨酸修飾電極表面細(xì)胞的粘附生長(zhǎng)狀況較差有關(guān)。⑵通過電化學(xué)聚合賴氨酸和滴干石墨烯量子點(diǎn)(GQDs)制備了聚賴氨

3、酸(PLL)和GQDs修飾的玻碳電極GCE/PLL/GQDs，利用循環(huán)伏安法研究了槲皮素在該修飾電極上的電化學(xué)行為。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，賴氨酸聚合圈數(shù)為100圈、靜置時(shí)間為200 s、B-R緩沖液pH值為6.0時(shí)峰電流最大。利用差分脈沖伏安法(DPV)對(duì)不同濃度的槲皮素開展了電化學(xué)檢測(cè)，DPV氧化峰峰電流與槲皮素的濃度在0.05μM～5.0μM范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。該修飾電極成功用于銀杏達(dá)莫注射液中槲皮素含量的分析，回收率較高。⑶使用石英晶

4、體微天平(QCM)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-C)在金電極上的粘附、鋪展和增殖過程。細(xì)胞的正常粘附行為引起的粘密度效應(yīng)導(dǎo)致諧振頻率的降低和動(dòng)態(tài)電阻的增加。加入H2O2后HUVEC-C細(xì)胞的氧化損傷引發(fā)細(xì)胞鋪展面積和電極表面細(xì)胞覆蓋度的下降，導(dǎo)致QCM響應(yīng)信號(hào)的逆轉(zhuǎn)。研究表明，細(xì)胞的損傷程度與H2O2的濃度有關(guān)，預(yù)先在培養(yǎng)基中加入的0.05 mM槲皮素可以完全消除1.0 mM H2O2氧化作用的影響。當(dāng)2.5 mM H2O2誘