簡(jiǎn)介：目的研究大鼠間質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)致瘤模型及致瘤后獲得單克隆腫瘤細(xì)胞株K3的生物學(xué)特性；建立K3腫瘤干細(xì)胞K3SP分離、鑒定的方法；初步采用細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)等探討K3腫瘤干細(xì)胞與非腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性及基因表達(dá)；探討無(wú)血清培養(yǎng)對(duì)K3腫瘤干細(xì)胞的富集作用。方法采用生長(zhǎng)曲線、流式表面標(biāo)記、PCR、免疫組化等技術(shù)來(lái)研究K3細(xì)胞的生物學(xué)特性。制備K3細(xì)胞懸液，經(jīng)過(guò)HOECHST33342熒光染料染色，流式細(xì)胞儀分析并分選出SP亞群。采用五種培養(yǎng)方法培養(yǎng)K35％FBS、10％FBS、無(wú)血清、無(wú)血清加三種生長(zhǎng)因子培養(yǎng)K3及K3細(xì)胞BALBC裸鼠皮下致瘤。獲得足夠量的K3細(xì)胞后，取瘤組織過(guò)400目銅網(wǎng)得到單細(xì)胞懸液。單細(xì)胞懸液經(jīng)過(guò)HOECHST33342熒光染料染色，使用流式細(xì)胞儀分選出K3SP細(xì)胞和K3NSP細(xì)胞。分選得到的K3SP細(xì)胞和K3NSP細(xì)胞進(jìn)行BALBC裸鼠皮下致瘤實(shí)驗(yàn)并觀察比較瘤體積的大小。使用晶芯R大鼠全基因組寡核苷酸微陣列芯片比較K3SPK3NSP細(xì)胞基因表達(dá)差異，使用熒光實(shí)時(shí)定量RTPCR驗(yàn)證差異表達(dá)基因。比較K3SP致瘤組織和K3SP致瘤組織ABCG2、OCT4、PCNA、P53的免疫組化結(jié)果。利用無(wú)血清培養(yǎng)以富集K3SP細(xì)胞。結(jié)果K3腫瘤細(xì)胞表達(dá)大鼠間質(zhì)干細(xì)胞相似的表面抗原如CD29CD44CD90弱表達(dá)CD45；K3腫瘤細(xì)胞具有一般腫瘤細(xì)胞表達(dá)基因與生長(zhǎng)特性，能夠在BALBC裸鼠致瘤；K3腫瘤細(xì)胞具有異質(zhì)性，同時(shí)含有少量的腫瘤干細(xì)胞。不同胎牛血清濃度培養(yǎng)下，K3細(xì)胞中K3SP細(xì)胞含量有差異，5％FBS培養(yǎng)與10％FBS培養(yǎng)分析得K3SP含量分別為101％和073％。K3SP較K3NSPBLABC裸鼠致瘤率明顯增強(qiáng)，5103K3SP細(xì)胞即可裸鼠致瘤，其組織類型為纖維肉瘤?；蛐酒治鲲@示，K3SP與K3NSP差異表達(dá)基因56個(gè)，其中上調(diào)40個(gè)，下調(diào)16個(gè)，REALTIMEPCR驗(yàn)證了TBX3、MAFB、PLK2等上調(diào)基因和VEGF一個(gè)下調(diào)基因。免疫組化顯示K3SP致瘤組織為P53、PCNA、ABCG2、OCT4陽(yáng)性，而K3NSP致瘤組織為陰性。K3細(xì)胞在含有BFGF、EGF、LIF三種因子的無(wú)血清培養(yǎng)基與不含三種因子的培養(yǎng)基中均呈懸浮球狀生長(zhǎng)，REALTIMEPCR顯示OCT4在兩種無(wú)血清培養(yǎng)基中表達(dá)均有差異。無(wú)血清加三種因子培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天后，SP含量達(dá)到773％，具有明顯的富集K3SP的作用。結(jié)論K3腫瘤細(xì)胞源于骨髓MSC突變致瘤，其中含有K3SP細(xì)胞，K3SP細(xì)胞與K3NSP細(xì)胞在致瘤性、基因表達(dá)等方面存在明顯的差異，K3SP細(xì)胞具有較強(qiáng)的致瘤能力。無(wú)血清加因子培養(yǎng)能夠明顯的富集K3SP，這些研究為尋找K3SP細(xì)胞的特異性分子標(biāo)志和K3SP的深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：目的建立小鼠臍帶來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞MOUSEUMBILICALCDDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，MUCMSCS的分離培養(yǎng)方法，分析其生物學(xué)特性，并比較其與小鼠骨髓來(lái)源的間質(zhì)干細(xì)胞MOUSEBONEMARROWDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLSMBMMSCS的差異，初步探討TOLL樣受體3TLR3對(duì)MUCMSCS特性的影響。方法采用改良組織塊貼壁法分離培養(yǎng)MUCMSCS，在含有15％胎牛血清的F12DMEM培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)、純化及傳代擴(kuò)增。采用全骨髓貼壁法分離獲得MBMMSCS。通過(guò)細(xì)胞形態(tài)觀察、生長(zhǎng)曲線繪制、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)及成脂成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，分別對(duì)MUCMSCS和MBMMSCS進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)特性、細(xì)胞周期、免疫表型CD29、CD34、CD45、CD44和CD11B和多向分化潛能的比較分析采用WESTERNBLOT檢測(cè)長(zhǎng)期培養(yǎng)中MUCMSCS干性相關(guān)蛋白OCT4、SOX2、SALL4和NANOG表達(dá)水平的改變，并比較MUCMSCS和MBMMSCS中干性相關(guān)蛋白（OCT4、SOX2、SALL4、NANOG和ΒCATENIN）表達(dá)的差異QRTPCR分析兩者間9種炎癥相關(guān)因子、成脂分化相關(guān)分子ADIPONECTIN和成骨分化相關(guān)分子RUNX2的基因表達(dá)差異。以POLYI∶C作為TLR3的激動(dòng)劑，綜合運(yùn)用WESTERNBLOT、細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)、液相芯片LUMINEX分析和QRTPCR評(píng)價(jià)POLYI∶C預(yù)處理對(duì)MUCMSCS的干性蛋白表達(dá)、克隆增殖能力、細(xì)胞因子分泌及其基因水平表達(dá)的影響。結(jié)果MUCMSCS原代培養(yǎng)612天進(jìn)行首次傳代，傳至第5至第7代時(shí)純化，形態(tài)均一，呈長(zhǎng)梭形，至20代時(shí)細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變。MUCMSCS在長(zhǎng)達(dá)60次的傳代培養(yǎng)中，其4種干性相關(guān)蛋白（OCT4、SOX2、SALL4和NANOG）的表達(dá)呈一致性的先升高后降低的趨勢(shì)，30代以內(nèi)細(xì)胞的細(xì)胞周期無(wú)明顯改變，依然維持較高的增殖潛能。MUCMSCS與MBMMSCS形態(tài)相似，而前者更易純化生長(zhǎng)曲線和細(xì)胞周期的檢測(cè)顯示MUCMSCS的增殖能力低于MBMMSCS流式分析表明，兩者均表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)記CD29和CD44，不表達(dá)造血標(biāo)記CD34、CD45和單核巨噬細(xì)胞標(biāo)記CD11B兩者均具有成脂和成骨分化潛能，且MUCMSCS的分化效率明顯低于MBMMSCSMUCMSCS中OCT4、SOX2、NANOG和SALL4的蛋白表達(dá)顯著強(qiáng)于MBMMSCS，與ΒCATENIN的表達(dá)相反MBMMSCS中IL6、IL1Β、TNFΑ、COX2、INOS和CCL5的基因表達(dá)都明顯高于MUCMSCS。MUCMSCS經(jīng)POLYI∶C預(yù)處理后，其干性蛋白表達(dá)和克隆增殖能力均增強(qiáng)，IL6、IL8、CCL5和CXCL10的基因表達(dá)顯著增強(qiáng)，且IL6、CXCL10和MCP1的分泌增加。結(jié)論成功建立了MUCMSCS的分離培養(yǎng)方法，獲得的細(xì)胞具備間質(zhì)干細(xì)胞的特性，并且能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定地傳代培養(yǎng)，為小鼠模型中的細(xì)胞移植提供新的細(xì)胞源。MUCMSCS與MBMMSCS在細(xì)胞形態(tài)和免疫表型上具有相似性，而在純化時(shí)間、增殖能力、多向分化潛能、干性相關(guān)蛋白和炎癥相關(guān)因子表達(dá)上差異明顯，提示在實(shí)驗(yàn)研究中，應(yīng)結(jié)合模型的特點(diǎn)和細(xì)胞自身的優(yōu)勢(shì)合理選擇細(xì)胞源。TLR3活化能夠改善MUCMSCS的相關(guān)特性，將為MUCMSCS的體外優(yōu)化提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文芹菜素對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性的影響及機(jī)制研究姓名蔡婧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師劉安文20100601摘要成，細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡。2、研究芹菜素在體內(nèi)對(duì)肝細(xì)胞癌HUH7移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用。方法L、MTT法繪制生長(zhǎng)曲線，觀察不同濃度芹菜素對(duì)HUH一7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。2、通過(guò)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度芹菜素對(duì)HUH一7細(xì)胞克隆形成能力的影響。3、采用PI染色法，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度芹菜素對(duì)HUH7細(xì)胞周期分布的影響。4、采用ANNEXINVFITC／PI染色法，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度芹菜素對(duì)HUH一7細(xì)胞凋亡狀態(tài)的影響。5、通過(guò)動(dòng)物模型觀察芹菜素對(duì)裸鼠人HUH7移植瘤腫瘤體積的影響并通過(guò)HE染色在顯微鏡下觀察其病理學(xué)變化。結(jié)果1、從生長(zhǎng)曲線可以看出，芹菜素對(duì)HUH一7細(xì)胞的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，并隨著藥物濃度的增加，其抑制作用顯著增強(qiáng)，各組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO．05。2、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示不論從克隆的大小還是克隆的數(shù)目，芹菜素處理組均較對(duì)照組明顯下降，差異具有顯著性P0．001。3、芹菜素處理HUH7細(xì)胞后細(xì)胞周期分布發(fā)生改變，主要表現(xiàn)在G2／M期細(xì)胞增加、GO／G1期細(xì)胞減少，細(xì)胞周期阻滯于G2／M期，隨著藥物濃度的增加，這種周期阻滯作用越顯著，各組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0．05。4、凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)芹菜素可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并呈劑量依賴性，各組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO．05。5、芹菜素處理的裸鼠腫瘤體積較未用芹菜素處理組明顯縮小PO．05，HE染色可見芹菜素處理組裸鼠腫瘤組織明顯的壞死。結(jié)論芹菜素通過(guò)阻滯細(xì)胞周期于G2／M期、降低GO／G1期細(xì)胞比例以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而抑制體內(nèi)體外肝細(xì)胞癌HUH一7的生長(zhǎng)。第二部分芹菜素抑制肝細(xì)胞癌HUH．7作用的分子機(jī)制研究

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R65111密級(jí)一般UDC616006編號(hào)2012213593廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文SIRNA沉默沉默YAP1基因?qū)驅(qū)87MG膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其機(jī)制研究膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響及其機(jī)制研究MECHANISMEFFECTOFSILENCINGYAP1GENEEXPRESSIONBYSIRNAONACTERISTICSOFBRAINGLIOMACELLSU87MG研究生熊博韜導(dǎo)師蔣太鵬教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士年級(jí)2012級(jí)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)研究方向腦腫瘤基礎(chǔ)與臨床論文提交日期2015年5月論文答辯日期2015年5月學(xué)位類型醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位學(xué)位授予單位廣州醫(yī)科大學(xué)答辯委員會(huì)主席評(píng)議人研究生熊博韜導(dǎo)師蔣太鵬教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士年級(jí)2012級(jí)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)研究方向腦腫瘤基礎(chǔ)與臨床論文提交日期2015年5月論文答辯日期2015年5月學(xué)位類型醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位學(xué)位授予單位廣州醫(yī)科大學(xué)答辯委員會(huì)主席評(píng)議人目錄目錄中英對(duì)照中英對(duì)照1中文摘要中文摘要2英文摘要英文摘要3前言前言4材料與方法材料與方法8結(jié)果結(jié)果15討論討論18全文總結(jié)全文總結(jié)21參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)22綜述綜述24致謝致謝29原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明30

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文EPHA2基因表達(dá)及其對(duì)人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤生物學(xué)特性的影響姓名李俠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)外科學(xué)（神外）指導(dǎo)教師章翔20070501第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文IRSIMMUNOREACTIVITYSCORE免疫反應(yīng)評(píng)分KBKILOBASEPAIRS千堿基對(duì)LBLURIABERTANIMEDIUMLB培養(yǎng)基MINMINUTE分鐘MTMMPMEMBRANETYPEMATRIXMETALLOPROTEINASE膜型基質(zhì)金屬蛋白酶MRNAMESSENGERRIBONUCLEICACID信使核糖核酸NTNUCLEOTIDE核苷酸PAGEPOLACRYLAMINEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖生理鹽水PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)PDGFRPLATELETDERIVEDGROWTHFACTORRECEPTOR血小板源性生長(zhǎng)因子受體PIPROLIFERATIVEINDEX增殖指數(shù)RNAIRNAINTERFERENCERNA干涉RPMROUNDPERMINUTE轉(zhuǎn)每分鐘RTKRECEPTORTYROSINEKINASE受體型酪氨酸激酶RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)SECSECOND秒SABCSTREPTAVIDINBIOTINPEROXIDASECOMPLEX鏈霉親和素生物素過(guò)氧化物酶復(fù)合物SDSSODIUMDODECOYLSALINE十二烷基磺酸鈉SIRNASMALLINTERFERINGRNA小干涉RNASPSSSTATISTICSPACKAGEFORSOCIALSCIENCE社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包2

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多病毒抗原蛋白的B細(xì)胞表位生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的探討利用大鼠成骨細(xì)胞在體外構(gòu)建具有一定機(jī)械強(qiáng)度細(xì)胞膜片的可行性；探討構(gòu)建膜片對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)活性和成骨性的影響。為無(wú)支架細(xì)胞膜片骨組織工程研究提供一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法原代培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察，堿性磷酸酶染色，茜素紅染色進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定；在50ΜLML抗壞血酸的培養(yǎng)基中，高密度連續(xù)培養(yǎng)，構(gòu)建成骨細(xì)胞膜片；倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察檢測(cè)；成骨細(xì)胞接種后，實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中添加50ΜLML抗壞血酸，對(duì)照組常規(guī)培養(yǎng)，分別于1周，2周，3周行MTT檢測(cè)，組織學(xué)厚度測(cè)量分析，堿性磷酸酶ALP活性測(cè)定，REALTIMEPCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因COL、OCN表達(dá)情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，A005P結(jié)果原代培養(yǎng)的成骨細(xì)胞形態(tài)觀察、堿性磷酸酶、茜素紅染色鑒定符合成骨細(xì)胞特性。通過(guò)連續(xù)培養(yǎng)后機(jī)械刮取的方法獲得成骨細(xì)胞膜片。膜片測(cè)量厚度結(jié)果顯示第1周至第2周是膜片厚度增加最顯著的時(shí)間段，平均厚度可達(dá)384±21ΜM。MTT結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)1周，2周后，細(xì)胞增殖率明顯高于對(duì)照組，且細(xì)胞增殖率隨時(shí)間的增加而上升。3周后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增值率低于對(duì)照組。ALP結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組ALP明顯高于對(duì)照組，第2周相對(duì)于第1周酶活性降低。基因檢測(cè)結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組成骨細(xì)胞內(nèi)COL、OC基因表達(dá)高于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組間結(jié)論抗壞血酸誘導(dǎo)，高密度接種，連續(xù)培養(yǎng)可以構(gòu)建出成骨細(xì)胞膜片；抗壞酸酸促進(jìn)細(xì)胞增殖，促進(jìn)堿性磷酸酶分泌，促進(jìn)細(xì)胞片形成；成骨細(xì)胞構(gòu)建細(xì)胞膜片后成骨性明顯提高，第1周至第2周成骨細(xì)胞膜片活性最佳；抗壞血酸上調(diào)COL、OCMRNA表達(dá)，第2周、第3周成骨細(xì)胞膜片內(nèi)細(xì)胞進(jìn)入成熟階段，膜片具有成骨潛力。

簡(jiǎn)介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文MTSS1在肝癌細(xì)胞系中的生物學(xué)功能的研究姓名張鳳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師樊紅20090525英文摘要英文摘要RESEARCHONTHEBIOLOGICALFUNCTIONOFMTSSLINHEPATOCEⅡULARCARCINOGENESISNAMEZHANGFENGTUTORFANHONGKEYLABORATORYOFDEVELOPMENTALANDHUMANDISEASESMINISTRYOFEDUCATIONDEPT．GENETICSDEVELOP．BIOLOGYSOUTHEASTUNIVERSITYMEDICALSCHOOLOBJECTIVETOSTUDYTHEPOTENTIALMECHANISMOFDNMT3BREGULATESMTSSLEXPRESSION，ANDEXPLORESBIOLOGICALFUNCTIONSOFMTSSLINTHEHEPATOCELLULARCARCINOGENESISCELLLINES．METHODSCHIPWASUSEDTOTESTWHETHERORNOTDNMT3BCOMBINEWITHPROMOTEROFMTSS1DIRECTLY,LUCIFERASEASSAYWASUSEDTODETECTTHISBINDINGEFFECTONTHEACTIVITYOFMTSSIPROMOTOR．STABLEMTSSLINHIBITEDCELLLINESSMMC7721，WHICHISTRANSFECTEDWITHMTSSLSIRNARECOMBINANTANDCORRESPONDINGCONTROLCELLSWERESELECTEDBYG418，RESPECTIVELY．STABLEMTSSLOVEREXPRESSIONCELLLINESQGY7703ANDNIH3T3TRANSFECTEDWITHPCDNA3．IMTSSLRECOMBINANTWEREGORENBYG418SELECTION，RESPECTIVELY．MTTWASUSEDTOEVALUATECELLGROWTHCULWEOFTHEDNMT3BINHIBITEDEELLLINESANDTHEIRCONTROLS．HOWCYTOMCTRYWASUSEDTODETECTCEHCYCLEINMTSSLDOWNEXPRESSIONANDOVCREXPRESSIONCELLLINESANDTHEIRCONTROLS，RESPECTIVELY．COLONYFORMINGASSAYSWELEUSEDTODETECTTHECOLONYFORMINGABILITYOFTHESECELLLINES．RESULTSDNMT3BCOMBINEWITHMTSSLPROMOTORAT864／645REGIONANDINHIBITTHEACTIVITYOFTHEPROMOTOR．THECELLPROLIFERATIONCAPACITYISNOSIGNIFICANTDIFFERENCESBETWEENMTSSIKNOCKDOWN／OVEREXPRESSIONCELLSANDTHEIRCONTROLPO．05．AFTERSUPPRESSINGTHEEXPRESSIONOFMTSSIINSMMC7721，THECELLSARCRELEASEDING2MPHASEQO．01．HOWEVER,UPREGULATINGTHEEXPRESSIONOFMTSSLINQGY7703，THECELLSAREARRESTEDING2MPHASE臟O．01．THECOLONYFORMINGABILITYOF772IMTSSIRNAICELLLINEISSTRONGERTHANTHATOFCONTROLP0．01．THECOLONYFORMINGABILITYOF7703MTSSLCELLLINEISWEAKENTHANTHATOFCONTROLO0．01．NOMORECOLONYFORMATIONISFOUNDINNIH313CELLSWHICHARETRANSFECTEDWITHPEDNA3．0MTSS1．CONCLUSIONDNMT3BBINDTOTHEPROMOTEROFMTSSLANDINHIBITITSACTIVITY．MTSSLMAYAFFECTCELLCYCLEANDTHECOLONYFORMINGABILITYINHEPATOCELLULARCARCINOGENESISANDDEVELOPMENT．KEYWORDSMTSSL；HEPATOCELLULARCARCINOMA；CHIP；DNMT3BII

簡(jiǎn)介：天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文線粒體及雌激素在乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用研究姓名孫玉蘭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師付麗20080501天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文缺失，和其母本MDAMB231細(xì)胞相比，RHOOMDAMB231細(xì)胞線粒體數(shù)量增多，體積增大；細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞遷移能力和集落形成能力增強(qiáng)；線粒體膜電位下降；對(duì)化療藥物相對(duì)抵抗，耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)增強(qiáng)。3雌激素促進(jìn)MDAMB231細(xì)胞增殖，但無(wú)明顯劑量依賴性趨勢(shì)，抑韋LJRHOOMDAMB231細(xì)胞增殖，且表現(xiàn)為劑量依賴性趨勢(shì)；雌激素作用后，RHOOMDAMB231細(xì)胞呈現(xiàn)G2／M期阻滯，線粒體腫脹和髓鞘樣變，而MDAMB231細(xì)胞則積聚于S期，同時(shí)伴隨粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，核糖體顆粒增多。4雌激素干預(yù)后，MCF7細(xì)胞MTDNA編碼ND4、ND4L及COXII基因上調(diào)表達(dá)，而MDAMB一231細(xì)胞MTDNA基因無(wú)明顯差異表達(dá)。結(jié)論1成功誘導(dǎo)建立了MTDNA缺失的人乳腺癌細(xì)胞RHOOMDAMB231。2線粒體損傷可能參與MDAMB23L細(xì)胞惡性表型和耐藥表型的形成。3雌激素除了通過(guò)核ER途徑發(fā)揮作用，可能尚有線粒體／MTDNA參與的其他信號(hào)通路存在。關(guān)鍵詞線粒體線粒體DNA；雌激素；雌激素受體乳腺癌；惡性表型；多藥耐藥

簡(jiǎn)介：四川大學(xué)碩士學(xué)位論文口腔癌相關(guān)成纖維細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名宋惠云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師周紅梅20070501四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文EPCFNUPAENDOTHELIALPROGENITORCELLSFIBRONECTINUROKINASEPLASMINOGENACTIVATORFAPFIBROBLASTACTIVATIONPROTEINTGF13TRANSFORMINGGROWTHFACTORS13ETENDOTHELIN2內(nèi)皮祖細(xì)胞纖連蛋白尿激酶纖維蛋白溶酶原激活劑成纖維細(xì)胞活化蛋白轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子內(nèi)皮素

簡(jiǎn)介：背景糖尿病足是指與下肢遠(yuǎn)端神經(jīng)異常和不同程度的周圍血管病變相關(guān)的足部感染、潰瘍和或深層組織破壞。由于糖尿病足發(fā)病率高、治療費(fèi)用貴、傷口難以愈合且容易復(fù)發(fā)其發(fā)病機(jī)制和治療方法一直是基礎(chǔ)與臨床研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶9MATRIXMETALLOPROTEINASE9MMP9與糖尿病足潰瘍之間關(guān)系密切。MULLER等人發(fā)現(xiàn)糖尿病足患者潰瘍滲出液中MMP9水平較正常人升高。本課題組的前期研究也發(fā)現(xiàn)①糖尿病大鼠皮膚組織尚未受創(chuàng)時(shí)就已經(jīng)出現(xiàn)皮膚“隱性損害”而且與高水平的MMP9關(guān)系密切；②與非糖尿病大鼠相比糖尿病大鼠皮膚傷口愈合過(guò)程MMP9的水平明顯升高。目前普遍認(rèn)為高水平的MMP9主要是通過(guò)過(guò)度降解細(xì)胞外基質(zhì)、生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子受體、整合素及其受體以及加重傷口局部炎癥反應(yīng)等方面來(lái)減慢糖尿病足潰瘍的愈合。對(duì)于MMP9是否還可以通過(guò)影響皮膚成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為來(lái)影響傷口愈合目前國(guó)內(nèi)外未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。皮膚成纖維細(xì)胞是傷口修復(fù)的重要效應(yīng)細(xì)胞任何能夠影響其生物學(xué)特性的因素最終都將會(huì)影響到傷口的愈合。為探討MMP9在糖尿病足傷口愈合中可能的新機(jī)制本課題選擇大鼠皮膚成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象體外給予不同濃度的糖和同型半胱氨酸刺激制備高分泌MMP9細(xì)胞模型探討高分泌MMP9情況下皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的變化同時(shí)觀察通過(guò)組織金屬蛋白酶抑制劑1TIMP1抑制MMP9的活性能否改善成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為。本課題的研究將為探討糖尿病皮膚傷口的難愈機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)也將為尋找糖尿病足的治療方法提供新的思路。目的⑴建立體外高表達(dá)MMP9皮膚成纖維細(xì)胞模型為后續(xù)的研究奠定基礎(chǔ)。⑵觀察高表達(dá)MMP9皮膚成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為和TIMP1的干預(yù)效果以探討MMP9對(duì)大鼠皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法①分別用正糖55MMOLL、高糖220MMOLL和高糖220MMOLL高同型半胱氨酸100ΜMOLL培養(yǎng)大鼠皮膚成纖維細(xì)胞檢測(cè)各組細(xì)胞MMP9MRNAREALTIMERTPCR法和蛋白ELISA法表達(dá)量以及MMP9蛋白的活性明膠酶譜法篩選出MMP9表達(dá)量及活性最高的組作為模型組進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。②采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖功能；CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力；ELISA法檢測(cè)細(xì)胞膠原羥脯氨酸分泌能力；劃痕實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞橫向遷移能力；TRANSWELL法評(píng)價(jià)細(xì)胞縱向遷移能力。結(jié)果⑴高糖高同型半胱氨酸組MMP9MRNA的表達(dá)量705±102蛋白的表達(dá)量2069±336PGML以及MMP9蛋白活性147±013均明顯高于正糖組分別為100±000、404±59PGML、057±012和高糖組分別為283±091、737±58PGML、092±011P均005。MMP9蛋白活性043±013卻較非干預(yù)組147±013明顯降低P結(jié)論①高糖高同型半胱氨酸聯(lián)合培養(yǎng)可成功建立體外高表達(dá)MMP9皮膚成纖維細(xì)胞模型。②高表達(dá)MMP9皮膚成纖維細(xì)胞增殖減慢、活力下降、遷移和膠原分泌能力降低提示MMP9可影響成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為。③外源性TIMP1作用下高表達(dá)MMP9皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為明顯改善提示抑制MMP9的活性有可能改善糖尿病足的傷口愈合。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多缺氧誘導(dǎo)因子-2α、VEGF與非小細(xì)胞肺癌中微血管生成及生物學(xué)轉(zhuǎn)移的關(guān)系.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的體外培養(yǎng)人胚胎骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANMESENCHYMALSTEMCELL，HMSCS，通過(guò)HMSCS在精原細(xì)胞培養(yǎng)條件下的生物學(xué)特征研究，探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為精原細(xì)胞的可行性，為HMSCS作為“種子細(xì)胞”開辟新的途徑。方法1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離純化、培養(yǎng)與鑒定無(wú)菌條件下取出脛骨，沖出骨髓液，以FICOLL密度梯度和差速貼壁相結(jié)合的方法分離、培養(yǎng)HMSCS。待細(xì)胞鋪滿瓶底面積的70％80％，即進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。025％胰蛋白酶002％EDTA消化，離心，重懸細(xì)胞并按13的比例進(jìn)行傳代接種培養(yǎng)，并分別用P2、P3、P4等表示傳代次數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)下列方法鑒定1倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生物學(xué)行為變化；2繪制HMSCS的生長(zhǎng)曲線選取生長(zhǎng)良好的第2、4、9代細(xì)胞用025％胰酶消化后以1104ML接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)，并從第2天起，每天在固定時(shí)間，選用5孔細(xì)胞分別加入5MGML的MTT20ΜL，混勻，孵育4H后棄培養(yǎng)液，加入150ΜL二甲基亞砜，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490NM波長(zhǎng)處測(cè)其OD值，取平均值，連續(xù)6D，以時(shí)間為橫軸、OD值為縱軸繪制不同代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線；3組織學(xué)染色將第三代的細(xì)胞培養(yǎng)4天后經(jīng)4％多聚甲醛固定并作常規(guī)蘇木精伊紅HE染色；4CD44、CD105免疫組化檢測(cè)將第三代細(xì)胞培養(yǎng)3天后，經(jīng)4％多聚甲醛固定并檢測(cè)細(xì)胞表面特異性分子標(biāo)記。2人胚胎MSCS在精原細(xì)胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)及檢測(cè)1人胚胎MSCS在精原細(xì)胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)取生長(zhǎng)良好的第三代HMSCS，用025％的胰酶002％EDTA消化，制成單細(xì)胞懸液，將其加入24孔培養(yǎng)板中，每孔加入濃度約為4104ML的細(xì)胞懸液1ML，將其隨機(jī)分組進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)照組用普通培養(yǎng)基DMEM100UML青霉素100UML鏈霉素10％胎牛血清培養(yǎng)，34D換液一次，共培養(yǎng)15D；實(shí)驗(yàn)組用條件培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基中添加1％人絕經(jīng)期促性腺激素HUMANMENOPAUSALGONADOTROPIN，HMG01UML胰島素01GL維生素A01GL維生素E1％谷氨酰胺1％非必需氨基酸1％丙酮酸鈉誘導(dǎo)培養(yǎng)HMSCS，34D換液一次，共培養(yǎng)15D。2人胚胎MSCS在精原細(xì)胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)后結(jié)果檢測(cè)在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化并拍照記錄，待細(xì)胞培養(yǎng)至第15D，采用SP法進(jìn)行細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè)，并嚴(yán)格按照說(shuō)明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，封片、鏡檢并拍照記錄。結(jié)果1原代培養(yǎng)的人胎兒骨髓MSCS在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)4H后開始變形貼附，經(jīng)過(guò)約4D的靜止期后，于培養(yǎng)第5D后開始進(jìn)入快速增殖階段，即對(duì)數(shù)增殖期，此時(shí)可見細(xì)胞折光性增強(qiáng)，呈旋渦狀或巢狀生長(zhǎng)，細(xì)胞突起明顯增長(zhǎng)，相互交織，培養(yǎng)至910天即可鋪滿瓶壁。待傳至第三代時(shí)，細(xì)胞形態(tài)趨于一致。此時(shí)HMSCS靜止期縮短，培養(yǎng)23D即進(jìn)入快速增殖期，第5D起，細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸緩慢，開始進(jìn)入平臺(tái)期。HE染色可見細(xì)胞呈長(zhǎng)梭行，胞質(zhì)豐富，核大，單個(gè)，圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示CD44、CD105呈陽(yáng)性表達(dá)，OCT4、CKIT呈陰性。2人胚胎MSCS在精原細(xì)胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)結(jié)果實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞大量死亡、脫落，而存活的細(xì)胞形態(tài)逐漸發(fā)生改變，于培養(yǎng)第15天時(shí)可見細(xì)胞突起變少變短，有的甚至看不到突起，胞體由長(zhǎng)梭形變成圓形或橢圓形。免疫組織化學(xué)顯示此時(shí)的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)OCT4、CKIT染色呈陽(yáng)性，而CD44、CD105呈陰性表達(dá)。對(duì)照組培養(yǎng)至第15天，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化，免疫組織化學(xué)檢測(cè)OCT4、CKIT染色呈陰性，CD44和CD105呈陽(yáng)性。結(jié)論1FICOLL密度梯度和差速貼壁相結(jié)合的方法可獲得純化的HMSCS，通過(guò)傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)至第10代，細(xì)胞仍生長(zhǎng)良好，未出現(xiàn)老化現(xiàn)象，從而成功地建立了HMSCS的體外培養(yǎng)體系；2通過(guò)不同代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的研究，發(fā)現(xiàn)傳至第三代的人胚胎MSCS純度高、增殖能力強(qiáng)，是實(shí)驗(yàn)選用的理想細(xì)胞；3倒置顯微鏡下細(xì)胞生物學(xué)行為觀察、HE染色、特異免疫組化顯示表面分子標(biāo)志物CD44、CD105為陽(yáng)性表達(dá)等方法有助于鑒定HMSCS；4人胚胎MSCS在精原細(xì)胞培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，細(xì)胞突起變少變短，甚至看不到突起，胞體由長(zhǎng)梭形變成圓形或橢圓形。免疫組織化學(xué)顯示此時(shí)的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)OCT4、CKIT染色呈陽(yáng)性，而CD44、CD105呈陰性表達(dá)，表明HMSCS在一定條件下，能表現(xiàn)出精原細(xì)胞的某些生物學(xué)特征。提示HMSCS具有轉(zhuǎn)分化為生精細(xì)胞的可能性。

簡(jiǎn)介：目的探討HMGA1SIRNA對(duì)人肝星狀細(xì)胞LX2中HMGA1、ASMA、ECAD基因的表達(dá)調(diào)控作用及增殖活性的影響并探討其可能的機(jī)制。方法1選擇體外培養(yǎng)LX2細(xì)胞作為研究對(duì)象分別設(shè)立以下六組①正常對(duì)照組②空白對(duì)照組③陰性對(duì)照組④轉(zhuǎn)染HMGA1SIRNA1⑤轉(zhuǎn)染HMGA1SIRNA2⑥轉(zhuǎn)染HMGA1SIRNA3。轉(zhuǎn)染48H后收集各組細(xì)胞。采用半定量RTPCR檢測(cè)和WESTERNBLOT印跡法檢測(cè)HMGA1的MRNA和蛋白表達(dá)篩選出干擾效果最佳的SIRNA序列。2選擇體外培養(yǎng)LX2細(xì)胞作為研究對(duì)象加入不同濃度的TGFΒ1終濃度1NGML、5NGML、10NGML孵育并配對(duì)照組。于24H后收集細(xì)胞提取LX2細(xì)胞總RNA及總蛋白。用半定量RTPCR及WESTERNBLOT印跡方法檢測(cè)TGFΒ1對(duì)LX2細(xì)胞HMGA1的MRNA和蛋白表達(dá)的影響。3采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對(duì)LX2細(xì)胞進(jìn)行HMGA1SIRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染將細(xì)胞分為4組①正常對(duì)照組、②TGFΒ1刺激組、③TGFΒ1NCSIRNA組和④TGFΒ1HMGA1SIRNA組。采用半定量RTPCR及WESTERNBLOT印跡法對(duì)LX2細(xì)胞中HMGA1、ΑSMA和ECAD的MRNA及蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)采用MTT法對(duì)LX2細(xì)胞增殖水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果1半定量RTPCR和WESTERNBLOT印跡法檢測(cè)HMGA1的表達(dá)與正常對(duì)照組、空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組相比3個(gè)干擾組細(xì)胞HMGA1基因和蛋白表達(dá)水平均明顯降低P﹤005其中干擾組HMGA1SIRNA1的干擾效果最好P﹤001。2隨著TGFΒ1劑量加大HMGA1基因表達(dá)水平逐漸升高各組間也有顯著差異P﹤005。3TGFΒ1刺激組與TGFΒ1NCSIRNA組之間細(xì)胞增殖水平及HMGA1、ΑSMA、ECAD的基因及蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P﹥005細(xì)胞增殖水平及HMGA1、ΑSMA表達(dá)均明顯高于正常對(duì)照組P﹤005ECAD表達(dá)顯著低于正常對(duì)照組P﹤005而TGFΒ1HMGA1SIRNA組細(xì)胞增殖水平及HMGA1、ΑSMA的基因及蛋白表達(dá)水平與TGFΒ1刺激組及TGFΒ1NCSIRNA組相比均顯著下降P﹤005ECAD表達(dá)水平顯著增高P﹤005。結(jié)論1靶向HMGA1的SIRNA能夠沉默人肝星狀細(xì)胞LX2中HMGA1的表達(dá)以HMGA1SIRNA序列1組沉默效果最好。2TGFΒ1作用于人肝星狀細(xì)胞LX2對(duì)HMGA1基因表達(dá)有顯著的上調(diào)作用。3干擾HMGA1基因可顯著抑制TGFΒ1對(duì)人肝星狀細(xì)胞LX2中ΑSMA基因和蛋白表達(dá)的促進(jìn)作用同時(shí)也可減輕對(duì)ECAD表達(dá)的抑制作用抑制TGFΒ1誘導(dǎo)的人肝星狀細(xì)胞LX2增殖水平的升高提示其參與了TGFΒ1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞活化。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文AOPP對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用姓名蘇小鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師付云20080527AOPP對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用中山大學(xué)碩士學(xué)位論文的影響。④取第4代生長(zhǎng)良好的HGF，胰酶消化后以1O105個(gè)／ML等量接種于24孔培養(yǎng)板中。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至相互融合時(shí)，分別加入含有100、50、5、05肛G／MLAOPPHSA含2％FBS的DMEM共培養(yǎng)72H后，收集各組細(xì)胞上清液，6000R／MIN，30MIN以去除細(xì)胞殘?jiān)?，用ELISA測(cè)定上清液中MMP一1的水平。結(jié)果①HGF最早在第4D從組織塊中爬出，大多呈梭形，胞漿豐滿，核仁清晰。一般10～15D長(zhǎng)滿瓶底，可進(jìn)行傳代。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線符合HGF生長(zhǎng)特點(diǎn)，免疫組化結(jié)果顯示HGF波形絲蛋白染色陽(yáng)性，角蛋白染色陰性，提示該細(xì)胞來(lái)源于中胚層，非上皮來(lái)源的細(xì)胞。AOPPHSA樣本為棕黃色，經(jīng)測(cè)定內(nèi)毒索含量均0025EU／ML，利用酸性條件下340NM處其吸光度值測(cè)得AOPPHSA濃度為48M咖L。②MTR結(jié)果顯示分別在復(fù)合培養(yǎng)的第1、2、3D，各濃度組AOPPHSA抑制HGF增殖，抑制率隨著濃度增加而升高，組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義尸≮O05，但50UG／ML和100UG／ML兩組抑制率在共培養(yǎng)第3D無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。50U∥ML和100UG／ML兩組抑制率存在時(shí)問(wèn)差異性，在共培養(yǎng)的第2D達(dá)到最高氏005，而5U∥ML組抑制率隨時(shí)間變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。③加入AOPPHSA的無(wú)血清DMEM誘導(dǎo)72H后，A11ILEXINVPI雙染，流式細(xì)胞儀所形成的散點(diǎn)圖上實(shí)驗(yàn)組比之對(duì)照組凋亡率有輕度增加，但兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義胗005。④ELISA結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析顯示AOPPHSA各濃度組HGF中MMP1的合成量都高于對(duì)照組尸005。另外，不同濃度組之間MMPL的合成量亦存在差異尸005，其合成量隨著AOPP濃度升高而增加。結(jié)論①AOPP可能通過(guò)抑制HGF增殖，影響牙周組織修復(fù)能力而促進(jìn)DM時(shí)牙周病的發(fā)展。該實(shí)驗(yàn)中未觀察到AOPP對(duì)HGF凋亡的影響，提示AOPP對(duì)HGF增殖的抑制作用可能是通過(guò)其它途徑或方式來(lái)實(shí)現(xiàn)的。②AOPP可能通過(guò)促進(jìn)MMP1合成，導(dǎo)致膠原降解，而介導(dǎo)DM時(shí)氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的牙周組織破壞，推測(cè)該作用可能是通過(guò)直接或間接激活單核細(xì)胞作用于HGF兩條途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)，但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。關(guān)鍵詞牙齦成纖維細(xì)胞，晚期蛋白氧化產(chǎn)物，增殖，基質(zhì)金屬蛋白酶一L