簡(jiǎn)介：揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文ΒCATENIN干涉質(zhì)粒對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名段曉春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師武永康20090501揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文2獲得靶向抑制PCATENIN基因表達(dá)的干涉質(zhì)粒。經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定。用脂質(zhì)體介導(dǎo)該干涉質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄PCR、WESTERNBLOTTING方法檢測(cè)PCATENIN基因MRNA、蛋白表達(dá)水平的表達(dá)情況，評(píng)價(jià)RNA干涉的效果。觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)的變化，應(yīng)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)初步評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染后對(duì)U251細(xì)胞的生物學(xué)影響。結(jié)果成功構(gòu)建針對(duì)靶向13CATENIN基因的PGPU6／GFP／NEOSHRNAPCATEMNRNA干涉質(zhì)粒，經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定為目的質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251后BCATENIN干涉質(zhì)粒有效的抑制了膠質(zhì)瘤細(xì)胞中13CMEMN基因MRNA水平、蛋白水平的表達(dá)。通過(guò)細(xì)胞形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)48小時(shí)以后胞核內(nèi)出現(xiàn)一些空泡，隨時(shí)間增加細(xì)胞增殖變慢，死亡細(xì)胞逐漸增多，出現(xiàn)破碎、崩解等壞死表現(xiàn)，漂浮細(xì)胞及細(xì)胞周圍碎片增多，呈明顯的時(shí)間依賴性。MTT提示轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNAPEATENIN質(zhì)粒后細(xì)胞24小‘時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)后，各時(shí)間段轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNA13CATENIN質(zhì)粒組與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比明顯受到抑制P001。轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNAPCATENIN質(zhì)粒組U251細(xì)胞的增殖隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率逐漸升高，且在作用72小時(shí)時(shí)抑制率較高，另外空白對(duì)照組和陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡顯示PGFP／NEOSHRNAPCATENIN質(zhì)粒72小時(shí)后的U25L細(xì)胞凋亡率與空白對(duì)照組和陰性質(zhì)粒對(duì)照組比較明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO01。FCM檢測(cè)細(xì)胞周期顯示轉(zhuǎn)染72小時(shí)后，轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNA13CATENIN質(zhì)粒與空白對(duì)照組細(xì)胞周期變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05，細(xì)胞大多聚集在G0／G1期，而S期、G2／M期細(xì)胞數(shù)目顯著下降，處于DNA復(fù)制和活動(dòng)的細(xì)胞數(shù)目減少，U251細(xì)胞增殖受到抑制。結(jié)論靶向13CATENIN基因的PGPU6／GFP／NEOSHRNA13一CATENINRNA干涉質(zhì)粒構(gòu)建成功，并可特異性的沉默PCMEMN基因的表達(dá)，初步證明了轉(zhuǎn)染13CATENIN干涉質(zhì)粒促進(jìn)了細(xì)胞凋亡，抑制了細(xì)胞分化和增殖。膠質(zhì)瘤惡性生長(zhǎng)過(guò)程與WNT信號(hào)通路6CMEMN的激活有密切關(guān)系，13CATENIN是一個(gè)比較理想膠質(zhì)瘤分子生物學(xué)標(biāo)記和基

簡(jiǎn)介：目的據(jù)已有文獻(xiàn)報(bào)道，無(wú)論在臨床實(shí)驗(yàn)或糖尿病動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都清楚顯示了血管新生能力下降和微血管功能受損，同時(shí)在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境對(duì)維持內(nèi)皮細(xì)胞完整性、促進(jìn)血管新生有重要作用的內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC）數(shù)量和功能均有影響，使其數(shù)量減少且功能下降。而且糖尿病患者體內(nèi)高糖環(huán)境，能使還原性糖、醛基與各種蛋白質(zhì)N端游離氨基酸間添加聚合形成糖基化終末產(chǎn)物（AGES），這種被糖基化的變形蛋白質(zhì)是毛細(xì)血管基底膜增厚、毛細(xì)血管受損的標(biāo)志，也是導(dǎo)致糖尿病患者大血管及微血管并發(fā)癥的病因之一。在高糖環(huán)境中，除了大分子蛋白質(zhì)可發(fā)生糖化反應(yīng)外，參與細(xì)胞有絲分裂以及對(duì)EPC血管新生有重要促進(jìn)作用的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF2）也能同還原糖發(fā)生非酶的共價(jià)結(jié)合，形成糖化成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（GFGF2），而這種糖基化作用可能是使EPC功能失調(diào)，進(jìn)而影響血管新生的重要原因。因此本實(shí)驗(yàn)的研究目的在于，觀察外源性糖化成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（GFGF2）對(duì)大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC）數(shù)量及體外生物學(xué)活性的影響，探討GFGF2對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞血管新生的影響。方法1GFGF2的制備及檢測(cè)用PBS將FGF2配成濃度為10UGML的溶液，70℃凍存?zhèn)溆?。試?yàn)前將FGF2同250MMOLL濃度的D果糖于37℃共同培養(yǎng)48H制備GFGF2，用蛋白指紋圖譜分析儀檢測(cè)其糖化情況。2骨髓EPC的分離、培養(yǎng)和鑒定取大鼠骨髓，加PBS等倍稀釋并混勻。沿管壁緩慢加入裝有大鼠淋巴細(xì)胞分離液（1083GML）的15ML離心管中。2000RMIN25MIN密度梯度離心后將中間的白霧層吸出并置入另一短管中，加入5倍以上體積的M199，以1500RMIN離心5MIN，洗滌細(xì)胞兩次。末次離心后，棄上清液，加入M199重懸細(xì)胞。以1106L的密度接種于加有M199完全培養(yǎng)液的預(yù)涂膠原的培養(yǎng)板中，置37℃、5CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3～4D后換液，將未貼壁細(xì)胞棄之。倒置相差顯微鏡連續(xù)觀察體外培養(yǎng)的EPC的形態(tài)、生長(zhǎng)及增殖情況。將培養(yǎng)4D后的細(xì)胞分組，分別以FGF2（150NGML）、GFGF2（150NGML）以及空白組繼續(xù)干預(yù)培養(yǎng)3D。用免疫組織化學(xué)和免疫熒光染色作CD34、CD133、VEGFR2、ACLDL和UEA1檢測(cè)來(lái)鑒定EPC并計(jì)數(shù)。3EPC體外功能的測(cè)定胰酶消化培養(yǎng)7D的貼壁細(xì)胞，用血管生成試劑盒檢測(cè)其能力；收集7D的貼壁細(xì)胞作EPC黏附能力；用改良的BOYDEN小室作EPC遷移能力測(cè)定；MTT法測(cè)定EPC增殖能力；用放射性免疫法測(cè)定細(xì)胞的培養(yǎng)液GMCSF，EPO和IL8的含量。結(jié)果1經(jīng)蛋白指紋圖譜分析，重組FGF2分子質(zhì)量為162429DA。然后將其同果糖共同培育48小時(shí)后其分子量出現(xiàn)增加，最大為171867DA，將FGF2成功糖化成GFGF2。2骨髓來(lái)源的EPC在體外培養(yǎng)時(shí)呈梭形，貼壁生長(zhǎng)，二者均表達(dá)CD34，CD133和VEGFR2表達(dá)，且能結(jié)合UEA1并攝取ACLDL，證明所培養(yǎng)細(xì)胞為內(nèi)皮祖細(xì)胞。且計(jì)數(shù)結(jié)果顯示GFGF2組數(shù)量較FGF2組數(shù)量減少，空白組EPC數(shù)量最少。3EPC體外功能測(cè)定表明GFGF2組骨髓EPC比FGF2組明顯的成血管能力降低，黏附能力降低，遷移能力降低，增殖能力減弱EPC分泌的EPO、GMCSF和IL8比對(duì)照組都減少。結(jié)論EPC在GFGF2的作用下數(shù)量減少，體外生物學(xué)活性降低，血管新生能力減弱，推測(cè)GFGF2可能是糖尿病患者體內(nèi)血管新生功能降低的原因之一。

簡(jiǎn)介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文谷胱甘肽乙酯和肌肽延緩糖尿病性白內(nèi)障的動(dòng)物和細(xì)胞生物學(xué)研究姓名柴飛燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師嚴(yán)宏20070401軍醫(yī)學(xué)碩學(xué)論第四大士位文2谷胱甘肽乙酯和肌肽延緩糖尿病性白內(nèi)障的動(dòng)物和細(xì)胞生物學(xué)研究碩士研究生柴飛燕導(dǎo)師嚴(yán)宏教授（主任醫(yī)師）第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院眼科，西安710038摘要目的目的1建立大鼠糖尿病性白內(nèi)障動(dòng)物模型，探討糖尿病大鼠晶狀體混濁的發(fā)生機(jī)制。2探討谷胱甘肽乙酯滴眼液（GLUTATHIONEETHYLESTER，GSHEE）對(duì)鏈脲佐菌素（STREPTOZOTOCIN，STZ）誘導(dǎo)的大鼠糖尿病性白內(nèi)障的作用及其機(jī)制。3初步探討肌肽（CARNOSINE，CAR）對(duì)高濃度葡萄糖（HIGHGLUCOSE，HG）誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制。方法方法對(duì)66只大鼠行裂隙燈檢查，排除晶狀體病變。隨機(jī)抽取10只大鼠作為正常對(duì)照組（A組），腹腔注射002MOLL枸櫞酸緩沖液（65MGKG，PH45）。56只大鼠完全隨機(jī)分為谷胱甘肽乙酯治療組（B組）和糖尿病未治療組（C組），腹腔注射1％鏈脲佐菌素（65MGKG）枸櫞酸緩沖液，血糖14MMOLL的大鼠作為糖尿病大鼠，注射STZ前5D正常組和糖尿病未治療組給予25MMOLL磷酸鈉緩沖液（PH74）、治療組大鼠給予01％谷胱甘肽乙酯磷酸鈉緩沖液，滴雙眼，2D。每4WK監(jiān)測(cè)大鼠血糖，每周監(jiān)測(cè)大鼠尿糖英國(guó)國(guó)際合作研究項(xiàng)目基金NO070667Z03國(guó)家教育部留學(xué)回國(guó)人員啟動(dòng)基金HG2507陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目2004K16G72

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多豬與人無(wú)細(xì)胞真皮生物學(xué)特性的比較研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：第一部分目的建立一種高效、簡(jiǎn)便的體外擴(kuò)增培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞的方法。方法取35例惡性腫瘤患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMCS，在GMP實(shí)驗(yàn)室體系下，應(yīng)用OKM100及OKM200培養(yǎng)基，經(jīng)細(xì)胞刺激因子OKM24體外誘導(dǎo)擴(kuò)增，觀察效應(yīng)細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)周期、擴(kuò)增前后細(xì)胞總數(shù)、擴(kuò)增倍數(shù)以及細(xì)胞存活率，同時(shí)觀察細(xì)胞回輸患者后的不良反應(yīng)。結(jié)果細(xì)胞在培養(yǎng)的第2天即可觀察到效應(yīng)細(xì)胞增殖；細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)周期為1346±120D；擴(kuò)增培養(yǎng)前外周血分離所得的PBMCS細(xì)胞數(shù)為660±223106，擴(kuò)增培養(yǎng)至細(xì)胞成熟收獲后所得的效應(yīng)細(xì)胞數(shù)為299±065109，擴(kuò)增倍數(shù)為48806±19125；臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞存活率為9771±107％；內(nèi)毒素及細(xì)菌、真菌、支原體、外來(lái)病毒檢測(cè)均為陰性。患者回輸效應(yīng)細(xì)胞后無(wú)明顯的不良反應(yīng)。結(jié)論在本研究體系下體外誘導(dǎo)擴(kuò)增培養(yǎng)腫瘤患者自體外周血致敏淋巴細(xì)胞效率較高，操作簡(jiǎn)便，生物安全性良好。第二部分人外周血淋巴細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)后淋巴細(xì)胞表型變化研究目的觀察35例惡性腫瘤病人外周血淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)擴(kuò)增培養(yǎng)后細(xì)胞表型的變化。方法體外大規(guī)模誘導(dǎo)和擴(kuò)增惡性腫瘤病人外周血淋巴細(xì)胞及單個(gè)核細(xì)胞，然后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定擴(kuò)增前后CD3、CD19、CD28、CD25、CD29、CD45RA、CD45RO、HLADR、CD3CD4、CD3CD8、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD4CD25、CD4CD29、CD8CD28、CD8CD28、CD4CD45RA、CD8CD45RA、CD4CD45RO、CD8CD45RO，CD3HLADR，CD3HLADR，CD4HLADR，CD4HLADR、CD4HLADR、CD4HLADR細(xì)胞在淋巴細(xì)胞中所占百分比的變化。結(jié)果經(jīng)體外擴(kuò)增培養(yǎng)后，CD3，CD3CD8，CIKCYTOKINEINDUCEDKILLERCELLS細(xì)胞及其亞型CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56，CD45RO細(xì)胞及其亞型CD8CD45RO，CD8CD28，CD25，CD29，CD3HLADR，CD8HLADR和CD8HLADR細(xì)胞比例較培養(yǎng)前明顯增加P＜001；而CD19，CD3CD4，NKNATURALKILLERCELLS細(xì)胞及其亞型CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56，CD45RA細(xì)胞及其亞型CD4CD45RA、CD8CD45RA，CD4CD45RO，CD28細(xì)胞及其亞型CD8CD28，CD4CD25，CD4CD29，CD4HLADR和CD4HLADR細(xì)胞比例則明顯的降低P＜001；HLADR細(xì)胞和CD3HLADR細(xì)胞培養(yǎng)前后細(xì)胞比例變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P值分別為0137和0423。結(jié)論經(jīng)體外擴(kuò)增培養(yǎng)后，所得細(xì)胞主要是以CD3細(xì)胞為主，CD4T細(xì)胞比例明顯下降，CD8T細(xì)胞比例顯著增高，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞TREG細(xì)胞和CD19B細(xì)胞的比例極低，活化性T細(xì)胞的比例與培養(yǎng)前無(wú)顯著差異。在增多的CD8T細(xì)胞中，效應(yīng)性T細(xì)胞TE并未明顯增加，但記憶性T細(xì)胞TM卻顯著增多。NK細(xì)胞比例下降，但CIK細(xì)胞的比例卻明顯增多。從對(duì)培養(yǎng)后細(xì)胞表型的分析可知，理論上，培養(yǎng)后細(xì)胞不僅具有直接的殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，回輸患者體內(nèi)后經(jīng)抗原刺激后還具有活化為效應(yīng)細(xì)胞的能力。第三部分人外周血淋巴細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)后效應(yīng)細(xì)胞生物方法①按照本課題第一部分中的方法體外擴(kuò)增3例惡性腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞，收獲細(xì)胞后計(jì)算效應(yīng)細(xì)胞濃度，然后將效應(yīng)細(xì)胞分別放置于4℃和25℃下保存，于細(xì)胞收獲后的不同時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用碘化丙啶PI對(duì)兩種存放條件下的細(xì)胞進(jìn)行染色并應(yīng)用流式細(xì)胞儀器檢測(cè)計(jì)算細(xì)胞存活率；②按照本課題第一部分中的方法體外擴(kuò)增3例患者外周血淋巴細(xì)胞，按照本課題第二部分中的方法檢測(cè)擴(kuò)增后細(xì)胞中NK細(xì)胞、CIK細(xì)胞的百分比，然后應(yīng)用MTT法檢測(cè)效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。結(jié)果①患者1效應(yīng)細(xì)胞初始存活率為988％，細(xì)胞濃度為74107ML，在4℃保存條件下其存活率明顯降低的時(shí)間點(diǎn)為102H，而在25℃保存條件下其存活率明顯下降的時(shí)間點(diǎn)為48H；患者2效應(yīng)細(xì)胞初始存活率為955％，細(xì)胞濃度為58107ML，在4℃保存條件下其存活率明顯下降的時(shí)間點(diǎn)為60H，在25℃保存條件下其存活率明顯降低的時(shí)間點(diǎn)為24H；患者3效應(yīng)細(xì)胞初始存活率為971％，細(xì)胞濃度104107ML，在4℃保存條件下其存活率明顯降低的時(shí)間點(diǎn)為84H，在25℃保存條件下其存活率明顯下降的時(shí)間點(diǎn)為24H。②患者1效應(yīng)細(xì)胞中NK細(xì)胞的百分比為24％，CIK細(xì)胞的百分比為539％，其121、251和501三個(gè)效靶比效應(yīng)細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的殺傷率分別為649％、708％和834％；患者2效應(yīng)細(xì)胞中NK細(xì)胞的百分比為06％，CIK細(xì)胞的百分比為695％，其121、251和501三個(gè)效靶比效應(yīng)細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的殺傷率分別為716％、751％和886％；患者3效應(yīng)細(xì)胞中NK細(xì)胞的百分比為116％，CIK細(xì)胞的百分比為417％，其121、251和501三個(gè)效靶比效應(yīng)細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的殺傷率分別為629％、673％和748％。結(jié)論①4℃條件比25℃條件更適合與保存效應(yīng)細(xì)胞，效應(yīng)細(xì)胞初始存活率低者以及細(xì)胞濃度較高者其細(xì)胞存活率下降的比較明顯；②效應(yīng)細(xì)胞具有較強(qiáng)的殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，且該活性與CIK細(xì)胞在效應(yīng)細(xì)胞中所占的百分比的呈正相關(guān)

簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼學(xué)號(hào)10023B2009393WTL基因表達(dá)對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)特征的影響及相關(guān)機(jī)制研究所院血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所姓名李曉燕指導(dǎo)教師秘營(yíng)昌教授導(dǎo)師小組王建祥王敏饒青教授學(xué)科專業(yè)內(nèi)科學(xué)血液病學(xué)研究方向白血病診療新策略完成時(shí)間2012年5月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部博士學(xué)位論文中文摘要研究目的在不表達(dá)WTL基因的U937細(xì)胞中轉(zhuǎn)導(dǎo)WTL基因，觀察U937細(xì)胞增殖、凋亡、周期、對(duì)藥物的反應(yīng)性及細(xì)胞遷移能力等生物學(xué)特性的改變，進(jìn)一步探究WTL基因在白血病中的作用及相關(guān)機(jī)制。研究方法采用PCR方法從質(zhì)粒載體PCMVCB6WT1B17AA／KTS、PCMVCB6WTLD17AA／KTS擴(kuò)增目的片段WTLB17AA／KTS和WTL一D17AA／KTS，連接到PCDHLMCSLEFLCOPGFP慢病毒載體上，采用磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝病毒，感染U937細(xì)胞，流式分選GFP陽(yáng)性細(xì)胞，篩選出穩(wěn)定表達(dá)WTL基因的單克隆細(xì)胞，RTPCR及WESTERNBLOT方法鑒定WTL基因及蛋白的表達(dá)隨后檢測(cè)轉(zhuǎn)導(dǎo)WTL基因后U937細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。采用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性和姜黃素對(duì)單克隆細(xì)胞的抑制率。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)單克隆細(xì)胞加入姜黃素后細(xì)胞周期和凋亡的改變。采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基觀察各單克隆細(xì)胞集落形成能力的差別。應(yīng)用TRANSWELL遷移實(shí)驗(yàn)觀察各單克隆細(xì)胞遷移能力的差別。同時(shí)采用基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)分析WTL表達(dá)引起功能相關(guān)的基因改變和涉及的信號(hào)通路，并用定量RTPCR驗(yàn)證基因表達(dá)的可信性。結(jié)果WTIKTS和WTLKTS沒(méi)有明顯改變U937細(xì)胞的增殖活性P005，但降低了對(duì)姜黃素的敏感性、能對(duì)抗姜黃素引起的U937細(xì)胞凋亡P均O05。雖然WTIKTS和WTLKTS沒(méi)有明顯改變細(xì)胞周期，但加姜黃素處理后，空載體與轉(zhuǎn)導(dǎo)WTL細(xì)胞的周期改變有顯著性差異P005。基因芯片分析結(jié)果顯示，WTIKTS己3起的顯著性差異基因涉及細(xì)胞增殖、凋亡、粘附遷移、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)等功能，差異基因參與的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要有JAKSTAT途徑、趨化因子信號(hào)途徑、MAPK信號(hào)途徑、MTOR信號(hào)途徑、ERBB信號(hào)途徑等。而WTLKTS引起的顯著性差異基因則明顯少于WTI一KTS，主要涉及細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、代謝過(guò)程等。結(jié)論不同的WTL異構(gòu)體在白血病發(fā)生中的作用不全相同。WTL一KTS抑制U937細(xì)胞凋亡，降低U937細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞遷移及集落形成，可能與激活JAKSTAT途徑、趨化因子信號(hào)途徑、MAPK信號(hào)途徑、MTOR信號(hào)途徑等有關(guān)。WTLKTS對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性可能弱于WTL一KTS，僅表現(xiàn)出抗凋亡和降低對(duì)藥物敏感性的作用。關(guān)鍵詞白血??；WTL基因；轉(zhuǎn)染；基因芯片

簡(jiǎn)介：細(xì)胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子E2F1是E2F家族中第一個(gè)被克隆出來(lái)的蛋白對(duì)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡都發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。E2F1參與了細(xì)胞周期從G1期到S期的轉(zhuǎn)換在細(xì)胞周期G1期前RB與E2F1結(jié)合限制了其活性當(dāng)細(xì)胞周期蛋白激酶CDK結(jié)合蛋白R(shí)B后磷酸化的RB釋放E2F1DP1復(fù)合物這樣E2F1DP1就結(jié)合到基因組上發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能激活下游基因進(jìn)而使細(xì)胞周期從G1期轉(zhuǎn)換到S期。同時(shí)E2F1還發(fā)揮促凋亡功能通過(guò)P53依賴型以及P53非依賴型兩種細(xì)胞信號(hào)通路進(jìn)而激活下游促凋亡蛋白如BCL2HOMOLOGY3BH3ONLYPROTEINSPUMANOXABIMHRKDP5BIK以及CASPASE39等此外E2F1還抑制細(xì)胞存活信號(hào)通路分子如NFΚBMCL1等。通過(guò)E2F1這兩方面的作用最終帶來(lái)細(xì)胞的凋亡。因此轉(zhuǎn)錄因子E2F1與腫瘤的治療有很密切的關(guān)系以E2F1作為腫瘤藥物靶點(diǎn)的研究顯得尤為重要。由于轉(zhuǎn)錄因子E2F1在細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用為了研究E2F1對(duì)其下游基因的調(diào)控本論文利用穩(wěn)定表達(dá)ERE2F1即雌激素受體與E2F1的融合蛋白的H1299細(xì)胞株進(jìn)行研究。該細(xì)胞株能夠穩(wěn)定表達(dá)大量融合蛋白ERE2F1這樣細(xì)胞內(nèi)這些融合蛋白就會(huì)與細(xì)胞膜上的大量配體相結(jié)合從而將ERE2F1固定在細(xì)胞核之外。當(dāng)加入雌激素受體抑制劑4OHT處理一段時(shí)間后ERE2F1與細(xì)胞膜上的配體的結(jié)合就會(huì)被打斷大量的ERE2F1就會(huì)進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮E2F1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能。本論文首先是建立并通過(guò)G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)HAERE2F1融合蛋白的H1299細(xì)胞株其次在雌激素受體抑制劑4OHT處理的情況下通過(guò)WESTERNBLOT技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)E2F1能夠在蛋白水平上激活下游蛋白DP1和BRAF再次用細(xì)胞株H1299和HELA在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒HAE2F1的情況下通過(guò)WESTERNBLOT技術(shù)和免疫熒光染色技術(shù)分別證實(shí)E2F1在蛋白水平上激活下游蛋白DP1和BRAF最后利用H1299細(xì)胞株在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒HAE2F1的情況下通過(guò)RTPCR技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)E2F1在轉(zhuǎn)錄水平上激活DP1在本論文所建立的E2F1對(duì)其下游基因調(diào)控的穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)中融合蛋白ERE2F1在細(xì)胞內(nèi)是大量表達(dá)的我們只是通過(guò)雌激素受體抑制劑4OHT來(lái)改變?cè)摰鞍椎募?xì)胞空間定位進(jìn)而在人為可控的情況下來(lái)研究E2F1對(duì)其下游基因的調(diào)控。我們的結(jié)果第一次揭示了E2F1蛋白與其下游蛋白DP1之間的關(guān)系這對(duì)于研究E2F1DP1異二聚體的形成與功能具有重要意義同時(shí)本論文所揭示的E2F1蛋白與BRAF蛋白的關(guān)系對(duì)于探討E2F1與細(xì)胞周期以及細(xì)胞腫瘤的關(guān)系具有一定的積極意義。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)公開(kāi)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文血小板裂解液（血小板裂解液（PLATELETLYSATE，PL）對(duì)牙源性）對(duì)牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響陳博培養(yǎng)類別學(xué)歷研究生申請(qǐng)學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位學(xué)科領(lǐng)域?qū)I(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師余擎教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位口腔醫(yī)學(xué)院牙體牙髓病科二O一二年五月血小板裂解液（血小板裂解液（PLATELETLYSATE，PL）對(duì)牙源性）對(duì)牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響研究生陳博學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院牙體科導(dǎo)師余擎教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)老師王捍國(guó)副教授資助基金項(xiàng)目資助基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（編號(hào)81170948；31170912）關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞血小板裂解液；牙源性干細(xì)胞；細(xì)胞增殖；細(xì)胞分化；組織再生；HATCP支架材料中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2012年5月

簡(jiǎn)介：內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文SRC抑制劑對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名于虹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師馬秀梅20100501OTHEEFFECTOFTHEINHIBITOROFSRCONTHEBIOLOGICALBEHAVIOURSOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLSABSTRACTOBJECTIVESRCISTHEFIRSTDISCOVEREDHUMANONCOGENE，WHICHHAVETYROSINEKINASEACTIVITYITSCLINICALVALUEHASATTRACTEDAWIDESPREADATTENTIONINTHISSTUDY，WEINVESTIGATEDTHEEFFECTOFTHEINHIBITOROFSRCPP2ONTHEGROWTH，MOTILITY，INVASIONANDANGIOGENESISOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINESGC一7901METHODSSTABLEEXPRESSIONOFSRCANDPSREPROTEINSWASCONFIRMEDBYWESTERNBLOTANALYSISSRCANDPSRCPROTEINEXPRESSIONWERETESTEDBYIMMUNOHISTOCHEMISTRY；WEMEASUREDEFFECTOFPP2ONPROLIFERATIONPSREPROTEINEXPRESSIONOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINESGC7901BYWESTERNBLOT；MTTWASUSEDTOEVALUATECELLPROLIFERATIONTUMORINVASIONWASEXAMINEDBYTRANSWEUMETHOD，ANDTUMORCELLMIGRATIONBYWOUND一HEALINGMETHODRESULTSIMMUNOHISTOCHEMISTRYREVEALEDTHATSREANDPSRCWEREEXPRESSEDINTHEEYTOSOLINTHEHUMANGASTRICCARCINOMACELLSWESTERNBLOTANALYSISSHOWEDTHAT5／￡MOL／LPP2HADMARKEDINHIBITORYEFFECTONP。SRCEX。PRESSIONINTHEHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINESGC一7901WHENHUMANGASTRICCARD‘NOMASCZ7901WREREEUKUREDWITHPP2FOR12HOUR，THERESULTSHOWEDTHATPP2COULDNOTIMPACTONCELLPROLIFERATIONAT0TANOL／LO33022，5／TMOL／L033021AND10刪L033102P005，WHILE15PMOL／L363102COULDINHIBITCELLPROLIFERATMP005；INTHEMEMBRARLCEINVASIONCULTURESYSTEMTRANSWELLCHAMBER，SUPPRESSIONSWERENOTEDAFTERPRETREATMENTSWITHPP25／MAOL／LAND10／JMOL／L，THISEFFECTCANBEENHANCEBYTHECONCENTRATIONGRADUALLYINCREASED，THEMIGRATIONDISTANCEWAS392O13TAN，254016TANAND156012TANAT0VMOL／L，5PMOL／LAND10PMOL／L，RESPECTIVELYTHEREWEREMORECELLSINVADINGTHROUGHTHEMATRIGDIN5PMOL／LAND10刪LGROUPTHANTHATIN0／上MOL／LGROUPINACONCENTRATIONDEPENDENTMANNER321672839AND256002984VS496673464，P005ANGIOGENESISINVITROASSAY

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文靶向HPSE的RNA干擾對(duì)人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名胡君申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)（普外科）指導(dǎo)教師胡浩20090401靶向HPSE的RNA干擾對(duì)人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實(shí)驗(yàn)研究英文摘要RESEARCHESONTHEEFFECTOFRNAITARGETINGHPSEONTHEBIOLOGICALACTIVITYOFTHEHUMANCOLORECTALCARCINOMACELLABSTRACTOBJECTIVETOOBSERVETHEHPSEEXPRESSIONAFTERTRANSIENTLYTRANSFECTINGHUMANCOLORECTALCARCINOMACELLHT29USINGSIRNA，TOAPPROACHTHEEFFECTOFRNAITARGETINGHPSEONTHEPROLIFERATION、INVASIONANDMETASTASISOFCOLORECTALCARCINOMACELLMETHODSTHEHEPARANASEMRNATARGETEDDOUBLESTANDEDSIRNAWASDESIGNEDWITHTHEBIOINFORMATICSTECHNOLOGYFOR72HOURSAFTERTRANSFECTINGHT29CELLSWITHSPECIFICANTIHPSESIRNAORNCFAMSIRNA，MTTMETHODWASUSEDTODETECTTHEPROLIFERATIONOFTHECELLSEVERYDAYINTHREEDAYSAFTERTRANSFECTIONTHELEVELOFHPSEMRNAINTHECELLSWASMEASUREDBYREALTIMEPCRIMMUNNOHISTOCHEMISTRYWASTAKENTODETECTTHEEXPRESSIONOFHPSEPROTEIN，THEINVASIVENESSOFHT29CELLINVITROWASMEASUREDQUANTITATIVELYBYTHEINVASIONTESTOFTRANSWELLCHAMBERRESULTSCOMPAREDWITHCONTROLGROUPS，CELLPROLIFERATIONOFSIRNAGROUPWASOBVIOUSLYSUPPRESSEDPO05CONCLUSIONS1SILENCINGHPSECOULDEFFECTIVELYINHIBITTHEPROLIFERATIONANDINVASIONOFHUMANCOLORCCTALCARCINOMA2SILENCINGHPSE，THECHANGESOFTHECELL’SBIOLOGICALACTIVITYARECORRELATEDWITHTHEDOWNREGULATIONOFLEVELOFHPSEMRNAANDPROTEINKEYWORDSHPSE；RNAINTERFERENCERNAI；COLOTECTALCANCER；CELLINVASION。WRITTENBYHUJUNSUPERVISEDBYHUHAOLL

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文硫氧還蛋白1的生物學(xué)功能研究對(duì)肝癌細(xì)胞HEPG2和炎性細(xì)胞U937的影響姓名唐文心申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師陳正望20090705華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文酸序列的第100位蘇氨酸（THRT）突變?yōu)樘於０罚ˋSNN），構(gòu)建了兩種真核表達(dá)載體PCDNATRX和PCDNAMUTRX，并分別建立了穩(wěn)定表達(dá)TRX1和MUTRX1的HEPG2細(xì)胞系。用不同抗癌藥刺激轉(zhuǎn)染細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染MUTRX1的細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性增強(qiáng)了，更容易發(fā)生凋亡。同時(shí)發(fā)現(xiàn)MUTR1分子結(jié)合ASK1（凋亡信號(hào)激酶1）的能力下降了。這表明TRX蛋白分子100位的“T”的磷酸化有利于其發(fā)揮抗凋亡的生物活性，其可能的機(jī)制是T100的磷酸化有助于TRX1和ASK1的結(jié)合。這對(duì)于開(kāi)發(fā)針對(duì)TRX磷酸化的抗腫瘤藥物提供了新的思路。隨著炎癌鏈概念的提出，TRX1也開(kāi)始因其在各種炎癥或應(yīng)激疾病以及在炎癥通路中的作用而受到關(guān)注。而一種新的多功能炎性蛋白DTAIF1被發(fā)現(xiàn)于Ⅰ型糖尿病自身免疫反應(yīng)的胰腺炎組織和慢性移植排斥反應(yīng)的同種大鼠異體移植的心臟中，能促進(jìn)多種炎癥細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的增殖、遷移和分泌。為探討TRX1與DTAIF1的相互調(diào)節(jié)關(guān)系，我們進(jìn)行了如下研究將重組質(zhì)粒PCDNAAIF1轉(zhuǎn)染人單核白血病細(xì)胞株U937，與對(duì)照組相比，發(fā)現(xiàn)DTAIF1水平的升高，但并不影響細(xì)胞內(nèi)TRX1的水平。而外源添加DTAIF1卻能顯著提高胞內(nèi)TRX1水平。將兩個(gè)重組質(zhì)粒PCDNATRX和PCDNANLSTRX分別轉(zhuǎn)染人細(xì)胞株U937，均能顯著提高細(xì)胞內(nèi)DTAIF1的蛋白水平及細(xì)胞的DTAIF1的分泌；同時(shí)發(fā)現(xiàn)，胞質(zhì)中TRX1對(duì)DTAIF1的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有影響，而細(xì)胞核內(nèi)的TRX1則可以使DTAIF1的MRNA水平顯著提高。這說(shuō)明不同的亞細(xì)胞定位的TRX1對(duì)DTAIF1的調(diào)控方式是有差異的胞質(zhì)中的TRX1在翻譯水平正調(diào)控DTAIF1，而TRX1入核后在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)DTAIF1進(jìn)行正調(diào)控。以上研究結(jié)果表明，細(xì)胞內(nèi)的TRX1促進(jìn)了DTAIF1的表達(dá)和分泌，而分泌到細(xì)胞外的DTAIF1則反過(guò)來(lái)促進(jìn)了TRX在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。因此本文提出了TRX1和DTAIF1的調(diào)控是互動(dòng)模式的。上述結(jié)果有利于進(jìn)一步深入研究DTAIF1在心血管疾病的形成和器官移植中炎癥發(fā)生的機(jī)理。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞硫氧還蛋白1蛋白磷酸化大炎肽同種異體炎癥因子1肝癌炎癥細(xì)胞增殖細(xì)胞凋亡II

簡(jiǎn)介：密級(jí)一博士學(xué)位論文TCADHERIN在胃癌中的表達(dá)以及對(duì)人胃癌細(xì)胞株HGC．2“／生物學(xué)性狀的影響作者姓名學(xué)科專業(yè)學(xué)院系、所指導(dǎo)教師唐亞萍臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)湘雅二醫(yī)院霍繼榮教授論文答辯日期翌生§盟答辯委員會(huì)主中南大學(xué)二0一二年五月蘭一原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文巾特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果T也0；包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我批同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。作者簽名盎垡日期三∑年￡月型F1學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位淪文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閿學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者簽名鰱聊簽名疊耋玉隰韭年翻丑日

簡(jiǎn)介：1810850學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，南本人獨(dú)J●完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開(kāi)和使用。兒發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。／簟曩≯‘、薌。一，‘“‘。研究牛簽名蘅侗氟導(dǎo)師簽章疊彥二級(jí)學(xué)流毒毒J7IIJ加／D年多月7。罔，P∥河北醫(yī)科大學(xué)’研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名鴦伺敷導(dǎo)師簽蚴口F口年多月日目錄中文摘要L英文摘要3引言6第一部分食管鱗狀細(xì)胞癌組織中ID一1的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系探討前言”7剛舌”7材料與方法8結(jié)果16附圖18附表23討論27／J、結(jié)31參考文獻(xiàn)33第二部分羥基喜樹堿對(duì)食管癌細(xì)胞株遷移與趨化運(yùn)動(dòng)能力的影響以及調(diào)節(jié)ID一1表達(dá)的作用機(jī)制前言一34日LJ舌一34材料與方法35結(jié)果”37附L蟄39附表42討論43爿、結(jié)45參考文獻(xiàn)46綜述ID蛋白在腫瘤發(fā)生中的研究進(jìn)展47參考文獻(xiàn)54致謝58個(gè)人簡(jiǎn)歷59

簡(jiǎn)介：間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELL，MSCS是來(lái)源于發(fā)育中胚層的一類多能干細(xì)胞，具有自我更新及多向分化潛能，它在特定誘導(dǎo)條件下可分化為多種類型的組織細(xì)胞，可形成骨、軟骨、脂肪、心肌等多種組織。最初MSCS來(lái)源于骨髓，由于人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMSCS在骨髓中含量極少，一般僅為骨髓細(xì)胞量的001％0001％，且取材較難，近年來(lái)已成功從胎盤、臍血、密致骨、脂肪、肌肉等多種組織中分離，而原被作為“廢棄物”丟棄的胎盤，取材相對(duì)容易。本文旨在從成熟胎盤中獲得胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞PLACENTADERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，PMSCS，，并研究比較了PMSCS與BMSCS的免疫生物學(xué)特性。近年的研究表明，MSCS除能支持體外造血、促進(jìn)體內(nèi)造血重建，還具有低免疫原性和免疫調(diào)節(jié)作用抑制同種異體免疫排斥反應(yīng)，在異基因干細(xì)胞移植時(shí)能降低宿主抗移植物反應(yīng)HVGR和移植物抗宿主反應(yīng)GVHD、可延長(zhǎng)移植物生存時(shí)間，提高移植成功率，是一種較為理想的組織工程種子細(xì)胞，但具體的免疫調(diào)節(jié)的機(jī)制尚未完全闡明。研究表明，人PMSCS對(duì)T細(xì)胞活化、增殖有抑制作用?，F(xiàn)有實(shí)驗(yàn)表明人PMSCS不表達(dá)HLADR，PMSCS具有低免疫原性，而對(duì)于胎盤源MSCS免疫調(diào)節(jié)作用的報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)從人胎盤中分離獲取MSCS并對(duì)其生物學(xué)特性與BMSCS進(jìn)一步比較，并觀察了高表達(dá)負(fù)性協(xié)同刺激分子PDL1的PMSCS在體外對(duì)T細(xì)胞周期和活化、對(duì)細(xì)胞因子的分泌等方面的調(diào)節(jié)作用，為臨床應(yīng)用和基礎(chǔ)研究提供實(shí)驗(yàn)的理論依據(jù)。第一部分人胎盤源與人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離及生物學(xué)特性的比較目的比較人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞HPMSCS與人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞HBMSCS的體外分離的方法及兩種細(xì)胞生物學(xué)特性。方法采取酶消化法分離人胎盤組織，用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，分別進(jìn)行貼壁分離和傳代培養(yǎng)，通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志的表達(dá)做比較性分析。并在誘導(dǎo)劑作用下進(jìn)行細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)、鑒定干細(xì)胞，并用PHA刺激的T細(xì)胞與PMSCS或BMSCS共培養(yǎng)，觀察T細(xì)胞與兩者的相互作用。結(jié)果1兩種來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞均貼壁生長(zhǎng)、呈成纖維細(xì)胞樣形態(tài)、表達(dá)CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD106、CD166，但不表達(dá)CD34、CD45、HLADR分子；2兩種來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞均能在體外向成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化，3；兩種來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞在體外對(duì)T細(xì)胞的活化增殖有明顯的抑制作用。結(jié)論人PMSCS與人BMSCS具有相似的細(xì)胞體外生物學(xué)特性、表型和多向分化的潛能及其負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用，是一種較為理想的組織工程種子細(xì)胞。第二部分負(fù)性協(xié)同刺激分子PDL1在人胎盤源MSCS的表達(dá)及其負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用目的探討人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞PMSCS對(duì)負(fù)性協(xié)同刺激分子PDL1的表達(dá)以及對(duì)T細(xì)胞體外的負(fù)性協(xié)同作用。方法用體外擴(kuò)增三代后的PMSCS和HBMSCS，采用流式細(xì)胞儀和免疫熒光方法來(lái)分析兩種細(xì)胞上協(xié)同刺激分子的表達(dá)情況，3HTDR摻入法檢測(cè)PMSCS對(duì)PHA刺激后的T細(xì)胞增殖的影響以及PDL1單克隆抗體部分阻斷PMSCS抑制T細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)分析PMSCS對(duì)PHA作用下T細(xì)胞周期和早期活化分子CD69表達(dá)的影響，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子水平，以及阻斷PDL1作用后的變化。結(jié)果1人PMSCS和HBMSCS均不表達(dá)CD80、CD83、CD86等正性協(xié)同刺激分子，而PMSCS高表達(dá)PDL1，HBMSCS則低水平表達(dá)PDL1。2PMSCS可抑制T細(xì)胞體外增殖，并使PHA刺激下的T細(xì)胞滯留于細(xì)胞周期的G0G1期，下調(diào)活化T細(xì)胞早期表面分子CD69的表達(dá)，以及調(diào)節(jié)IL2、IFNΓ、IL10的分泌。由此表明，PMSCS介導(dǎo)的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用部分是通過(guò)高表達(dá)PDL1分子，PDL1是PMSCS表達(dá)的主要負(fù)性免疫調(diào)節(jié)分子。結(jié)論人PMSCS在體外具有T細(xì)胞活化和增殖的抑制作用，其表達(dá)的PDL1分子介導(dǎo)重要的免疫調(diào)節(jié)作用。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多瘢痕疙瘩周圍皮膚成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。