簡(jiǎn)介：鍰旦次學(xué)博士學(xué)位論文缺氧對(duì)卵巢癌細(xì)胞株5KOV3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)機(jī)制院寺蛙系幢名女F產(chǎn)科醫(yī)院鰣產(chǎn)科學(xué)高蜀君措導(dǎo)教師王互亙墼壁完成日期三業(yè)生生』點(diǎn)止出體外培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞，分別缺氧0、8、16、24H。采用RTPCR檢測(cè)HIF一1A和ECAD的MRNA表達(dá)，WESTERNBLOT檢測(cè)HIF一1Ⅱ和ECAD的蛋白表達(dá)，RTPCR和REALTIMEPCR檢測(cè)SNAIL基因的MRNA表達(dá)，了解缺氧對(duì)SKOV3細(xì)胞ECAD表達(dá)的影響。用HIF一1A抑制劑RAPAMYCIN預(yù)處理細(xì)胞30分鐘后，并在缺氧處理后，檢測(cè)上述各指標(biāo)的變化，探討ECAD與HIF一1Q表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果常規(guī)培養(yǎng)的SKOV3穩(wěn)定表達(dá)HIF一1Q和ECADHERIN。缺氧使HIF一1O蛋白水平表達(dá)增加，于缺氧16H達(dá)到峰值，為對(duì)照組的62倍PO005，并維持高表達(dá)；缺氧不同時(shí)間，HIF一1D的MRNA表達(dá)無明顯變化。ECAD的MRNA和蛋白均隨缺氧時(shí)間延長而表達(dá)下降，缺氧16和24H其表達(dá)分別為對(duì)照組的48％PO002和5％P00003。ECADHERIN的直接抑制因子SNAIL基因的MRNA表達(dá)則隨缺氧時(shí)間延長而逐漸增強(qiáng)，REALTIMEPCR顯示常氧培養(yǎng)的SKOV3中SNAIL表達(dá)為13500107106，缺氧8H其表達(dá)為18310121106，缺氧16H為39780373X106，缺氧24H為5681O65106，較對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。RAPAMYCIN可以抑制缺氧誘導(dǎo)的HIF一1Q和SNAIL基因的表達(dá)增加，同時(shí)恢復(fù)缺氧情況下ECADHERIN的表達(dá)。RAPAMYCIN可以從蛋白水平抑制HIF一1Q表達(dá)，防止ECAD在缺氧環(huán)境中的降低。第三部分材料與方法運(yùn)用HIF一1Q刺激劑COBALTCHLORIDECOCL作用于SKOV3細(xì)胞，以使HIF一1A過表達(dá)，檢測(cè)HIF一1Q過表達(dá)時(shí)，RAPAMYCIN對(duì)SNAIL表達(dá)的影響，比較其HIF一1Ⅱ和SNAIL之間的作用關(guān)系。分別針對(duì)SKOV3細(xì)胞的HIF一1Ⅱ和SNAIL基因進(jìn)行RNA干擾。設(shè)計(jì)針對(duì)HIF一1Ⅱ和SNAIL基因的SIRNA，轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞，RTPCR檢測(cè)干擾后HIFLA和SNAIL基因MRNA表達(dá)，REALTIMEPCR檢測(cè)SNAIL基因MRNA表達(dá)，WESTERNBLOT檢測(cè)HIF～1O的蛋白表達(dá)。進(jìn)一步明確兩者之間的相互關(guān)系。結(jié)果利用COCL。作用于SKOV3細(xì)胞，使HIFLA過表達(dá)，則RAPAMYCIN失去對(duì)SNAIL基因的抑制作用。RNA干擾顯示，HIF一1D的SIRNA不但可以下調(diào)HIF一1Ⅱ的表達(dá)，還可以抑制SNAIL基因的MRNA表達(dá)，而SNAIL的SIRNA對(duì)HIF一1A的表達(dá)無影響。結(jié)論缺氧／復(fù)氧可增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3的增殖和侵襲能力，降低腫瘤細(xì)胞之間的粘附能力。這些改變部分可能是通過改變細(xì)胞周期分布，增加刪P2的分泌，

簡(jiǎn)介：1研究目的小兒肛瘺是小兒科常見的肛腸疾病，其病因和治療與成人肛瘺不盡相同。盡管某些小兒肛瘺有自愈傾向，但在臨床治療中，由于護(hù)理不當(dāng)?shù)仍颍资共∏榉磸?fù)或加重。導(dǎo)師在臨床中應(yīng)用祛風(fēng)除濕化瘀法治療小兒肛瘺已經(jīng)初步取得良好的療效。本研究擬進(jìn)一步系統(tǒng)觀察肛瘺膏治療小兒肛瘺的臨床療效，深入研究瘺管反復(fù)發(fā)作不能愈合及祛風(fēng)除濕化瘀為治則的肛瘺膏治愈小兒肛瘺的細(xì)胞生物學(xué)作用機(jī)理，為臨床治療本病提供更確切的方法。2研究方法和內(nèi)容21臨床研究采用隨機(jī)、對(duì)照的方法選擇38例小兒肛瘺患者分為治療組與對(duì)照組各19例。治療組選用肛瘺膏，對(duì)照組選用馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏，記錄患者的發(fā)病病因、病程、疾病分型、體溫、內(nèi)口位置及數(shù)量、采用3級(jí)評(píng)分法評(píng)定患者臨床癥狀、體征、指診、舌苔、脈象或察指紋情況；治療后癥狀、體征、指診、肛管局部分泌物PH值的變化、不良反應(yīng)及隨訪情況。22實(shí)驗(yàn)研究1實(shí)驗(yàn)一選擇手術(shù)剔除的一完整小兒肛瘺瘺管組織，采用組織細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞并進(jìn)行純化、傳代。觀察成纖維細(xì)胞一般生物學(xué)特性、繪制成纖維細(xì)胞生長曲線、成纖維細(xì)胞HE染色觀察并采用免疫細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行細(xì)胞起源鑒定。對(duì)照組取直腸下段黏膜、黏膜下層組織標(biāo)本進(jìn)行體外成纖維細(xì)胞培養(yǎng)觀察。2實(shí)驗(yàn)二選用體外培養(yǎng)的肛瘺瘺管組織成纖維細(xì)胞，并與PPH術(shù)痔上黏膜環(huán)形切除吻合術(shù)中取下的直腸下段黏膜及黏膜下層組織進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長期成纖維細(xì)胞做對(duì)照，分別加入用藥物血清學(xué)方法制備的不同濃度全方藥物血清、祛風(fēng)除濕拆方及活血化瘀拆方藥物血清。觀察各組成纖維細(xì)胞生物學(xué)性狀的改變。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)用藥前后細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況。3實(shí)驗(yàn)三將原代培養(yǎng)的肛瘺瘺管組織細(xì)胞進(jìn)行酶消化法純化培養(yǎng)獲得上皮細(xì)胞，采用免疫細(xì)胞化學(xué)進(jìn)行細(xì)胞起源鑒定。取培養(yǎng)的上皮細(xì)胞分別加入不同濃度全方、祛風(fēng)除濕拆方、活血化瘀拆方水溶液，藥物干預(yù)后12H、24H，觀察各組上皮細(xì)胞的一般生物學(xué)性狀變化，應(yīng)用間接免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法聯(lián)合LSCM觀測(cè)瘺管上皮細(xì)胞角蛋白分布及含量變化。4實(shí)驗(yàn)四向?qū)?shù)生長期瘺管成纖維細(xì)胞懸液內(nèi)加入含不同濃度藥物血清的DMEM培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)6H、12H，取細(xì)胞上清液檢測(cè)腫瘤壞死因子TNFΑ和一氧化氮NO含量。觀察用藥前后巨噬細(xì)胞分泌并釋放TNFΑ和NO的變化情況。并取加DMEM培養(yǎng)的細(xì)胞上清液作為正常對(duì)照組進(jìn)行比較。3研究結(jié)果31臨床研究結(jié)果1治療3D后，治療組瘺管滲液、疼痛、皮膚局部顏色改變較對(duì)照組有明顯改善P＜005；治療7D后，治療組各臨床癥狀較對(duì)照組均有明顯改善P＜005。2用藥后第3天，治療組局部分泌物PH值測(cè)定降低，偏中性；對(duì)照組局部分泌物PH值測(cè)定偏堿性，兩組PH值測(cè)定結(jié)果有顯著性差異P＜005。3治療組肉芽組織開始生長時(shí)間、內(nèi)口愈合時(shí)間、外口愈合時(shí)間明顯短于對(duì)照組，兩者比較有顯著性差異P＜005。4治療組痊愈10例5263％，明顯優(yōu)于對(duì)照組3例1579％，兩組具有非常顯著差異P＜001。治療組總有效率8947％，優(yōu)于對(duì)照組7895％，兩組具有顯著差異P＜005。5治療組用藥后觀察未出現(xiàn)局部不良反應(yīng)。對(duì)照組用藥后1例出現(xiàn)短暫性局部分泌物增多。6隨訪1年，治療組平均復(fù)發(fā)率1053％，對(duì)照組平均復(fù)發(fā)率2105％，二者有顯著性差異P＜001。32實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果321實(shí)驗(yàn)一研究結(jié)果瘺管組織塊在培養(yǎng)至5～7D，倒置顯微鏡下可見典型的肛瘺瘺管組織成纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞潛伏期、對(duì)數(shù)生長期、平臺(tái)期分別為0～1D、2～4D和5～8D；對(duì)照組直腸下段黏膜及黏膜下組織培養(yǎng)出的成纖維細(xì)胞外形與肛瘺瘺管組織成纖維細(xì)胞無明顯差別。瘺管成纖維細(xì)胞蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)波形蛋白鑒定為陽性，角蛋白鑒定為陰性。322實(shí)驗(yàn)二研究結(jié)果1應(yīng)用不同濃度肛瘺膏及其拆方藥物血清1～5組干預(yù)后，見成纖維細(xì)胞細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯改變。空白對(duì)照組血清6組、胎牛血清組7組、肛瘺膏等劑量組對(duì)正常直腸黏膜組織8組作用24H后成纖維細(xì)胞增殖明顯。2各藥物血清組在6H、12H、24H各時(shí)相均能抑制成纖維細(xì)胞增殖，其作用與含藥劑量、作用時(shí)間呈正相關(guān)。其中以全方大劑量藥物血清組對(duì)瘺管成纖維細(xì)胞的增殖抑制作用最強(qiáng)。3各藥物血清作用24H后，均出現(xiàn)調(diào)亡峰，并隨濃度升高凋亡峰逐漸升高，全方大劑量藥物血清組調(diào)亡峰最為明顯，組間比較有顯著性差異P＜005。4不同藥物血清作用24H后，直方圖中均可見G0G1期峰前的亞二倍體峰，即調(diào)亡峰，1～3組凋亡峰逐漸升高，并均高于4、5組，組間比較有顯著性差異P＜005，3組調(diào)亡峰最為明顯，1～5各組與6組對(duì)照組有顯著性差異P＜001；8組與6組對(duì)照組、7組比較差異不明顯P＞005；8組與6組相比，細(xì)胞周期分布、進(jìn)入G2M的細(xì)胞比率無顯著性差異P＞005。323實(shí)驗(yàn)三研究結(jié)果1瘺管組織塊在培養(yǎng)至7～9D，可見組織塊周圍有上皮細(xì)胞，其間夾雜有較多成纖維細(xì)胞生長。消化傳代后上皮細(xì)胞為橢圓形單層生長。2藥物干預(yù)后24H內(nèi)，上皮細(xì)胞開始回縮，細(xì)胞變圓，大多數(shù)細(xì)胞與鄰近細(xì)胞接觸消失。3激光掃描共聚焦顯微鏡觀察上皮細(xì)胞角蛋白均分布于細(xì)胞質(zhì)中，呈綠色熒光，細(xì)胞核呈紅色熒光。4空白對(duì)照組上皮細(xì)胞角蛋白熒光強(qiáng)度較弱308225±7961，藥物干預(yù)12H，全方大劑量組角蛋白熒光強(qiáng)度增強(qiáng)最為明顯747524±12352，分布增多，細(xì)胞表面較光滑，細(xì)胞中央為呈紅色熒光的細(xì)胞核，與其它各組比較有顯著性差異P＜005；各組熒光強(qiáng)度由強(qiáng)至弱依次為全方大劑量組、全方小劑量組、祛風(fēng)除濕拆方大劑量組、活血化瘀拆方大劑量組，空白對(duì)照組，組間比較均有顯著性差異P＜005；藥物干預(yù)24H后，全方各組角蛋白綠色熒光越來越多，排列緊密，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)明顯，與各拆方組均有顯著性差異P＜005，大劑量全方組熒光強(qiáng)度874415±23813尤為明顯P＜005。324實(shí)驗(yàn)四研究結(jié)果各組藥物血清處理巨噬細(xì)胞與混合細(xì)胞6H后，TNFΑ、NO濃度均降低，大劑量組抑制巨噬細(xì)胞TNFΑ、NO的產(chǎn)生作用最為顯著，且隨時(shí)間延長12H，兩者濃度降低顯著，與空白血清組比較，均有顯著性差異P＜001，同一時(shí)間、同濃度藥物血清對(duì)巨噬細(xì)胞、混合細(xì)胞釋放TNFΑ、NO的影響有顯著性差異P＜005。4結(jié)論1成纖維細(xì)胞的凋亡障礙可能是肛瘺炎癥后期嚴(yán)重瘢痕形成的重要機(jī)制。2巨噬細(xì)胞過度釋放炎性介質(zhì)是肛瘺炎癥持續(xù)存在關(guān)鍵，肛瘺膏通過調(diào)控巨噬細(xì)胞，減少局部炎性介質(zhì)的過度釋放而起到保護(hù)作用。3肛瘺膏通過雙向調(diào)控成纖維細(xì)胞增殖治愈小兒肛瘺。在肛瘺早期，肛瘺膏主要是抑制成纖維細(xì)胞增殖，而當(dāng)炎癥消退后，肛瘺膏的主要作用是促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖。4肛瘺膏對(duì)上皮細(xì)胞骨架蛋白具有修復(fù)作用。5推測(cè)肛瘺膏通過調(diào)控成纖維細(xì)胞增殖間接調(diào)節(jié)膠原合成及降解達(dá)到平衡狀態(tài)。6肛瘺膏對(duì)于瘺管成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞分子生物學(xué)影響，如骨架蛋白角蛋白、波形蛋白DNA、RNA含量變化有待于進(jìn)一步研究。

簡(jiǎn)介：YIO9048分類號(hào)R23212Q密級(jí)坌亞UDC學(xué)號(hào)031938東南大學(xué)碩士學(xué)位論文REGLV基因?qū)Y(jié)直腸癌LOVO細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響研究生姓名高蝰導(dǎo)師姓名董墻揸麴援申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)堂亟論文提交日期至殳Q魚生曼旦絲旦學(xué)位授予單位盔壺太雯學(xué)科專業(yè)名稱痘堡生痘堡生堡蘭論文答辯日期至Q魚墮生魚曼縣璺旦學(xué)位授予日期壘QQ曼生旦旦答辯委員會(huì)主席圍噻里夔攫評(píng)閱人2006年05月24日東南大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)胞系表達(dá)較前兩者弱2成功構(gòu)建含有REGLV基因的重組質(zhì)粒PCDNA31REGW，并轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得穩(wěn)定表達(dá)REGLV基因的LOVO細(xì)胞3REGIV基因轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞增殖活性弱于轉(zhuǎn)染前LOVB細(xì)胞，有顯著性差異PO01；而轉(zhuǎn)染前后LOVO細(xì)胞的侵襲力比較無明顯差異；轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞在5FU干預(yù)48小時(shí)后REGRV表達(dá)無明顯改變。4REGLV基因轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞在5FU的濃度O391、0782MG／L時(shí)生長抑制率明顯強(qiáng)于轉(zhuǎn)染前LOVB細(xì)胞P001，而在濃度大于3125MG／L時(shí)轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞生長抑制率弱于轉(zhuǎn)染前LOVO細(xì)胞PO01；轉(zhuǎn)染后LO、，O細(xì)胞IC50值小于轉(zhuǎn)染前L0VO細(xì)胞。5REGIV基因轉(zhuǎn)染前LOVO細(xì)胞EMYC基因表達(dá)呈陽性，而轉(zhuǎn)染后表達(dá)明顯下調(diào)；轉(zhuǎn)染前后LOV0細(xì)胞BCL2基因均呈陰性，5FU3125MG／1干預(yù)轉(zhuǎn)染前LOVO細(xì)胞BCL2基因呈弱表達(dá)而干預(yù)轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞BCL2基因表達(dá)陽性。6在5FU較高濃度0782、3125MG／1干預(yù)48小時(shí)后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染前LOV0細(xì)胞的凋亡率明顯高于轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞，瓊脂糖凝膠電泳顯示轉(zhuǎn)染前LOVO細(xì)胞梯狀條帶比轉(zhuǎn)染后L0VO細(xì)胞條帶清晰【結(jié)論】L、明確了四種結(jié)直腸癌細(xì)胞系的REGW表達(dá)水平及成功構(gòu)建轉(zhuǎn)染了PCDNAREGW；2、REGLV基因轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞CMYC基因表達(dá)明顯下調(diào)，提示REGLV基因可能與CMYC基因相關(guān)3，REGLV基因?qū)D(zhuǎn)染前后LOV0細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞侵襲力無明顯影響；4、REGLV基因轉(zhuǎn)染后LOVO細(xì)胞在5FU較高濃度干預(yù)下REGIV基因表達(dá)無明顯改變，提示5FU不影響LOVO細(xì)胞REGRV基因的表達(dá)；5、REGW基因?qū)?FU誘導(dǎo)LOV0細(xì)胞凋亡有較強(qiáng)的拮抗作用，其抗凋亡機(jī)制可能通過上調(diào)BCL2基因表達(dá)發(fā)揮作用?！娟P(guān)鍵詞】REGIV基因；結(jié)直腸癌細(xì)胞系；RTPCR；基因轉(zhuǎn)染；增殖；侵襲力；細(xì)胞凋亡；CMYC基因；BCL2基因本課題受國家自然科學(xué)基金30400534資助

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文胚胎干細(xì)胞微環(huán)境對(duì)角膜上皮細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名胥瑩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師王智崇20060501胚胎千細(xì)胞微環(huán)境對(duì)角膜上皮細(xì)胞生物學(xué)特性的影響細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期為第26天；P6代實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期為第25天，對(duì)照組細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期為第27天。流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期P2代實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞處于S期的比例是407％，剝照組細(xì)胞處于S期的比例是286％；P3代實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞處于S期的比例是434％，對(duì)照組細(xì)胞處于S期的比例是539％；P5代實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞處于S期的比例是434％，對(duì)照組細(xì)胞處于S期的比例是49％；P6代實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞處于S期的比例是274％，對(duì)照組細(xì)胞處于S期的比例是322％。2與胚胎干細(xì)胞的共培養(yǎng)的人角膜上皮細(xì)胞形態(tài)有所變化。細(xì)胞體積變小，核漿比變大，形態(tài)也變得比較規(guī)則，更接近原代從角膜緣萌出的細(xì)胞。流式細(xì)胞儀分選前熒光陰性率為42％，分選后收集的細(xì)胞熒光陰性率為922％。結(jié)論胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)體外培養(yǎng)角膜上皮細(xì)胞的影響，需要作用至少一代的時(shí)間才能檢測(cè)到變化。表現(xiàn)為使角膜上皮細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長期增長，角膜卜皮細(xì)胞進(jìn)入S期的細(xì)胞比例增多。胚胎干細(xì)胞與人角膜上皮細(xì)胞共培養(yǎng)，更利于胚胎干細(xì)胞體外生長的微環(huán)境對(duì)角膜上皮細(xì)胞的影響，能夠觀察到角膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)向幼稚細(xì)胞方向變化。胚胎干細(xì)胞微環(huán)境對(duì)于人角膜上皮細(xì)胞去分化的影響是一個(gè)有益的探索，其最終實(shí)現(xiàn)的可能仍需要在去分化理論和機(jī)制研究進(jìn)一步發(fā)展的基礎(chǔ)卜I進(jìn)行更深入的探討。關(guān)鍵詞胚胎干細(xì)胞角膜上皮細(xì)胞；去分化；共培養(yǎng)

簡(jiǎn)介：肝細(xì)胞癌HEPATOCELLULARCARCINOMAHCC是嚴(yán)重危害人類健康的常見惡性腫瘤流行病學(xué)研究顯示肝炎病毒感染、黃曲霉毒素的攝入及酗酒是其重要的致病因素分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的深入研究對(duì)HCC發(fā)生機(jī)制的闡明起到了重要的推動(dòng)作用研究顯示腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多階段發(fā)展過程涉及細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等諸多方面尤其是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與疾病關(guān)系已成為生命科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和前沿故本研究首先利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了HCC、癌旁肝組織及正常肝組織中P4442和STAT3磷酸化與CFOS和CJUN蛋白的表達(dá)并對(duì)其相關(guān)性和臨床意義進(jìn)行了探討

簡(jiǎn)介：目的該實(shí)驗(yàn)探討皮膚成纖維細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)方法觀察、總結(jié)體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞特征以獲得在體外穩(wěn)定生長的正常皮膚成纖維細(xì)胞并探討人皮膚成纖維細(xì)胞在異體的脫細(xì)胞真皮支架上的生長方法1人皮膚成纖維細(xì)胞的分離和體外培養(yǎng)2觀察體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性3在異體的脫細(xì)胞真皮支架上接種成纖維細(xì)胞進(jìn)行了光鏡及電鏡的觀察結(jié)果1確定了DISPASEⅡ及膠原酶消化法為較好的成纖維細(xì)胞的分離方法2體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞具有穩(wěn)定的生物學(xué)特性3在同種異體的脫細(xì)胞真皮支架上接種成纖維細(xì)胞成纖維細(xì)胞生長良好結(jié)論正常人的皮膚成纖維細(xì)胞經(jīng)DISPASEⅡ及膠原酶消化法分離收集后以210密度接種較適宜體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞具有與體內(nèi)相似的生物學(xué)特性人皮膚成纖維細(xì)胞在異體的脫細(xì)胞真皮支架上能生長形成活性真皮替代物

簡(jiǎn)介：1R1109050分類號(hào)R617學(xué)校代碼10392福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠肝癌細(xì)胞高增殖亞群生物學(xué)與耐藥特征實(shí)驗(yàn)研究THESTUAYONTHEBIOLOGICALANDCHEMORESISTANCECHARACTERISTICOFHEPATOMASUBGROUPWITHHIGHPROLIFERATIONABILITYINRATS接收學(xué)院?？偱R床醫(yī)學(xué)院申請(qǐng)人葉玉祥學(xué)科專業(yè)外科學(xué)普通外科導(dǎo)師；王烈教授研究起止日期2006年4月至2007年4月■OO七年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明和版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的真實(shí)成果。除文中已注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本論文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。導(dǎo)師簽名手寫丑年』月蘭日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)福建醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。●保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書曬汕寫年手一0R、二名侈一簽一者一作一芝且H，汐一一F可一籜7一引拿鸛竺燃D一譬寫年手一一名一夕一姒旦者一作一

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文肺癌特異性腦轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的篩選及其生物學(xué)活性分析姓名張峻青申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師張賀龍20070501第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文獨(dú)獨(dú)創(chuàng)創(chuàng)性性聲聲明明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，不包含本人或他人已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了致謝。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名日期保保護(hù)護(hù)知知識(shí)識(shí)產(chǎn)產(chǎn)權(quán)權(quán)聲聲明明本人完全了解第四軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬第四軍醫(yī)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位仍然為第四軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容（含電子版，保密內(nèi)容除外），可以采用影印，縮印或其他復(fù)制手段保存論文。學(xué)校有權(quán)允許論文被查閱和借閱，并在校園網(wǎng)上提供論文內(nèi)容的瀏覽和下載服務(wù)。論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)浙江大學(xué)浙江新和成股份有限公司博士后研究工作報(bào)告CRIPTO基因SIRNA化學(xué)合成和對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響工作完成日期提交報(bào)告日期范鈺2QQ5生2旦2QQ5生3目浙江大學(xué)浙江2005年3月篇一部分CRIPTO基因SIRNA的合成前言惡性腫瘤是一種危害人類生命健康的主要疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，每年全世界新發(fā)惡性腫瘤病人約1000萬，死于腫瘤的600～700萬。在我國，每年新發(fā)病約200萬，死亡約140萬／按13億人口計(jì)算。隨著人口老齡化、吸煙、生活方式的城市化和工業(yè)化影響的進(jìn)一步加強(qiáng)，這一趨勢(shì)將繼續(xù)下去。腫瘤為多機(jī)制的復(fù)雜疾病，目前仍用早期診斷、手術(shù)、放療、化療等手段，療效有限，且給病人帶來較大的痛苦。結(jié)腸癌是目前我國發(fā)病率增長最快的腫瘤之一。轉(zhuǎn)移及化療耐藥是結(jié)腸癌治療的最大難題，目前尚缺乏有效的治療手段及藥物，尋找有效的治療藥物和治療手段，乃當(dāng)務(wù)之急。徹底攻克結(jié)腸癌等惡性腫瘤的艱巨任務(wù)只能通過以上治療手段結(jié)合免疫治療、基因治療等綜合治療手段來完成。在基因治療領(lǐng)域中，RNA干擾和小干擾核糖核酸分子SMALLINTERFERINGRNA，SIRNA引起了廣泛的注意。RNA干擾，又稱RNA干涉RNAINTERFERENCE，RNAI是近年來發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)節(jié)MRNA的生物學(xué)現(xiàn)象，能夠使基因表達(dá)的MRNA被相應(yīng)的敬鏈RNA分子敲除，其效果要遠(yuǎn)強(qiáng)于正義和反義RNA【LJ。目前的研究表明，參與這種RNAI作用的主要分子是雙鏈RNA，在細(xì)胞內(nèi)是以21～23個(gè)核苷酸的形式發(fā)揮作用的，而且已有人工合成的雙鏈SIRNA，具有明顯的敲除相應(yīng)基因MRNA的效果¨J。在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中對(duì)腫瘤正相關(guān)基因的抑制，無疑是一個(gè)值得探索的方向。大多數(shù)實(shí)體瘤的發(fā)生發(fā)展與癌基因的激活與擴(kuò)增有關(guān)。最近研究發(fā)現(xiàn)，畸胎瘤衍生生長因子一CRIPTO基因與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)?。CRIPTO是一種白分泌裂腫瘤生長因子，是表皮生長因子EGF家族成員之一。該基因最早在人和小鼠胚胎腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)在人乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、陰莖癌、膀胱癌及前列腺癌等中均呈過度表達(dá)，而它在正常組織中都不表達(dá)或低表達(dá)IJLJ。提示該基因在結(jié)腸癌等惡性腫瘤的形成發(fā)展中扮演著重要的角色。由此提示，它可作為一個(gè)惡性腫瘤基因治療的新靶點(diǎn)。為此，本研究首先針對(duì)CRIPTOMRNA編碼區(qū)特點(diǎn)，采用化學(xué)方法合成了12個(gè)SIRNA。其次采用實(shí)時(shí)定量PCR篩選出2個(gè)效果最好的SIRNA。為深入探討所設(shè)計(jì)合成SIRNA對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響．本研究觀察了SIRNA轉(zhuǎn)染對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞端粒酶活性和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶的影響，轉(zhuǎn)染SIRNA對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲、失巢凋亡和蛋白激酶BAKT磷酸化的影響。材料和方法L材料2SIRNA合成本SIRNA由杭州新瑞佳生物技術(shù)公司合成。所有的SIRNA分子都經(jīng)過2位上脫保護(hù)、脫鹽、純化、和退火形成雙鏈處理，然后溶于焦碳酸二乙酯處理的蒸餾水中。整個(gè)化學(xué)合成可大致分成四個(gè)的過程1寡聚核糖核酸的合成；2脫保護(hù)；3純化分離；4脫鹽退火無菌消毒。具體制備操作如下1寡聚核糖核酸的合成SIRNA的合成是在自動(dòng)DNA／RNA合成儀APPLIEDBIOSYSTEMSEXPEDITE8909上進(jìn)行，根據(jù)設(shè)計(jì)的小干擾RNA分子的核酸序列的次序?qū)?duì)應(yīng)的核苷酸逐個(gè)連接起來。第一步是將與固相連接的胸營上5’位的保護(hù)基在3％三氯乙酸的作用下洗脫第二步在活性催化劑S乙基四唑的作用下，將5’．0．對(duì)二甲氧基三苯甲基．胸苷亞磷酰胺偶聯(lián)到已脫去保護(hù)的上一個(gè)胸苷上，形成二胸苷亞磷酸三酯。偶合時(shí)間和偶合循環(huán)的次數(shù)均按儀器廠家提供程序來完成；第三步是將偶合的二二胸苷亞磷酸三酯在O．05M碘水的作用下氧化成二胸苷磷酸三酯；四步是乙?；?，將圃相上的少量未反應(yīng)的活性基團(tuán)例如羥基和胺基在乙酸酐的作用下形成酯或酰胺．從而達(dá)到封閉作用，用以減少整體副產(chǎn)物的產(chǎn)生。重復(fù)此循環(huán)直至完成全部核酸序列的合成。2脫保護(hù)將合成好的固相SIRNA放入一個(gè)可以密封的小瓶，并與加入LML的甲胺水

簡(jiǎn)介：目的間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMEELLS，MSCS具有高度增殖、自我更新的能力，廣泛分布于多種人體組織中，參與機(jī)體組織器官的正常功能活動(dòng)和損傷修復(fù)，是再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。目前已成功地從人骨髓、外周血、肌肉、脂肪、臍血、羊水及胎兒組織中分離并鑒定出MSCS。其中骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMSCS研究最多，也取得了一些進(jìn)展。但也發(fā)現(xiàn)臨床采集骨髓有一定困難，可能感染并引起并發(fā)癥，而且隨著供者年齡增加其數(shù)量、增殖和分化能力均顯著下降。近幾年來有學(xué)者發(fā)現(xiàn)胎盤組織中存在MSCS。與骨髓取材相比胎盤在胎兒娩出后即完成使命，成為“廢棄”物，其取材方便，易于分離，對(duì)其研究不會(huì)涉及倫理道德問題，因而可能成為組織修復(fù)和基因治療的新細(xì)胞來源。本課題旨在探索體外分離培養(yǎng)胎盤來源多能細(xì)胞PLACENTADEFTVEDMUTIPOTENTCELLSPDMCS的方法和條件，以及對(duì)其生物學(xué)和功能上的特性進(jìn)行初步研究。對(duì)象和方法1胎盤組織30份在無菌條件下，采集足月健康順產(chǎn)分娩孕婦的胎盤。2PDMCS的制備剪切胎盤蛻膜組織12MM。大小的組織塊，用酶消化法從中分離得到細(xì)胞懸液，通過人淋巴分離液密度梯度離心得到單核細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶中。3取原代到15代細(xì)胞分別利用MTT染色技術(shù)，免疫組織化學(xué)染色，HE染色，透射電鏡，以及流式細(xì)胞檢測(cè)儀，從不同層面和角度鑒定胎盤來源多能細(xì)胞的生物學(xué)特征，并與BMSCS進(jìn)行對(duì)比研究，以觀察兩者之間在生物學(xué)特性方面的異同。結(jié)果1細(xì)胞培養(yǎng)通過混合酶消化法可以得到PDMCS，細(xì)胞形態(tài)良好，傳至15代沒有形態(tài)改變。2細(xì)胞形態(tài)通過倒置顯微鏡和HE染色觀察可見細(xì)胞呈長梭形，漩渦狀生長，細(xì)胞體積較大。3細(xì)胞生長規(guī)律原代細(xì)胞接種后的9～14天出現(xiàn)細(xì)胞克隆。傳代之后的第4天為對(duì)數(shù)生長期，此后到第7天為平穩(wěn)期。14天左右為衰退期。與文獻(xiàn)報(bào)道的來自于骨髓的間充質(zhì)干細(xì)胞的生長規(guī)律類似。4細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)通過透射電鏡觀察PDMCS和BMSCS，發(fā)現(xiàn)兩者有共同的特點(diǎn)，即核膜不規(guī)則，核仁明顯，核內(nèi)以常染色質(zhì)為主，且分布均勻；胞漿內(nèi)，可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，線粒體，核糖體等細(xì)胞器，并且胞膜完整，表面有大量微絨毛。5表面標(biāo)志通過免疫組織化學(xué)染色和流式細(xì)胞檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)PDMCS表達(dá)CD105，CD166，CD44，CD29，CD9，HLAABC，不表達(dá)CD34，CD40L，和HLADR。這與BMSCS表面抗原標(biāo)志表達(dá)相類似。PDMCS表達(dá)胚胎干細(xì)胞表面抗原標(biāo)志SSEA3，SSEA4，TFRA160，TRA181，OCT4的量高于BMSCS。結(jié)論1用酶消化法可以從足月分娩的胎盤蛻膜組織中分離獲得長梭形貼壁生長的細(xì)胞PDMCS，這類細(xì)胞具有與BMSCS相似的生物學(xué)特性。2PDMCS較BMSCS更為原始。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多Notch1活化信號(hào)對(duì)肝細(xì)胞癌和肺癌上皮細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人涎腺多形性腺瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其生物學(xué)特性姓名張秀琴申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王潔200331中文摘要加少量培養(yǎng)液，剛沒過組織塊，靜止培養(yǎng)。3天后，第一次觀察，以后每天觀察一次，以后視PH值變化加或更換新鮮培養(yǎng)液。第4天，觀察有個(gè)別成纖維細(xì)胞游出，培養(yǎng)第7天，倒置顯微鏡下見部分組織塊周圍長出細(xì)胞暈，細(xì)胞呈上皮樣鑲嵌排列，少數(shù)細(xì)胞呈分散生長狀態(tài)。每3天換一次液，第17天，第一次傳代。用025％胰酶和002％EDTA11消化細(xì)胞。對(duì)成纖維細(xì)胞采取了消化的方法，經(jīng)2～3次傳代后獲得較為純凈的腫瘤細(xì)胞，現(xiàn)在已經(jīng)連續(xù)傳代12次以上，建立了有限細(xì)胞系，命名為SPA02。結(jié)果1生長情況SPA腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞從組織塊周圍游出，形成“細(xì)胞暈”，隨著細(xì)胞的分裂、增殖，細(xì)胞暈逐漸擴(kuò)大，最后連接成片?？梢娪兄丿B生長現(xiàn)象。傳代后細(xì)胞有的呈單個(gè)分散狀態(tài)，也有的呈團(tuán)塊存在。貼壁后，經(jīng)過一段時(shí)間的適應(yīng)期，細(xì)胞開始分裂、增殖，隨著細(xì)胞的增殖先形成小片狀，然后連成一大片。早期，每瓶擴(kuò)傳兩瓶時(shí)，一般在7天左右即可基本鋪滿瓶底。有關(guān)的觀察指標(biāo)如下1生長曲線取第5代細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，接種于小方瓶內(nèi)，隔日換液，每日取三瓶計(jì)數(shù)，連續(xù)八天，制成曲線。傳代后，因第L、2天細(xì)胞未貼壁曲線有所下降，第3天呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，第5、6天達(dá)高峰。2凍存及復(fù)蘇后的生長情況取第7代細(xì)胞，用10％的二甲基亞楓作保護(hù)劑，貯存于液氮中。于2個(gè)月后，取一支復(fù)蘇，細(xì)胞生長狀態(tài)良好。2形態(tài)學(xué)觀察1活細(xì)胞觀察自然貼壁后生長的細(xì)

簡(jiǎn)介：本文的研究目的是建立人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HMSCS的體外培養(yǎng)和成骨誘導(dǎo)體系。研究HMSCS表面抗原的表達(dá)情況，以及體外傳代培養(yǎng)和成骨誘導(dǎo)對(duì)表面抗原的影響。評(píng)價(jià)體外傳代培養(yǎng)對(duì)HMSCS增殖能力和凋亡的影響。研究地塞米松對(duì)HMSCS增殖、ALP表達(dá)和凋亡的影響。觀察經(jīng)體外擴(kuò)增、成骨誘導(dǎo)HMSCS的體內(nèi)成骨能力，評(píng)價(jià)其經(jīng)皮注射修復(fù)小段骨缺損的療效。通過一定的方法得出以下結(jié)論1本培養(yǎng)體系可獲得純度較高的HMSCS，具有強(qiáng)大的增殖能力，經(jīng)地塞米松等誘導(dǎo)后向成骨細(xì)胞方向分化，且具有體外成骨能力。2HMSCS陽性表達(dá)CD29、CD44、CD71、CD90、CD105、CD166，但造血系標(biāo)志物CD14、CD34、CD38、CD45呈陰性。CD71、CD90、CD166陽性率的下降，提示HMSCS表面抗原的表達(dá)在成骨誘導(dǎo)時(shí)發(fā)生變化。體外傳代擴(kuò)增并不影響HMSCS的表面抗原表達(dá)和ALP活性。3從P7開始，隨傳代次數(shù)的增加，HMSCS的增殖能力下降，凋亡率升高，P4和P1相比無差異。4高濃度地塞米松108MOLL及以上促進(jìn)ALP的表達(dá)，同時(shí)抑制細(xì)胞的增殖，109MOLL組作用不明顯。109106MOLL的地塞米松均增加HMSCS的凋亡率，且隨地塞米松濃度的升高而增加。5經(jīng)體外擴(kuò)增、成骨誘導(dǎo)的MSCS具備良好的體內(nèi)成骨能力，與骨髓移植組相比，具有更強(qiáng)大的骨缺損修復(fù)能力。

簡(jiǎn)介：廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范試行。另外，該學(xué)位論文為任建橋敖投課題組的研另外，該學(xué)位論文為化C迸補(bǔ)教刁炅課題組的研究成果，獲得鉦建林教授課題組經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在喱凸姥附屬串山砰乜實(shí)驗(yàn)室完成。請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。聲明人簽名墚函為JO／2年6月；日廈門大學(xué)學(xué)位論文著作權(quán)使用聲明本人同意廈門大學(xué)根據(jù)中華人民共和國學(xué)位條例暫行實(shí)施辦法等規(guī)定保留和使用此學(xué)位論文，并向主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文包括紙質(zhì)版和電子版，允許學(xué)位論文進(jìn)入廈門大學(xué)圖書館及其數(shù)據(jù)庫被查閱、借閱。本人同意廈門大學(xué)將學(xué)位論文加入全國博士、碩士學(xué)位論文共建單位數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版，采用影印、縮印或者其它方式合理復(fù)制學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于1經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審查核定的保密學(xué)位論文，于年月日解密，解密后適用上述授權(quán)?！?不保密，適用上述授權(quán)。請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)括號(hào)內(nèi)打“√“或填上相應(yīng)內(nèi)容。保密學(xué)位論文應(yīng)是已經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審定過的學(xué)位論文，未經(jīng)廈門大學(xué)保密委員會(huì)審定的學(xué)位論文均為公開學(xué)位論文。此聲明欄不填寫的，默認(rèn)為公開學(xué)位論文，均適用上述授權(quán)。聲明人簽名梁面君沁F上年6月專日

簡(jiǎn)介：鈦及鈦合金作為生物材料在骨科領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。當(dāng)其作為人工關(guān)節(jié)假體等骨科植入物時(shí)，必須與周圍的骨組織建立一個(gè)穩(wěn)定的結(jié)合才能發(fā)揮作用，但這一難題目前尚未得到很好地解決。近年來，許多研究證實(shí)骨組織－金屬材料的界面問題是影響植入物與骨組織穩(wěn)定結(jié)合的重要因素，并且金屬植入材料的表面形態(tài)（尤其是微觀形態(tài)）對(duì)成骨細(xì)胞具有顯著影響，是界面問題的要素之一。為解決骨組織－金屬材料的界面問題，必須充分理解金屬材料不同表面形態(tài)對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。本研究通過觀察鈦金屬四種表面微觀形態(tài)對(duì)成骨細(xì)胞形態(tài)、粘附、增殖及分化情況的影響，探索最佳的材料表面形態(tài)，以提高鈦合金植入物的生物穩(wěn)定性。1獲得高純度兔成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法的研究目的建立一種能夠獲得高純度成骨細(xì)胞的簡(jiǎn)便可靠的培養(yǎng)方法，為成骨細(xì)胞的相關(guān)研究提供穩(wěn)定的種子細(xì)胞來源。方法在常規(guī)培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，建立組織塊漂浮培養(yǎng)法，從新生兔顱骨分離、培養(yǎng)成骨細(xì)胞。觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)及形態(tài)，繪制生長曲線并計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間，并進(jìn)行堿性磷酸酶染色和礦化能力的檢測(cè)。結(jié)果該方法分離培養(yǎng)的細(xì)胞顯示出典型的成骨細(xì)胞生物學(xué)特性，獲得的成骨細(xì)胞純度高、性狀穩(wěn)定、增殖能力強(qiáng)。結(jié)論組織塊漂浮培養(yǎng)法是一種簡(jiǎn)便、可行的培養(yǎng)方法，能夠?yàn)槌晒羌?xì)胞的相關(guān)研究提供穩(wěn)定可靠的種子細(xì)胞來源。2鈦金屬材料表面微形態(tài)對(duì)體外兔成骨細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究目的通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，研究鈦金屬材料不同表面微觀形態(tài)對(duì)成骨細(xì)胞的影響，為預(yù)見鈦金屬植入物在體內(nèi)的情況提供信息。方法在鈦金屬試片上制備4種表面微觀形態(tài)激光掃描處理表面（LS）噴砂處理表面（SS），機(jī)械加工表面（MS）和拋光表面（PS）。進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，比較4種表面形態(tài)對(duì)成骨細(xì)胞的影響在鈦金屬試片上接種兔成骨細(xì)胞并培養(yǎng)1－12天，測(cè)定細(xì)胞的24小時(shí)粘附情況、12天增殖情況和11天堿性磷酸酶活性。通過掃描電鏡和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果材料的表面微觀形態(tài)能夠影響成骨細(xì)胞的粘附、增殖、分化以及細(xì)胞形態(tài)。在細(xì)胞級(jí)別的規(guī)則微溝槽表面（溝槽寬度約50ΜM），成骨細(xì)胞具有較好的增殖和最好的分化狀態(tài)，并且在這種表面上的細(xì)胞顯示出更接近體內(nèi)成骨細(xì)胞的形態(tài)。結(jié)論與粗糙表面和超細(xì)胞級(jí)別100ΜM的表面微形態(tài)相比，細(xì)胞級(jí)別（50ΜM）的表面規(guī)則微形態(tài)更能影響細(xì)胞的生物學(xué)行為，細(xì)胞級(jí)別的規(guī)則微溝槽表面能夠?yàn)槌晒羌?xì)胞提供一個(gè)更適合的生長環(huán)境。