山羊乳腺組織雌、孕激素受體基因的表達(dá)及甲基化分析.pdf

1、為了探索ERα、PR-B基因的表達(dá)對(duì)山羊乳腺發(fā)育的影響，以及ERα、PR-B基因的甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)通過Real-TimePCR方法對(duì)不同時(shí)期嶗山奶山羊、波爾山羊乳腺組織中ERα、PR-B基因的表達(dá)進(jìn)行檢測，并利用亞硫酸鹽測序法，分析了相應(yīng)時(shí)期ERα、PR-B基因的甲基化水平，旨在發(fā)現(xiàn)青春期、妊娠期、泌乳期和退化期嶗山奶山羊和波爾山羊乳腺組織中ERα、PR-B基因的表達(dá)以及甲基化的變化規(guī)律，揭示山羊乳腺ERα、PR-B基因的

2、甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系。
　　 根據(jù)山羊乳腺發(fā)育特點(diǎn)，采樣時(shí)點(diǎn)分為:青春期、妊娠早期、妊娠中期、妊娠晚期、泌乳早期、泌乳晚期扣退化期。為了檢測ERα和PR-B基因的表達(dá)情況，分別以7個(gè)時(shí)期嶗山奶山羊、波爾山羊乳腺組織的cDNA為模板，以β-actin為內(nèi)參基因，每一時(shí)期設(shè)3個(gè)重復(fù)，進(jìn)行Real-timePCR擴(kuò)增。ERα基因的定量結(jié)果顯示，不論嶗山奶山羊還是波爾山羊，青春期、妊娠早期、妊娠中期ERα的表達(dá)量較高，且呈上升趨勢(shì)，妊

3、娠晚期表達(dá)量急劇下降，此后維持在較低水平。此外，青春期、妊娠早期、妊娠中期嶗山奶山羊的表達(dá)量顯著高于波爾山羊（青春期P=0.004＜0.01;妊娠早期P=0.01＜0.05;妊娠中期P=0.023＜0.05），其它時(shí)期差異不顯著。PR-B基因的定量結(jié)果顯示，不論嶗山奶山羊還是波爾山羊，PR-B基因在青春期表達(dá)量很低，妊娠期表達(dá)量較高，且呈上升趨勢(shì)，妊娠晚期達(dá)到最大值。分娩后表達(dá)量急劇下降，此后維持低水平。其中妊娠中期、妊娠晚期嶗山奶山羊

4、的表達(dá)量顯著高于波爾山羊(妊娠中期P=0.011＜0.05;妊娠晚期P=0.004＜0.01)。其它時(shí)期差異不顯著。
　　 為了檢測ERα和PR-B基因的甲基化狀態(tài)，各取嶗山奶山羊和波爾山羊7個(gè)時(shí)期的乳腺組織，亞硫酸鹽測序法分析ERα和PR-B基因的甲基化水平。ERα基因在嶗山奶山羊各時(shí)期的甲基化比率分別為5.00％，3.75％，3.75％，0％，9.38％，10.63％，10.63％;在波爾山羊各時(shí)期的甲基化比率分別為6.25

5、％，4.38％，3.75％，0％，8.13％，11.88％，10.63％。PR-B基因在嶗山奶山羊各時(shí)期的甲基化比率分別為13.33％，9.33％，2.00％，0％，8.67％，10.67％，10.67％;在波爾山羊各時(shí)期的甲基化比率分別為12.00％，9.33％，2.67％，0％，10.67％,10.67％,11.33％。
　　 用SAS9.0軟件對(duì)甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析，分析結(jié)果顯示:PR-B基因的甲基化與基因