牡蠣糖胺聚糖保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察牡蠣糖胺聚糖(O-GAG)對(duì)過(guò)氧化氫損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞合成及分泌功能的影響，以進(jìn)一步探討牡蠣糖胺聚糖(O-GAG)的抗動(dòng)脈粥樣硬化(AS)作用機(jī)理。 方法：1、采用體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVECS，ECV304)，建立過(guò)氧化氫(H<,2>O<,2>)誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，應(yīng)用MTT法觀察分析O-GAG對(duì)損傷及正常血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的影響。 2、用化學(xué)比色的方法測(cè)定分析O-GAG對(duì)H<,2>

2、O<,2>損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)釋放的影響。 3、用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的超氧化物歧化酶(SOD)的活性；用硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)法測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)氧化損傷產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量；用酶促反應(yīng)的方法測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-PX)的活性；用化學(xué)比色法測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的總抗氧化能力(T-AOC)，分析O-GAG對(duì)H<,2>O<,2>誘導(dǎo)損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化功能的影響。

3、 4、建立H<,2>O<,2>誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型，用硝酸還原酶法測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮舒張因子一氧化氮(NO)含量；用化學(xué)比色法測(cè)定總一氧化氮合酶(T-NOS)及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)活性，分析O-GAG對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后合成分泌NO功能的影響。 5、建立H<,2>O<,2>所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型，用放射免疫法測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌的前列環(huán)素(PGI<,2>)的穩(wěn)定性代謝產(chǎn)物6酮-前列腺素F

4、<,1>。(6-keto-PGF<,1α>)和血栓素A<,2>(TXA<,2>)的穩(wěn)定性代謝產(chǎn)物血栓烷素B<,2>(TXB<,2>)的含量，分析O-GAG對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后的前列腺素代謝的影響。 6、用放射免疫法測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌的縮血管生物活性多肽一內(nèi)皮素(ET)的含量，分析O-GAG對(duì)H<,2>O<,2>誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后細(xì)胞合成分泌ET功能的影響。 結(jié)果：1．給予H<,2>O<,2>后，VEC

5、s的增殖活性與正常對(duì)照組相比明顯降低(P<0.01)。與損傷對(duì)照組比較，除O-GAG最低劑量組(10ug/ml)外，O-GAG各濃度保護(hù)組(50、100、200、400、800ug/ml)的血管內(nèi)皮細(xì)胞活性均有所增高(P<0.05,P<0.01)。而O-GAG在100、200ug/ml濃度時(shí)還可促進(jìn)正常細(xì)胞的生長(zhǎng)(與正常對(duì)照組相比P<0.05)。 2、H<,2>O<,2>損傷模型組血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的LDH明顯高于正常對(duì)照組(P<

6、0.01)；與損傷模型組比較，O-GAG各保護(hù)組(50、100、200ug/ml)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的LDH顯著降低(P<0.01)。 3、與正常對(duì)照組比較，H<,2>O<,2>損傷模型組內(nèi)皮細(xì)胞的SOD活性明顯降低，MDA含量明顯增加(P<0.01)；O-GAG各保護(hù)組(50、100、200ug/ml)與損傷模型組比較，SOD活性明顯增強(qiáng)，MDA含量明顯減少(P<0.01)。 H<,2>O<,2>損傷模型組細(xì)胞內(nèi)GSH-PX活性

7、及T-AOC活力明顯降低于正常對(duì)照組細(xì)胞(P<0.01)；與損傷模型組比較，O-GAG各保護(hù)組(50、100、200ug/ml)細(xì)胞內(nèi)GSH-PX、T-AOC活力均明顯升高(P<0.01)。 4、與正常對(duì)照組相比，H<,2>O<,2>損傷模型組VECs內(nèi)T-NOS活性、NO含量明顯降低，iNOS活性則明顯升高(P<0.01)。與H<,2>O<,2>損傷模型組比較，O-GAG各濃度保護(hù)組(50ug/ml、100 ug/ml、200

8、ug/ml)VECs內(nèi)T-NOS活性、NO含量均明顯提高，而細(xì)胞內(nèi)iNOS活性顯著降低(P<0.01)。 5、加入H<,2>O<,2>后的模型組細(xì)胞培養(yǎng)液中的6-keto-PGF<,1α>水平明顯低于正常對(duì)照組，而TXB<,2>的含量則顯著增加(P<0.01)；0-GAG在50、100、200ug/ml濃度時(shí)可逆轉(zhuǎn)<,2>O<,2>的氧化損傷作用，提高6-keto-PGF<,1α>水平，降低TXB<,2>含量(p<0.01，p<

9、0.05)。 6、<,2>O<,2>損傷組與正常對(duì)照組相比，ET含量明顯升高(p<0.01)，說(shuō)明過(guò)氧化氫可使血管內(nèi)皮細(xì)胞中的ET表達(dá)增強(qiáng)，而預(yù)先加入O-GAG(50、100、200ug/ml)可顯著降低受損細(xì)胞ET的表達(dá)(p<0.01)。 結(jié)論：牡蠣糖胺聚糖(O-GAG)能夠減輕過(guò)氧化氫對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷，并對(duì)正常的血管內(nèi)皮細(xì)胞有促增殖作用；O-GAG可以使受損的血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的LDH減少；提高受損內(nèi)皮細(xì)胞抗氧