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    • 簡介:分類號密級UDC編號南華大學(xué)碩士學(xué)位論文TSATSA對人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為對人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為及其RASSF1ARASSF1A基因基因表達的影響表達的影響研究生姓名張麗旻指導(dǎo)教師姓名、職稱廖愛軍教授學(xué)科、專業(yè)名稱消化內(nèi)科研究方向胃癌分子發(fā)病機制2008年5月1目錄一、主要英文縮略語索引2二、中文摘要4三、英文摘要6四、論文正文8前言8實驗材料及儀器10實驗方法13實驗結(jié)果18討論34結(jié)論37參考文獻38五、綜述42六、碩士期間發(fā)表的文章48七、致謝49
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    • 簡介:PREPARATIONOF131I1H12ANDITSBIOLOGICALEFFECTSONA549NONSMALLCELLLUNGCANCERADISSERTATIONSUBMITTEDTOSOUTHEASTUNIVERSITYFORTHEACADEMICDEGREEOFMASTEROFMEDICINEBYYINNINGSUPERVISEDBYDUMINGHUACOLLEGEOFCLINICALMEDICINESOUTHEASTUNIVERSITYAPRIL2010中文摘要中文摘要131I1H12的制備及對A549非小細(xì)胞肺癌的生物學(xué)效應(yīng)研究目的1核素標(biāo)記研究放射性核素碘131I標(biāo)記表皮生長因子受體EPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOREGFR單克隆抗體MCAB1H12的實驗條件。2外實驗觀察標(biāo)記產(chǎn)物131I1H12與A549人肺癌細(xì)胞的免疫結(jié)合及其生物學(xué)效。3體內(nèi)實驗觀察記產(chǎn)物131I1H12在體內(nèi)對人肺癌A549裸鼠移植瘤的治療及顯像作用,探討其靶向治療肺癌的有效性和可行性。方法1核素標(biāo)記用IODOGEN法標(biāo)記1H12用葡聚糖凝膠G50SEPHADEXG一50層析柱進行分離;以生理鹽水紙層析法測定放射化學(xué)純度。2體外實驗經(jīng)體外細(xì)胞結(jié)合試驗分析檢測標(biāo)記抗體的免疫活性;通過流式細(xì)胞儀檢測不同劑量148、74、37KBQ131I1H12,游離131I148KBQ及1H1280NMOL/M1對A549細(xì)胞的作用。3體內(nèi)實驗建立表達表皮生長因子受體的人肺癌荷瘤裸鼠模型;取36只裸鼠模型分為6組,分成高劑量組148MBQ131I1H12、中劑量組74MBQL31I1H12、低劑量組37MBQL31I1H12治療組、單純核素組74MBQ131I、單純抗體組1H1204M1、空白對照組,觀察腫瘤生長增殖情況,131I1H12對正常組織臟器的放射毒副作用,治療期間通過SPECT顯像觀察放射性藥物在腫瘤中的濃聚作用。結(jié)果1核素標(biāo)記131I1H12標(biāo)記率為5014%,比活度為463MBQ/UG,放射性濃度為7731MBQ/ML,放射性化學(xué)純度為9692%。2體外實驗131I1H12與A549細(xì)胞結(jié)合率為6112%;131I1H12誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡和周期阻滯呈劑量效應(yīng)關(guān)系,以148KBQL31I1H12作用效應(yīng)最大,凋亡率達到4435331%,G2/M期細(xì)胞阻滯率達5117298%。3體內(nèi)實驗自第1次給藥至第32天各時間段,高劑量組、中劑量組、低劑量組與空白對照組腫瘤體積差異有統(tǒng)計學(xué)意PO01;裸鼠各組腫瘤抑制率分別為高劑量治療組1489%,中劑量治療組2014%,低劑量治療組3958%,單純核素組7632%,單純抗體組8876%,空白對照組9973%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義P001;光學(xué)顯微鏡下見高、中、低劑量組腫瘤細(xì)胞發(fā)生不同程度壞死;未發(fā)現(xiàn)肝、腎和骨髓非特異性放射損傷;SPECT顯像示治療期間放射免疫治療各組腫瘤部位放射性濃聚。結(jié)論1核素標(biāo)記成功完成了ⅢI對1H12的標(biāo)記,該標(biāo)記方法簡單、穩(wěn)定性
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    • 簡介:N百ZUⅡ習(xí)巾礦學(xué)校代碼1】919L中圖分類號河必蓮鈄六孝博士研究生畢業(yè)論文外源性IL18基因?qū)Υ笫驝6膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性及化療敏感性的影響研究生蔣常文導(dǎo)師閻蘊力教授專業(yè)二級學(xué)院研究起止日期提交日期人體解剖與組織胚胎學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2004年2月一2006年4月2006年4月中文摘要2MTT法檢測細(xì)胞體外增殖活性對數(shù)生氏期C6/IL。18、C6/PLXSN和C6細(xì)胞用O04%EDTA消化,以15104/ML細(xì)胞濃度接種于96孔培養(yǎng)板,每孔加入200UL細(xì)胞懸液,37℃,5%C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)6天。每日檢測細(xì)胞生長情況。每孔加入5M2/MLMTT20PL,繼續(xù)孵育4小時,離心吸去上清,加入150UL/孔DMSO。用酶標(biāo)儀測490NM波長吸光值A(chǔ)值,每孔I53個復(fù)孔,取其平均值并繪制細(xì)胞生長曲線。本實驗重復(fù)3次。3體外腫瘤侵襲實驗無菌條件下在BOYDEN小室下室中加入NⅢ3T3細(xì)胞培養(yǎng)液上清200”L,在上室中分別加入C6/IL一18、C6/PLXSN、C6細(xì)胞懸液I105個細(xì)胞/M1800“L,用含MATRIGELMATRIX的聚碳酸酯膜將上、下室隔開,將BOYDEN小室放入濕盒中,C025%培養(yǎng)箱培養(yǎng)24H。取出聚碳酸酯膜,擦去膜上面未侵入膜中的細(xì)胞,將膜放在載玻片上,甲醇固定,蘇木精染色,乙醇逐級脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。在高倍光鏡計數(shù)穿過每張膜的細(xì)胞數(shù)。4集落形成試驗對數(shù)生長期C6/IL18、C6/PLXSN和C6細(xì)胞,以每孔400個細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板,每孔設(shè)4個復(fù)孔,37℃5%C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)12天。培養(yǎng)結(jié)束時,PBS清洗3遍,加純甲醇固定15MIN,姬姆薩染液染色30MIN。在50倍光鏡下觀察,計算集落形成率集落形成率集落數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)100%。5免疫細(xì)胞化學(xué)與計算機圖像分析對數(shù)生長期C6/1L一18、C6/PLXSN和C6細(xì)胞,接種于預(yù)先置有無菌蓋片的6孔培養(yǎng)板中,待細(xì)胞爬滿蓋片后,用4%多聚甲醛固定10MIN,3%過氧化氫處理LOMIN。03%TRITONXLOO處理10MIN、10%正常羊血清處理15MIN;小鼠抗大鼠PCNA一抗4℃溫育過夜。用PBS代替一抗作為陰性對照。羊抗鼠生物素標(biāo)記的二抗37℃溫育40M‰過氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素37℃溫育40MIN,005%DAB顯色、蘇木精復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、封片。在光鏡下隨機觀察8個視野,共計數(shù)300個細(xì)胞,并計算陽性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)。將細(xì)胞爬片置于顯微鏡下,攝像系統(tǒng)提取數(shù)值化細(xì)胞圖像并輸入計算機,在計算機屏幕上用鼠標(biāo)選定免疫組化陽性部分,每種細(xì)胞隨機選取
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      上傳時間:2024-03-11
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    • 簡介:目的本文旨在研究CMET抑制劑SULL274對食管癌ECAL09細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響,并通過其作用靶點CMET蛋白和CMETMRNA與生物鐘基因CLOCKMRNA的可能潛在聯(lián)系,進一步探討在其作用過程中是否有時辰效應(yīng)的存在。方法1體外培養(yǎng)食管癌ECAL09細(xì)胞株,用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測CMET蛋白的表達。2用SULL274IC50為20NM處理ECAL09細(xì)胞,通過MTT生長曲線、劃痕實驗、TRANSWELL侵襲小室以及FCM,觀察藥物對細(xì)胞生長、遷移、侵襲能力以及凋亡率與細(xì)胞周期的影響。3體外培養(yǎng)食管癌ECAL09細(xì)胞株,用RTPCR法分別檢測不同時間點CLOCK與CMETMRNA的表達。4用流式細(xì)胞儀檢測各時間點CMET蛋白的表達。5不同時間點SULL274處理細(xì)胞24H后,用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。結(jié)果1ECAL09細(xì)胞表達CMET蛋白。2SULL274實驗組細(xì)胞生長,遷移和浸潤能力低于對照組,凋亡率高于對照組,增殖指數(shù)低于對照組。348H內(nèi)CLOCK基因表達呈節(jié)律性波動P結(jié)論1CMET抑制劑SULL274可以抑制ECAL09細(xì)胞的生長和增殖,減弱遷移和浸潤能力,增加細(xì)胞凋亡。2證實體外培養(yǎng)的食管癌ECAL09細(xì)胞CLOCK的表達隨時間變化存在節(jié)律性。3首次發(fā)現(xiàn)食管癌ECAL09細(xì)胞CMETMRNA與CMET蛋白在24小時內(nèi)的表達呈節(jié)律性波動。4在不同時間點經(jīng)SULL274處理后,細(xì)胞增殖指數(shù)抑制率不同,提示提示在食管癌靶向治療中要考慮時辰效應(yīng)。
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    • 簡介:全文由兩部分組成第一部分乙酰乳香酸BC4抗腫瘤作用的分子機制乙酰乳香酸BC4是提取自中藥乳香BOSWELLIACARTERIIBIRDW的五環(huán)三萜類成分初期的藥物篩選表明其對白血閏有較強的誘導(dǎo)分化作用該研究還BC4抗惡性細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、凋亡以及抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等作用了研究并進一步探討了其發(fā)揮腫瘤作用的分子機理第二部分黑色素瘤細(xì)胞基本生物學(xué)特性的研究1、小鼠黑色素瘤細(xì)胞的侵襲性能與共基本生物學(xué)特性的相關(guān)性研究研究同一起源而轉(zhuǎn)移潛力不同的小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16B16F10B16BL6的生物學(xué)特性與其侵襲潛能的相關(guān)性2、高分子量黑色素瘤相關(guān)抗原HMWMAA在黑色素瘤細(xì)胞運動中的作用激光共聚焦顯微鏡觀察顯示MV3細(xì)胞表面表達豐富的HMWMAA隨著細(xì)胞運動狀態(tài)的不同HMWMAA在細(xì)胞表面的分布變不同同時觀察到在MV3細(xì)胞的運動狀態(tài)下細(xì)胞表面HMWMAA的分布不同推測在黑色素瘤細(xì)胞運動過程中存在HMWMAA循環(huán)3、穩(wěn)定表達紅色及綠色熒光蛋白的MV3細(xì)胞系的建立采用分子克隆技術(shù)及轉(zhuǎn)染技術(shù)建立了穩(wěn)定表達紅色及綠色熒光蛋白的MV3細(xì)胞系完成了建立轉(zhuǎn)移鼠METAMOUSE模型的上游工作
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    • 簡介:分類號學(xué)號學(xué)號D201278270D201278270學(xué)校代碼學(xué)校代碼1048710487密級密級博士學(xué)位論文MICRNA101對骨肉瘤細(xì)胞凋亡和對骨肉瘤細(xì)胞凋亡和侵襲侵襲等生物學(xué)等生物學(xué)特性特性的影響及的影響及機制研究機制研究學(xué)位申請人學(xué)位申請人林松學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)(骨科)外科學(xué)(骨科)指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師邵增務(wù)邵增務(wù)教授教授答辯日期答辯日期20150201504
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    • 簡介:四川大學(xué)博士學(xué)位論文磁性附著體模擬靜磁場對成骨細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的基礎(chǔ)研究姓名趙煜申請學(xué)位級別博士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師巢永烈20060420四川太學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院博士專業(yè)學(xué)住論文英文縮略詞表縮略詞英文全稱PEMFPULSEDELECTROMAGNETICFIELDSSMFSTATICMAGNETICFIELDS0BOSTEOBLASTALPALKALINEPH08PHATASETTESINⅢTMIUITESLAOCNOSTEOCALCJNTGFTRANSFORMINGGROWTHFACTORAP1ACTIVTORPROTEINLM1’R34,5DIMETHYTHIAZOL2一YD一2,5一DIPHENYLTETRAZOLLUMBROMIDEDMSOFCMPIOPNBSPONECMFO.RT.PCRⅢGDIMETHYLSULFOXIDEFLOWCYTOMETRYPROLILERATIONINDEXOSTEOPONTINBONESIALOPROTEINOSTEONECTINEXTRACEUULARMATRIXFLUORESCENCEQUANTITATIVERCCERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREATIONIMMEDIATEEARLYGENES中文名稱脈沖電磁場靜磁場成骨細(xì)胞‘堿性磷酸酶特斯拉毫特斯拉骨鈣素轉(zhuǎn)化生長因子轉(zhuǎn)錄激活蛋白3羽,5一二甲基噻唑X2,5一二苯基四氮唑嗅鹽商品名噻唑藍二甲基亞砜流式細(xì)胞術(shù)增殖指數(shù)骨橋蛋白骨唾液蛋白骨粘連素細(xì)胞外基質(zhì)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚臺酶鏈反應(yīng)立即早期基園
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    • 簡介:第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文來源于肝癌門靜脈癌栓細(xì)胞系(CSQT2)的建立及其生物學(xué)特性研究姓名王濤申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師程樹群吳孟超20100501第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文【目的】建立一株來源于人肝癌門靜脈癌栓的細(xì)胞系并對其成瘤性、轉(zhuǎn)移性及其他生物學(xué)特性進行研究,以探討肝癌伴門靜脈癌栓的相關(guān)機制?!痉椒ā?來源于人肝癌門靜脈癌栓細(xì)胞系CSQT2的建立利用PVTT新鮮組織塊進行皮下移植瘤模型構(gòu)建、完整組織塊原位移植法、皮下移植瘤原代培養(yǎng)等一系列方法,建立一株來源于人肝癌門靜脈癌栓的細(xì)胞系。2CSQT2的生物學(xué)特性研究通過各種體內(nèi)外實驗方法,如細(xì)胞形態(tài)學(xué)采用光鏡觀察;超微結(jié)構(gòu)采用電鏡觀察;M1VR法測細(xì)胞生長期曲線;流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期;DNA組成及分析細(xì)胞表面標(biāo)志物;皮下成瘤實驗觀察CSQT2成瘤能力;生物熒光標(biāo)記法觀測細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力等對CSQT一2的生物學(xué)特性進行研究?!窘Y(jié)果】通過皮下移植瘤模型構(gòu)建、完整組織塊原位移植法、皮下移植瘤原代培養(yǎng)等一系列方法成功建立了一株來源于人門靜脈癌栓的PVTT細(xì)胞系,并命名為CSQT2。其生物學(xué)特性如下掃描電鏡顯示CSQT2細(xì)胞表面存在微絨毛,透射電鏡顯示大多數(shù)的CSQT一2細(xì)胞含有不規(guī)則的橋粒,線粒體,核糖體和細(xì)胞核;細(xì)胞生長曲線顯示CSQT2細(xì)胞在體外倍增時間約為48H,DNA周期分析G0/G1為5151%,G2/M為1382%,S為3467%。皮下成瘤實驗提示,CSQT2最低成瘤細(xì)胞數(shù)量級為103,成瘤時間為6周。將CSQT2細(xì)胞系的皮下移植瘤接種到裸鼠肝臟后,經(jīng)病理切片分析,可觀察到鏡下門靜脈癌栓的形成。細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達實驗顯示CSQT2第5代細(xì)胞表達CDL33陽性比例為81%,CD90陽性’
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    • 簡介:安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文培養(yǎng)的兔角膜緣上皮細(xì)胞深低溫保存后的生物學(xué)活性研究姓名顧起宏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師朱美玲王明麗20040501安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文培養(yǎng)的兔角膜緣上皮細(xì)胞深低溫保存后的生物學(xué)活性研究摘要目的通過對培養(yǎng)后的角膜緣上皮細(xì)胞進行深低溫保存,檢測復(fù)蘇后細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能,來探討深低溫保存角膜緣上皮細(xì)胞的可行性和效果。方法實驗室階段1角膜緣上皮細(xì)胞的培養(yǎng)將切取的兔角膜緣組織剪成LMMLMM小組織塊,經(jīng)消化酶處理后培養(yǎng)在12孔板中,培養(yǎng)細(xì)胞至形成單層2角膜緣上皮細(xì)胞的深低溫保存和復(fù)蘇形成單層的細(xì)胞消化后制成懸液,分別用兩組冷凍保護液A組為32.5%F1232.5%DMEM20%小牛血清15%甘油;B組為90%D,牛血清10%甲基亞砜DMS0按階段降溫保存在液氨里,凍存半月、1月和2月分批取出,進行復(fù)溫和復(fù)溫后處理;3深低溫保存前后的角膜緣上皮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)和鑒定將未冷凍的細(xì)胞和不同凍存時間、不同凍存保護液的冷凍復(fù)蘇后細(xì)胞制成的懸液傳代至無上皮細(xì)胞的羊膜上再培養(yǎng),采用免疫組化、電鏡鑒定培養(yǎng)后細(xì)胞的性質(zhì);4深低溫保存前后的角膜緣上皮細(xì)胞活性比較通過倒置顯微鏡、電鏡、MTT比色法、臺盼蘭染色來比較傳代培養(yǎng)的角膜緣上皮細(xì)胞深低溫保存前后的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生物學(xué)活性。動物實驗階段將40只角膜緣干細(xì)胞損傷的模型兔隨機分成單純羊膜組、未冷凍細(xì)胞組、DMSO保存細(xì)胞組和甘油保存細(xì)胞組,每組10只,用傳代培養(yǎng)2周后的角膜緣上皮細(xì)胞作移植實驗,觀察細(xì)胞體外功能完成情況來進一步比較深低溫保存前后角膜緣上皮細(xì)胞的活性。結(jié)果1傳代細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示鼠抗兔增殖細(xì)胞核抗原PCNA單克隆抗體、AEL單克隆抗體染色呈陽性反應(yīng),AE5單克隆抗體染色偶見陽性反應(yīng)2深低溫保存前后的角膜緣上皮細(xì)胞活性比較傳代細(xì)胞凍存后的比未凍存的貼壁、生長均滯后1~2天,未凍存細(xì)胞約10天左右形成單層,而DMSO保護液組需要12~14天,甘油保護液組難形成良好蓽層;深低溫保存后的細(xì)胞電鏡檢查均有不
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    • 簡介:第一章人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離與純化方案的建立目的一次性消化較大量胎盤組織建立從胎盤組織中大量、高效的分離純化出人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANPLACENTALMESENCHYMALSTEMCELLHPMSC的操作方案。方法胎盤組織洗凈剪碎用胰蛋白酶和DNASEⅠ共同消化;分三個階段消化每次37℃消化20MIN。重懸消化產(chǎn)物用200目篩網(wǎng)過濾后用PERCOLL不連續(xù)梯度密度分離液分離收集HPMSC所在層。用PBS洗兩遍后直接接種于75MM培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)、傳代。傳至第三代后用流式細(xì)胞儀檢測表面標(biāo)志物并做成脂、成骨誘導(dǎo)以鑒定。結(jié)果經(jīng)胰蛋白酶和DNASEⅠ共同消化后胎盤組織僅剩少許殘渣。HPMSC接種1921D后細(xì)胞生長至90%融合細(xì)胞數(shù)目為196±024106個;傳代細(xì)胞培養(yǎng)45D即可再次傳代。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示HPMSC強表達CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和HLAⅠ類分子不表達CD34、CD45、CD14和HLAⅡ類分子經(jīng)誘導(dǎo)后向成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞方向分化可被茜素紅染和油紅O染色。結(jié)論采用胰蛋白酶和DNASEⅠ共同消化胎盤組織結(jié)合PERCOLL不連續(xù)密度梯度分離液分離細(xì)胞可一次性獲得較多的HPMSC。此方法成本適中對細(xì)胞損傷小所獲得細(xì)胞純度和活力都令人滿意可以應(yīng)用于HPMSC的大規(guī)模培養(yǎng)滿足臨床和科研應(yīng)用的需求也適用于建立間充質(zhì)干細(xì)胞庫。第二章HPMSC的超微結(jié)構(gòu)觀察和吞噬功能研究目的本研究旨在了解HPMSC的超微結(jié)構(gòu)和理解細(xì)胞的特性和生理功能。方法選取5例正常娩出胎盤來源的HPMSC經(jīng)體外培養(yǎng)后進行固定、包埋、切片、染色在透射電子顯微鏡下觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)在培養(yǎng)上清中添加熒光微球孵育3H后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的吞噬能力。結(jié)果HPMSC在透射電鏡下表現(xiàn)為細(xì)胞核比較大核仁明顯;核膜折疊、內(nèi)陷顯著常染色質(zhì)多核漿比例正常。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系統(tǒng)發(fā)達可見大量狹小或擴張的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。胞漿內(nèi)高爾基器、溶酶體或脂褐素常見;細(xì)胞表面微絨毛發(fā)達偶可見細(xì)胞間連接。5個標(biāo)本的HPMSC均有部分細(xì)胞能吞噬熒光微球但也有部分細(xì)胞沒有吞噬;最多有4962%最少184%的細(xì)胞吞噬了熒光微球。結(jié)論HPMSC的超微結(jié)構(gòu)特點提示細(xì)胞功能活躍可合成和分泌大量蛋白質(zhì)并可具有吞噬功能;而吞噬實驗進一步驗證HPMSC吞噬異物的能力。提示HPMSC在胎盤中可能起著維持微環(huán)境穩(wěn)態(tài)、清除異物的功能。第三章HPMSC雌、孕激素受體表達及雌、孕激素對其分泌血管內(nèi)皮生長因子和吞噬功能的影響目的觀察HPMSC的雌、孕激素受體ESTROGENPROGESTAGENRECEPTSERPR的表達情況并分析雌二醇ESTRADIOLE2和黃體酮PROGESTERONEP對HPMSC分泌VULAREPITHIELIALGROWTHFACTVEGF的影響以及對吞噬功能的影響。方法取5個正常足月胎盤來源的HPMSC標(biāo)本采用反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR方法FLUESCENTQUANTITATIVEREVERSETRANIONPCRQRTPCR和免疫組織化學(xué)方法檢測HPMSC的ER、PR的表達情況。用QRTPCR方法和ELISA方法檢測HPMSC表達和分泌VEGF的水平。將HPMSC用妊娠晚期水平的E2和P孵育48H用ELISA方法檢測培養(yǎng)上清中VEGF水平用流式細(xì)胞儀檢測HPMSC吞噬熒光微球的能力。結(jié)果5個標(biāo)本中每個標(biāo)本都有部分細(xì)胞PR抗體染色陽性陽性率為1881±009%但ER抗體染色均為陰性。5個標(biāo)本的HPMSC培養(yǎng)上清中均檢測到VEGF24492±8402PGML。與未處理的HPMSC相比用E2或P孵育的HPMSC的VEGF分泌水平提高72894±33365PGML54087±15409PGML。用E2和P同時處理的HPMSC的VEGF分泌水平則顯著上升156121±41533PGML。E2、P以及E2和P孵育后的HPMSC吞噬熒光微球能力與未處理的細(xì)胞相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異P005。結(jié)論HPMSC主要表達PR而基本不表達ER妊娠水平的E2和P都能夠上調(diào)HPMSC分泌VEGF的水平;E2和P對HPMSC吞噬功能沒有明顯的調(diào)控作用。第四章HPMSC表達吲哚胺雙加氧酶分泌可溶性免疫抑制分子與子癇前期的關(guān)系目的從兩個角度對照正常妊娠HPMSC和子癇前期PREECLAMPSIAPEHPMSC之間的差異①HPMSC分泌可溶性因子對混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)MIXEDLYMPHOCYTEREACTIONSMLR的抑制作用②HPMSC的吲哚胺雙加氧酶INDOLEAMINE23DIOXYGENASEIDO表達水平;即從HPMSC的角度探討PE形成的可能機制。方法應(yīng)用TRANSWELL做MLR將HPMSC接種于TRANSWELL上層混合淋巴細(xì)胞接種于下層共孵育96小時后吸出淋巴細(xì)胞用CELLCOUNTINGKIT8CCK8檢測細(xì)胞數(shù)計算淋巴細(xì)胞增殖抑制率。用含干擾素ΓINTERFERERONΓIFNΓ的培養(yǎng)基孵育細(xì)胞48H后用QRTPCR法和ELISA方法分別從MRNA水平和蛋白質(zhì)水平檢測HPMSC的IDO表達水平。結(jié)果HPMSC釋放的可溶性分子具有抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用;HPMSC表達低水平的IDO但當(dāng)受到IFNΓ刺激后表達水平顯著提高P005。結(jié)論HPMSC所表達的IDO和釋放的可溶性分子可能與PE的發(fā)生和發(fā)展不相關(guān);但可能是由于體外培養(yǎng)和胎盤原位的微環(huán)境差距較大現(xiàn)有的體外培養(yǎng)技術(shù)不能反應(yīng)HPMSC在體內(nèi)的狀態(tài)導(dǎo)致存在的差異難以體現(xiàn)。
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