孕激素受體基因甲基化與子宮內(nèi)膜癌臨床生物學(xué)行為的研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma)是激素依賴性腫瘤，占女性生殖道腫瘤的20％-30％，嚴(yán)重危害著婦女的健康。孕激素受體(Progesterone Receptor，PR)對于正常子宮內(nèi)膜的功能起到重要調(diào)節(jié)作用，但在子宮內(nèi)膜癌中，PR常表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)與臨床生物學(xué)行為相關(guān)，PR表達(dá)下調(diào)或者缺失的患者，預(yù)后差，易于轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，激素治療不敏感，但是對于PR下調(diào)的機制，仍然研究不明。有研究表明基因異常甲基化可以導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)

2、或者沉默，因此本課題從表觀遺傳學(xué)方面著手，研究子宮內(nèi)膜癌中PR基因異常甲基化與腫瘤臨床生物學(xué)行為的相關(guān)性。 第一部分：不同分化子宮內(nèi)膜癌中孕激素受體甲基化的研究。 目的： 檢測在不同分化子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系以及組織標(biāo)本中，是否存在PR異常甲基化，PR異常甲基化在不同分化子宮內(nèi)膜癌中是否存在差異，了解DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase，DNMT)與子宮內(nèi)膜癌臨床生物學(xué)行為的相關(guān)性。 方

3、法： 在子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中，采用Realtime PCR法檢測組織標(biāo)本中PR,DNMT1，3A，3B 表達(dá)情況，采用MSP法檢測不同分化組織標(biāo)本中PR異常甲基化狀況；在不同分化子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中，利用MSP，BSP的方法檢測不同分化子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系以及組織標(biāo)本中PR基因甲基化的狀況，為了進一步證實PR基因甲基化與表達(dá)相關(guān)性，DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-aza-2′-deoxycytidine，ADC)以及組蛋白去乙酰化酶抑制

4、劑(trichostatin A，TSA)處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系前后，分別采用Realtime PCR以及Western Blot的方法檢測藥物處理前后PR表達(dá)變化，采用MTT方法以及流式細(xì)胞方法檢測ADC，TSA以及孕激素P抑制細(xì)胞生長，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。 討論：通過試驗證實：子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本以及細(xì)胞系中，存在PR基因異常甲基化，與PR表達(dá)下調(diào)關(guān)系密切。外顯子區(qū)域甲基化密度和PR表達(dá)相關(guān)，DNMT可能參與了子宮內(nèi)膜癌進展。

5、 第二部分：子宮內(nèi)膜癌中孕激素受體基因異常甲基化與組蛋白乙?；揎棥?目的： DNA 異常甲基化伴隨的是組蛋白乙?；癄顟B(tài)的改變，我們以第一部分結(jié)果為基礎(chǔ)，進一步對DNA甲基化后，組蛋白乙?；癄顟B(tài)進行研究，以闡明PR 基因異常甲基化導(dǎo)致其表達(dá)沉默的機制，并對組織標(biāo)本中組蛋白去乙?；?histone deacetylase，HDAC)進行檢測，以闡明HDAC1，6與子宮內(nèi)膜癌臨床生物學(xué)行為之間的相關(guān)性。 方法

6、： 采用ChIP方法，對于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中PR基因啟動子以及外顯子區(qū)域去甲基化前后，組蛋白乙?；癄顟B(tài)進行研究，由于組蛋白乙?；艿紿DAC的催化，我們利用Realtime PCR的方法對HDAC1，6在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)進行研究，以觀察HDAC的表達(dá)與腫瘤臨床生物學(xué)行為的相關(guān)性。 討論： PR甲基化后，組蛋白乙酰化修飾的改變參與了PR表達(dá)沉默，組織標(biāo)本中HDAC1，6的表達(dá)增高則和患者預(yù)后較好相關(guān)。其與PR