簡介：目的比較來源于同一人退變椎間盤內(nèi)髓核干細胞NPSCS、纖維環(huán)干細胞AFSCS及軟骨終板干細胞CESCS的生物學特性。方法收集7例經(jīng)X線、MRI（核磁共振）確診為椎間盤突出癥患者，將取出的椎間盤仔細分離并進行酶消化、濾網(wǎng)過濾后獲得NPSCS、AFSCS及CESCS。培養(yǎng)至第3代時，采用CCK8（細胞增殖與活性檢測試劑盒）檢測三種干細胞的生長活性，并進行成脂、成骨及成軟骨誘導分化。誘導21D后分別應用油紅O染色檢測細胞成脂能力，茜素紅染色檢測細胞成骨能力，甲苯胺藍染色檢測細胞成軟骨能力。提取第3代細胞總RNA，分別行RTPCR（實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應）檢測成脂、成骨及成軟骨相關(guān)基因的表達情況。結(jié)果來自于同一患者的NPSCS、AFSCS與CESCS形態(tài)上相似，無明顯差異。生長曲線顯示CESCS（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為035±001，052±002，064±008，080±019，079±02，106±011，137±009131±041）與AFSCS（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為038±001，050±003，072±006，082±013，087±008，087±009，120±005143±005）增殖能力要比NPSCS（第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為032±002，042±004，059±001，064±017，065±019，068±021，067±012059±012）活躍。油紅O染色、茜素紅染色及甲苯胺藍染色分別證實三種干細胞均可向脂、骨及軟骨三系誘導分化。RTPCR檢測顯示AFSCS在成脂PPAR?；蛳鄬Ρ磉_量685±032，LPL基因相對表達量1372±037、及成軟骨COII基因相對表達量1045±110，SOX9基因相對表達量1439±122基因表達方面比NPSCS（PPARΓ基因相對表達量663±050，LPL基因相對表達量841±042；COII基因相對表達量353±062，SOX9基因相對表達量766±068）與CESCS（PPAR?；蛳鄬Ρ磉_量721±021，LPL基因相對表達量1062±037；COII基因相對表達量826±049，SOX9基因相對表達量1370±110）略強；而成骨能力方面，CESCS最強（RUNX2基因相對表達量730±11，COI基因相對表達量822±084），AFSCS（RUNX2基因相對表達量620±092COI基因相對表達量494±090）與NPSCS相當（RUNX2基因相對表達量261±006，COI基因相對表達量705±082；）；NPSCS的成脂基因尤其脂蛋白脂肪酶LPL基因表達較低。結(jié)論NPSCS、AFSCS及CESCS在體外培養(yǎng)中細胞形態(tài)相似，但生物學特性方面存在著差異。體外誘導分化及RTPCR檢測均提示AFSCS比其他兩種干細胞在椎間盤組織工程領(lǐng)域中更加具有優(yōu)越性。

簡介：神經(jīng)因素在骨組織再生及重建過程中作用重要，而神經(jīng)肽正是神經(jīng)因素發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的主要物質(zhì)。P物質(zhì)SUBSTANCP，SP是廣泛分布于骨髓和骨膜的感覺神經(jīng)元分泌的一種神經(jīng)肽，其生物化學結(jié)構(gòu)由11種氨基酸構(gòu)成，參與調(diào)控骨組織細胞如骨髓基質(zhì)干細胞、成骨細胞的生物學效應。不少體內(nèi)和體外細胞學實驗已經(jīng)表明，SP可以通過促進骨髓基質(zhì)干細胞BMSCS增殖能力增強、成骨基因表達及礦化來促進骨形成過程，調(diào)控骨折愈合生理過程。神經(jīng)肽SP的調(diào)控作用通常需要通過相關(guān)受體實現(xiàn)，SP受體主要是神經(jīng)激肽1受體NK1受體，此受體可介導SP促進骨形成的生物學效應過程。已有研究證實骨髓基質(zhì)干細胞和成骨細胞MC3T3E1細胞能夠穩(wěn)定表達NK1受體的MRNA，且表達部位位于細胞的細胞質(zhì)及細胞膜內(nèi)，提示SP相關(guān)調(diào)控作用的可行性。NK1受體可介導某些抗凋亡反應，如NK1受體拮抗劑可誘導人類癌細胞株HEP2凋亡。因此NK11受體表達及SP調(diào)控凋亡機制的相關(guān)性可能是神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控骨折愈合生理過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。細胞生物學效應的調(diào)控離不開細胞信號通路。已有研究證實經(jīng)典WNTΒCATENIN通路和MAPK信號通路等多種細胞信號通路參與了P物質(zhì)調(diào)控BMSCS增殖和礦化，但WNT信號通路是否參與SP抗骨髓基質(zhì)干細胞去血清誘導凋亡尚未證實。經(jīng)典WNTΒCATENIN信號通路是骨代謝生理的關(guān)鍵通路因素。經(jīng)典WNT通路可以概括為Β連環(huán)蛋白ΒCATENIN在細胞質(zhì)內(nèi)表達增加，積累到一定程度時可進入核內(nèi)引起下游WNT相關(guān)基因如CMYC等轉(zhuǎn)錄表達。研究表明，SP調(diào)控骨髓基質(zhì)干細胞增殖效應、促進BMSCS和前成骨細胞MC3T3E1分化程度均與經(jīng)典WNT通路有關(guān)，而WNT信號通路與細胞凋亡通路也具有相關(guān)性。因此SP的抗凋亡作用是否由經(jīng)典WNT信號通路介導有必要進行研究。以上研究背景提示目前存在三個問題，即P物質(zhì)是否能夠調(diào)控骨髓基質(zhì)干細胞的去血清誘導凋亡過程其調(diào)控效應具有何種濃度及時間特點其調(diào)控機制涉及何種凋亡信號通路及WNT信號通路改變這些問題的解釋將進一步加深目前對神經(jīng)因素通過神經(jīng)肽調(diào)控骨折愈合過程的分子機制的研究，以及骨折修復過程中的神經(jīng)保護作用的理解。本研究主要是研究神經(jīng)肽P物質(zhì)對大鼠BMSCS去血清誘導凋亡的調(diào)控效應、凋亡蛋白3等凋亡信號改變及相關(guān)經(jīng)典WNTΒCATENIN通路機制，同時探討NK1受體表達水平在細胞凋亡過程中的變化情況。本實驗主要的實驗材料、方法、內(nèi)容和結(jié)論主要包括以下幾個部分研究目的1神經(jīng)肽P物質(zhì)對大鼠骨髓基質(zhì)干細胞去血清凋亡的影響。2神經(jīng)肽P物質(zhì)作用下去血清誘導凋亡的大鼠骨髓基質(zhì)干細胞的凋亡通路相關(guān)信號改變情況。3神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細胞凋亡與經(jīng)典WNTΒCATENIN通路的關(guān)系。第1部分大鼠骨髓基質(zhì)干細胞的獲取鑒定及NK1受體檢測實驗目的通過全骨髓培養(yǎng)法獲取純度較高的大鼠BMSCS，并通過流式鑒定其純度，同時研究其NK1受體表達。實驗方法1大鼠骨髓基質(zhì)干細胞獲取實驗動物選擇年齡一個月左右重量80100G大小的SD大鼠，按照實驗動物倫理學要求直接脫頸法處死，于清潔條件無菌器械輔助下，按層次切開大鼠解剖結(jié)構(gòu)后獲取大鼠的股骨及脛骨。使用針頭沖洗骨髓腔，加入DMEM培養(yǎng)基（含10％胎牛血清）行全骨髓法分離培養(yǎng)BMSCS。2大鼠骨髓基質(zhì)干細胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)干細胞4872H后，首次換液后及時清洗培養(yǎng)瓶，去除未貼壁細胞后傳代培養(yǎng)，按照1∶2或1∶3的接種比例經(jīng)胰酶消化后傳代至培養(yǎng)瓶中，采用含胎牛血清10％及青霉素鏈霉素溶液1％的DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)液體每23天進行換液，細胞生長鋪滿瓶底后傳三代，胰酶消化后按1∶2傳代，通過光鏡及倒置顯微鏡觀察大鼠BMSCS形態(tài)變化特點。實驗結(jié)果通過全骨髓培養(yǎng)法于體外成功分離培養(yǎng)出可用于實驗的較高純度大鼠BMSCS。流式細胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示FL1HEIGHT02％±17％、CD90997％±31％、IGG1（096％±13％）、CD34（106％±13％）、CD44998％±41％、CD4517％±21％、IGG2A035％±29％、CD11BC06％±17％、HAMSTER009％±07％、CD299988％±31％，符合骨髓基質(zhì)干細胞的免疫表型特征。同時，NK1受體表達于骨髓基質(zhì)干細胞細胞膜及細胞質(zhì)內(nèi)，其蛋白表達量相對穩(wěn)定。實驗結(jié)論全骨髓培養(yǎng)法可獲得大量純度較高的大鼠骨髓基質(zhì)干細胞，且其表面穩(wěn)定表達NK1受體，為下一步研究提供了種子細胞和理論基礎(chǔ)。第2部分P物質(zhì)對骨髓間充質(zhì)干細胞去血清誘導下細胞活性的影響實驗目的初步觀察P物質(zhì)作用于去血清誘導下的BMSCS后的細胞活性變化。實驗方法1實驗分組處理取三代骨髓基質(zhì)干細胞，分為四組，即對照組（加入等量PBS做安慰劑）、SP108MOLL組、SP1010MOLL組、SP1012MOLL組，接種于96孔板內(nèi)于去學期誘導凋亡后12小時和24小時分別采用MTT法檢測細胞活性。初步篩選出適宜濃度和適宜時間點后，使用DAPI熒光染色法和ANNEXINVFITCPI染色，熒光顯微鏡觀察和上機（流式細胞儀）檢測細胞凋亡率改變。2MTT法檢測細胞活性96孔板內(nèi)每孔加入15ΜL的MTT溶液（1∶10稀釋），于37℃環(huán)境下孵育4H后，每孔加入150Μ1的DMSO用于溶解產(chǎn)生的晶體，隨后利用酶標儀測定吸光度495NM波長讀數(shù)。實驗結(jié)果MTT結(jié)果顯示24H去血清處理后，1010MOLLSP實驗處理能夠提高細胞活性，進一步的DAPI熒光染色顯示SP能夠保護細胞核形態(tài)皺縮形變等改變，且減少細胞凋亡率ANNEXINV熒光標記法。實驗結(jié)論P物質(zhì)能夠提高骨髓基質(zhì)干細胞于去血清處理后的細胞活性，改善細胞核形態(tài)變化且減少細胞凋亡率。第3部分P物質(zhì)對骨髓間充質(zhì)于細胞去血清誘導凋亡影響及相關(guān)凋亡通路調(diào)控機制的初步探討實驗目的初步探討P物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細胞凋亡過程中的細胞凋亡通路信號改變。實驗方法1實驗分組處理首先將第三代大鼠骨髓基質(zhì)干細胞隨機分為四組，即對照組、SP108MOLL組、SP1010MOLL組、SP1012MOLL組，測定凋亡蛋白3表達，探討P物質(zhì)抗凋亡效應的濃度特異性。進一步設(shè)置對照組、SP1010MOLL組、SP1010MOLLNK1受體拮抗劑SPANTIDE108MOLL組，探討SP抗凋亡效應機制。實驗結(jié)果P物質(zhì)作用于去血清的骨髓基質(zhì)干細胞后，凋亡蛋白3熒光染色陽性細胞數(shù)量減少，相關(guān)RNA和蛋白表達減少，以1010MOLL最為明顯。凋亡基因改變顯示P物質(zhì)在12小時和24小時可減少凋亡信號BAXBCL2比例，調(diào)控CASPASE8、CASPASE9和CASPASE3凋亡基因改變。實驗結(jié)論P物質(zhì)可調(diào)控骨髓基質(zhì)干細胞的內(nèi)源性凋亡通路信號，減少凋亡蛋白3表達，從而抑制細胞去血清凋亡過程。第4部分P物質(zhì)調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞去血清誘導凋亡的相關(guān)經(jīng)典WNTΒCATENIN通路機制的探討實驗目的初步探討P物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細胞凋亡的經(jīng)典WNT通路信號相關(guān)機制。實驗方法1實驗分組處理首先設(shè)置對照組、SP1010MOLL組、SP1010MOLLWNT通路拮抗劑DKK（001GL）組、SP1010MOLLNK1受體拮抗劑SPANTIDE108MOLL組，測定WNT通路和凋亡通路基因蛋白改變，并再次設(shè)置對照組、SP108MOLL組、SP（1010MOLL）組、SP1012MOLL組確認WNT通路蛋白相關(guān)改變情況。2WESTERNBLOT、QPCR檢測WNT通路和凋亡通路基因、蛋白表達提取實驗組總RNA后進行逆轉(zhuǎn)錄反應，熒光定量測定BCL2、BAX、CASPASE3、CASPASE8、CASPASE9、ΒCATENIN、GSK3Β、CMYC和CYCLIND1含量。相關(guān)結(jié)果于12小時和24小時分別測定三次。3免疫細胞熒光法檢測ΒCATENIN蛋白定位取三代細胞進行實驗處理后，固定液處理15分鐘后，使用04％TRITON溶液破膜10分鐘，脫脂牛奶封閉抗體30分鐘，之后以1∶300稀釋的ΒCATENIN一抗PBST溶液孵育過夜。PBS沖洗三次后，以FITC綠色熒光二抗室溫下避光孵育30分鐘，吸出液體后再次已DAPI染色15分鐘，熒光顯微鏡下觀察。實驗結(jié)果P物質(zhì)作用于骨髓基質(zhì)干細胞，促進經(jīng)典WNT通路ΒCATENIN、PGSK3Β、CMYC和CYCLIND1基因和蛋白表達增高以及ΒCATENIN轉(zhuǎn)移入核，阻斷WNT通路后P物質(zhì)抗凋亡效應減弱且WNT通路表現(xiàn)水平減低。實驗結(jié)論骨髓基質(zhì)干細胞可激活經(jīng)典WNT通路，從而調(diào)控去血清凋亡過程。

簡介：目錄慢病毒介導RNAI沉默GTPBP4基因表達對結(jié)腸癌RKO細胞生物學行為的影響??????????????????1中文摘要?????????????????????1英文摘要?????????????????????4前言???????????????????????8刖舌???????????????????????材料與方法????????????????????10結(jié)果???????????????????????23討論???????????????????????29結(jié)論??????????????????????。34參考文獻?????????????????????35英漢縮略詞對照表?????????????????37致謝???????????????????????38結(jié)直腸癌分子靶向治療的進展綜述?????????????????????????弓912345678911111111112324H、48H、72H、96H、120H5個時間點檢測各組RKO細胞的增殖情況。⑤用PI．FACS細胞周期檢測來檢測GTPBP4基因與RKO細胞周期分布的相關(guān)性。⑥通過感染后細胞在細胞培養(yǎng)板上的克隆形成能力來提示慢病毒感染后細胞的成瘤能力。結(jié)果①用熒光顯微鏡在慢病毒感染3天后觀察，根據(jù)發(fā)綠色熒光的RKO細胞所占比率判斷慢病毒感染RKO細胞的效率達80％以上。REAL．TIMEPCR法檢測結(jié)果數(shù)值分析采用2△△CT分析法，實驗組2AACT平均值為0．208，對照組的2AACT平均值為1．002，顯示實驗組RKO細胞中GTPBP4的MRNA表達水平顯著低于對照組P0．05。WESTERNBLOT結(jié)果X光顯影后，可見各組內(nèi)對照GAPDH蛋白灰度相似，而實驗組GTPBP4蛋白灰度值明顯低于對照組，顯示SIRNA對目的基因的表達有敲減作用，根據(jù)灰度分析結(jié)果，敲減效率達到72．9％。④凋亡檢測顯示慢病毒感染后，對于凋亡峰值實驗組細胞明顯高于對照組，且峰值出現(xiàn)時間早于對照組，表明實驗組RKO凋亡細胞增加。MTT法檢測結(jié)果在24H、48H、72H、96H、120H5個時間點對照組OD值均值分別為1．00、1．54、2．6L、4．15、8．09，實驗組分別為1．00、1．49、2．23、3．12、6．33，顯示慢病毒感染后，實驗組RKO細胞MTT值比值即增殖倍數(shù)減小，提示GTPBP4基因與RKO細胞的增殖能力顯著相關(guān)。⑥PIFACS細胞周期檢測結(jié)果慢病毒感染后，處于G1期及G2／M期的實驗組細胞顯著增多，而處于S期的明顯減少，提示GTPBP4基因與RKO細胞的周期分布相關(guān)。⑦細胞克隆形成檢測結(jié)果實驗組細胞集落數(shù)目平均值為63，對照組為106，顯示慢病毒感染后，實驗組RKO細胞集落數(shù)目與對照組細胞集落數(shù)目相比減少，提示GTPBP4基因與RKO細胞的克隆形成能力相關(guān)。結(jié)論

簡介：外周動脈疾?。≒ERIPHERYARTERYDISEASEPAD包括一系列由供應腦部、內(nèi)臟器官和肢體的動脈結(jié)構(gòu)和功能改變而導致的非冠狀動脈系統(tǒng)綜合征，即指除冠狀動脈之外的主動脈及其分支動脈的狹窄、閉塞或瘤樣擴增疾病，以下肢動脈硬化閉塞最為常見。目前手術(shù)和藥物均無法逆轉(zhuǎn)動脈壁本身的病變。治療PAD的關(guān)鍵為血管內(nèi)皮細胞（VULAENDOTHELIALCELLSVECS），其激活、增殖、遷移、管腔結(jié)構(gòu)的形成以及塑形，以出芽的方式形成新的血管并重建形成新生血管網(wǎng)，可增加末梢循環(huán)血量或改善微循環(huán)血液灌注，同時可解決外科血管重建術(shù)后動脈長期通暢率的問題。然而，成熟的VECS的活性低，生長速度及自我更新速度慢。VECS降解細胞外基質(zhì)和遷移能力弱，導致側(cè)枝循環(huán)建立不良，綜上獲得一種耐凋亡、促增殖，同時具備強大的遷移能力和降解細胞外基質(zhì)的理想VECS是治療PAD的關(guān)鍵所在。存活素（SURVIVIN，SVV）由142個氨基酸組成，為IAP（INHIBITOFAPOPTOSISPROTEIN家族中分子量最小的成員在腫瘤細胞中其強大的調(diào)節(jié)細胞增殖和抗凋亡能力得到了大量研究證實。SVV是目前已知最強的凋亡抑制因子1，可通過抑制CASPASE3CASPASE9CASPASE10等凋亡通路中的多個環(huán)節(jié)來抑制細胞的凋亡，同時參與不同細胞周期的調(diào)控，并與多種周期調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，直接調(diào)節(jié)細胞的有絲分裂，包括CYCLINDCYCLINE等，近年來已有很多研究證實SVV也表達于非腫瘤細胞，如胃粘膜2、巨噬細胞3以及腎小管上皮細胞等4，且SVV并非腫瘤的特異基因，表達后細胞不會產(chǎn)生腫瘤樣轉(zhuǎn)化。因此本研究培養(yǎng)大鼠動脈內(nèi)皮細胞，上調(diào)其SURVIVIN基因的表達，以獲得抗凋亡，促增殖的理想血管內(nèi)皮細胞，并從整體水平探討SURVIVIN基因促進VECS增殖及抗凋亡的機制以及對體內(nèi)血管生成的影響，為PAD的治療提供一定的理論及實驗基礎(chǔ)。第一部分SURVIVIN在大鼠血管內(nèi)皮細胞的表達目的探討SURVIVIN在大鼠血管內(nèi)皮細胞中的表達方法采用真核細胞裂解將正常長至90％左右的大鼠血管內(nèi)皮細胞裂解，并按照說明提取相應蛋白質(zhì)，通過WESTERNBLOT方法檢測正常大鼠血管內(nèi)皮細胞中SURVIVIN表達狀況。結(jié)果在正常培養(yǎng)的原代大鼠血管內(nèi)皮細胞中，SURVIVIN表達率高達100，WESTERNBLOT結(jié)果顯示，在幾組正常的RAEC中，條帶顯色較弱，灰度均值達1348。結(jié)論在正常大鼠血管內(nèi)皮細胞中SURVIVIN均有較低的表達。第二部分攜帶針對大鼠SURVIVIN基因的腺病毒的轉(zhuǎn)染及對血管內(nèi)皮細胞生物特性的影響及其機制的研究目的研究SURVIVIN基因?qū)Υ笫笱軆?nèi)皮細胞增殖、凋亡、周期以及血管生成的影響。方法擴增、純化過表達大鼠SURVIVIN基因重組腺病毒，利用RTQPCR、WESTERNBLOT檢測對大鼠血管內(nèi)皮細胞的感染及基因過表達效果。針對過表達SURVIVIN基因后的大鼠血管內(nèi)皮細胞，采用流式細胞儀、CCK8等，檢測SURVIVIN基因在體外對細胞凋亡、增殖、周期的影響。采用WESTERNBLOT檢測在凋亡和周期通路中與SURVIVIN相互作用的凋亡蛋白CASPASE3、BCL2和周期蛋白CYCLIND。將過表達SVV的RAEC采用肌肉注射的方法種植于裸鼠體內(nèi)，采用免疫組織化學技術(shù)對CD31表達陽性的大鼠血管內(nèi)皮細胞進行檢查。結(jié)果增殖型腺病毒在MOI為300時，轉(zhuǎn)染率為95，并具有很明顯的基因過表達作用。SURVIVIN過表達后，上調(diào)了BCL2表達、下調(diào)了CASPASE3從而失活或抑制了其介導的凋亡通路，凋亡率明顯降低；同時，SURVIVIN促進了CYCLIND的表達，說明SVV可能同時參與了大鼠血管內(nèi)皮細胞周期的調(diào)控，通過細胞周期蛋白CYCLIND等使細胞加速從G1期到S期的轉(zhuǎn)化。細胞移植2周以后，肌肉種植處免疫組織化學結(jié)果顯示有明顯的新生血管產(chǎn)生，說明SURVIVIN抗凋亡、促增殖能力促進大鼠血管內(nèi)皮細胞在體內(nèi)血管生成過程，并一定程度抵抗同種異體抑移植產(chǎn)生的排斥反應。結(jié)論構(gòu)建的增殖型腺病毒具有很高的轉(zhuǎn)染率和基因過表達效果，SURVIVIN對大鼠血管內(nèi)皮細胞的增殖，抗凋亡，周期有明顯的影響。胞質(zhì)中的SURVIVIN參與細胞抗凋亡及細胞周期的調(diào)控。SURVIVIN基因過表達抗凋亡，促增殖有助于血管內(nèi)皮細胞體內(nèi)血管生成。

簡介：分類號R735密級題單位代碼學號1031220131748南京醫(yī)斜犬掌碩士學位論文目G壘旦亟I壘二壘查膽笪痤主鮑塞達丞撾膽篁痤細胞生塹堂盈邊鮑整喧研究生王云完成時間三Q二盍生五月南京醫(yī)科大學碩士學位論文目錄中文摘要2ABSTRACT4引言7第一部分CLAUDIN4在膽管癌組織中的表達情況及與臨床病理特征的關(guān)系9材料與方法9結(jié)果L3第二部分SIRNA干擾CLAUDIN4表達對膽管癌細胞生物學行為的影響18材料與方法18結(jié)果29討論。33結(jié)論36綜述41攻讀學位期間發(fā)表文章情況56致射57

簡介：上海交通大學醫(yī)學院碩士學位論文上海交通大學醫(yī)學院碩士學位論文人骨髓間充質(zhì)干細胞通過人骨髓間充質(zhì)干細胞通過SDF1ΑCXCR4軸調(diào)控胃癌軸調(diào)控胃癌KATOIII細胞生物學特性的研究細胞生物學特性的研究專業(yè)外科學（科學學位）碩士生王嘉研究方向胃腸腫瘤外科及基礎(chǔ)研究申請學位級別碩士導師姜波健教授培養(yǎng)單位上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院（北院）上海交通大學醫(yī)學院附屬第三人民醫(yī)院學號1127269603基金資助項目上海市衛(wèi)生局科研課題基金20134393；上海交通大學醫(yī)學院科技基金13XJ0282015年4月上海交通大學學位論文原創(chuàng)性聲明上海交通大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名日期2015年4月28日

簡介：博士學位論文APL新融合基因TBLRL．RARA的致白血病作用及其治療策略的研究西達本胺對急性早幼粒白血病細胞生物學功能的影響及機制研究所院血液學研究所姓名李壽蕓指導教師王建祥教授導師小組王敏教授、饒青教授學科專業(yè)內(nèi)科學研究方向白血病發(fā)病機制完成時間2016年5月中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院清華大學醫(yī)學部博士學位論文第一部分APL新融合基因TBLRL．RARA的致白血病作用及其治療策略的研究3

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文PEBP4表達對腦膠質(zhì)瘤細胞生物學行為及化療藥物敏感性影響的初步研究PRELIMINARYSTUDYABOUTTHEIMPACTOFPEBP4EXPRESSIONONBIOLOGICALBEHAVIORANDCHEMOTHERAPYSENSITIVITYINBRAINGLIOMACELLSBRAINGLIOMAS博士研究生黃仁強學科、專業(yè)外科學神經(jīng)外科導師盧亦成教授第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院神經(jīng)外科導師組成員侯立軍教授第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院神經(jīng)外科胡國漢教授第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院神經(jīng)外科駱純教授第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院神經(jīng)外科陳菊祥教授第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院神經(jīng)外科培養(yǎng)單位第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院二零一六年五月一苓一／、年血月目錄摘要一1一ABSTRACT一5一中英文縮略詞對照表10前言11日Ⅱ舌一11一第一部分PEBP4在膠質(zhì)瘤臨床組織標本中的表達研究15一、引言一15一二、材料和方法15三、實驗結(jié)果24四、討論29一第二部分PEBP4在膠質(zhì)瘤細胞中的功能及分子機制研究38一、引言一38一二、材料和方法38一二、結(jié)果一43一、；口歹代一斗J”四、討論49一第三部分PEBP4表達對膠質(zhì)瘤細胞替莫唑胺敏感性的影響58一、引言58一二、實驗材料及方法一58一三、結(jié)果6L一四、討論65。全文總結(jié)75一綜J鲞76在校期間發(fā)表的論文99致射100

簡介：近年來隨著胃癌相關(guān)診療技術(shù)的不斷進步，胃癌患者的總體生存率得到了顯著提高，但其整體治療效果仍不十分理想。腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移是其重要的惡性生物學行為，從根本上尋找腫瘤發(fā)生、發(fā)展及惡性生物學行為的調(diào)節(jié)機制，可以有效提高胃癌的治療效果。目的研究LIF在胃癌中的表達情況與病理學參數(shù)及預后的相關(guān)性，評價其在胃癌診斷方面的價值，探索LIF對胃癌細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學行為的影響，并進一步探討具體作用機制。方法1利用ELISA技術(shù)檢測208例胃癌患者、67例慢性萎縮性胃炎患者和70例正常人LIF因子外周血表達水平。免疫組織化學染色檢測128例胃癌石蠟切塊LIF和LIFR在組織中的表達。通過WESTERNBLOT和QRTPCR方法檢測40例胃癌新鮮組織樣本及配對的癌旁正常組織中LIF和LIFR蛋白和MRNA的表達情況，并與臨床病理學參數(shù)及預后進行相關(guān)性分析。2篩選LIF低表達、LIFR高表達的胃癌細胞株（WESTERNBLOT和QRTPCR方法）。利用RNA干擾技術(shù)，借助質(zhì)粒為載體，敲低胃癌細胞株中LIFR的表達。通過CCK8、EDU和平板克隆實驗檢測加入外源性LIF因子及沉默LIFR基因后，對胃癌細胞增殖能力的影響。采用流式細胞技術(shù)檢測LIF及沉默LIFR對胃癌細胞的細胞周期分布和凋亡的影響。采用TRANSWELL實驗觀察LIF及沉默LIFR對胃癌細胞侵襲和遷移能力的影響。通過裸鼠體內(nèi)成瘤模型探討LIF及沉默LIFR后對腫瘤生長的影響。3WESTERNBLOT法和細胞免疫熒光染色技術(shù)檢測LIF對HIPPOYAP信號通路中核心元件的影響及相互關(guān)系。利用SIRNA沉默信號通路下游YAP蛋白表達后，通過CCK8實驗檢測LIF是否主要通過HIPPOYAP信號對胃癌細胞增殖產(chǎn)生影響。結(jié)果1胃癌患者、慢性萎縮性胃炎患者、正常人外周血LIF水平分別為8650±6282PGML、4325±1824PGML、3344±1918PGML。胃癌患者LIF水平明顯高于慢性萎縮性胃炎患者P0003和正常人P＜0001。LIF診斷胃癌的界值為5585PGML，診斷敏感度8814％，特異度8182％，準確度8564％。免疫組化結(jié)果顯示LIF和LIFR在胃癌中的陽性表達率明顯高于正常粘膜P＜0001，與腫瘤分化程度P0021、脈管浸潤P0001、T分期P0001、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移P0001及PTNM分期P0012存在相關(guān)性。相同腫瘤組織中LIF與LIFR的蛋白表達量及MRNA含量呈正性相關(guān)P＜0001，P＜0001。利用COX回歸多因素生存模型分析患者的預后相關(guān)因素發(fā)現(xiàn)LIF及LIFR與預后緊密相關(guān)，是獨立的預后風險因素P0009，P0034。2MGC803細胞在幾種常見胃癌細胞系中LIF的表達量最低，LIFR的表達量最高。加入外源性LIF可以顯著增強細胞的增殖、侵襲、遷移、抗凋亡能力和裸鼠體內(nèi)成瘤速度P＜0001。沉默LIFR后，與陰性對照組相比，細胞的上述惡性生物學行為能力被明顯減弱，且在LIFR被沉默的細胞中再次加入LIF無法發(fā)揮上述LIF的腫瘤促進作用。3LIF可以顯著降低HIPPOYAP信號通路中核心元件的磷酸化水平P＜0001，并促進YAP蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。另外，LIF無法促進YAPSIRNA細胞的增殖。結(jié)論1LIF參與了胃癌內(nèi)在的發(fā)生過程，能夠用于胃癌的診斷，并且與胃癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及患者預后緊密相關(guān)。2LIF可以促進胃癌細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學行為，而沉默LIFR可以抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在LIFR表達被沉默后，再次加入LIF無法發(fā)揮其作用，提示LIF是與其受體LIFR結(jié)合，增強腫瘤的惡性生物學行為能力。3LIF可以有效降低細胞內(nèi)MST12、LATS1和YAP磷酸化蛋白的含量，從而抑制了HIPPOYAP通路中的核心元件，最終促進YAP的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。4LIF在胃癌的發(fā)生、進展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起到了重要作用，能夠成為未來胃癌靶向治療的重要研究方向。運用LIF抗體或沉默LIFR的表達可以成為一種新型的胃癌個體化治療手段。

簡介：博士學位論文科學學位科學學位沉默沉默MUSASHI1基因?qū)Y(jié)腸癌基因?qū)Y(jié)腸癌細胞生物學特性及放細胞生物學特性及放療敏感性的影響療敏感性的影響研究生高超高超導師張翼張翼教授專業(yè)生理學生理學二級學院基礎(chǔ)醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院研究起止日期2013年10月2016年1月提交日期2016年4月授予單位代碼10089學號或申請?zhí)?0131003授予單位代碼10089學號或申請?zhí)栔袌D分類號20131003R73535HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要5英文縮寫11研究論文沉默MUSASHI1基因?qū)Y(jié)腸癌細胞生物學特性及放療敏感性的影響引言13第一部分結(jié)腸癌組織和細胞中MUSASHI1蛋白表達及MUSASHI1穩(wěn)定低表達結(jié)腸癌細胞系構(gòu)建前言15材料與方法17結(jié)果36附圖38討論45小結(jié)49參考文獻50第二部分沉默MUSASHI1對結(jié)腸癌HCT116細胞生物學特性的影響前言54材料與方法55結(jié)果61附圖63討論70小結(jié)75參考文獻76第三部分沉默MUSASHI1對結(jié)腸癌HCT116細胞生長抑制的分子機制前言80材料與方法82結(jié)果92附圖93討論96

簡介：2016年3月授予單位代碼授予單位代碼10089學號或申請?zhí)枌W號或申請?zhí)?0132070中國圖書分類號中國圖書分類號R73058細絲蛋白細絲蛋白A下調(diào)對下調(diào)對HER2HER2陽性乳腺癌細胞生物陽性乳腺癌細胞生物學行為的影響學行為的影響研究生生李怡導師師朱鐵年朱鐵年教授教授專業(yè)業(yè)腫瘤學腫瘤學二級學院二級學院白求恩國際和平醫(yī)院白求恩國際和平醫(yī)院HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要6英文縮寫10研究論文細絲蛋白A下調(diào)對HER2陽性乳腺癌細胞生物學行為的影響前言11材料與方法13結(jié)果28附圖30附表37討論40結(jié)論45參考文獻46綜述HER2陽性乳腺癌分子靶向治療的研究進展50致謝63個人簡歷64

簡介：RBM8A與肝細胞癌發(fā)生的相關(guān)性及對肝細胞癌增殖及凋亡生物學特性的影響及機制研究2013級博士研究生年級2013級學號201310031廣西醫(yī)科大學廣西醫(yī)科大學博士學位論文RBM8A與肝細胞癌的相關(guān)性及對肝細胞癌與肝細胞癌的相關(guān)性及對肝細胞癌增殖及凋亡生物學特性的影響增殖及凋亡生物學特性的影響葉甲舟指導教師姓名黎樂群指導教師姓名黎樂群教授教授專業(yè)名稱腫瘤外科學專業(yè)名稱腫瘤外科學申請學位類型科學學位申請學位類型科學學位二零一六年三月二零一六年三月RBM8A與肝細胞癌發(fā)生的相關(guān)性及對肝細胞癌增殖及凋亡生物學特性的影響及機制研究2013級博士研究生簽字日期年月日簽字日期年月日目錄主要縮略語英文對照表1摘要4ABSTRACT9一、RBM8A與人肝細胞癌相關(guān)性的臨床初步研究141前言142材料及方法1821標本1822實驗方法193結(jié)果334討論42參考文獻46二、RBM8A與肝癌細胞增殖及凋亡特性的基礎(chǔ)實驗研究521前言522材料與方法5321體外肝癌細胞株RBM8A表達的篩選檢測5322HUMANRBM8過表達慢病毒載體的構(gòu)建與包裝53221階段1RBM8A過表達慢病毒載體的構(gòu)建53222階段2慢病毒的包裝和病毒滴度的測定60

簡介：點擊查看更多羽扇豆醇對人肝癌細胞系SMMC-7721中肝癌干細胞樣細胞生物學行為的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：隨著電力工業(yè)的快速發(fā)展與家用電器的日益普及，環(huán)境工頻磁場（在我國主要為50HZ磁場）的暴露水平不斷增加，其可能的健康危害日益引起公眾的關(guān)注?；谟邢薜牧餍胁W研究證據(jù)，世界衛(wèi)生組織下屬的國際癌癥研究中心將極低頻磁場0300HZ歸類為人類可疑致癌原。大量實驗研究結(jié)果提示工頻磁場暴露可能影響生物體或細胞產(chǎn)生生物學效應，但研究結(jié)果不一致，其關(guān)鍵是低強度工頻磁場與生物體作用的生物學機制不清楚。已有研究顯示，靜磁場、脈沖電場暴露影響液體或溶液中生物大分子的物理特性，且受暴露的液體或生物大分子能作用于細胞或生物體產(chǎn)生生物學效應。為此，我們假設(shè)工頻磁場暴露體外培養(yǎng)細胞產(chǎn)生的生物學效應可能是通過作用細胞培養(yǎng)液進而影響細胞功能實現(xiàn)的。為探索工頻磁場產(chǎn)生效應的機制，本學位論文研究分析了50HZ磁場暴露對細胞培養(yǎng)液物理特性的影響及經(jīng)磁場暴露后的培養(yǎng)液對細胞功能的影響。首先，我們將ΑMEM細胞培養(yǎng)液（含10％FBS）暴露于40MT的50HZ磁場不同時間0～60MIN，利用檢測表面等離子體共振SURFACEPLASMONRESONANCE，SPR的相位信號變化來分析培養(yǎng)液折射率的變化情況，并觀察了不同強度0～40MT50HZ磁場暴露對細胞培養(yǎng)液SPR相位信號的影響。結(jié)果顯示，50HZ磁場暴露引起ΑMEM細胞培養(yǎng)液的SPR相位信號變化，且該效應具有磁場暴露時間、暴露強度依賴性。同時，我們將細胞培養(yǎng)液暴露于40MT的50HZ磁場暴露30MIN后停止磁場暴露，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液的SPR相位信號能夠恢復并接近本底水平，提示該效應具有可逆性。進一步，本研究利用受40MT的50HZ磁場暴露或假暴露1H后的細胞培養(yǎng)液來處理人羊膜上皮FL細胞，將細胞繼續(xù)培養(yǎng)至48H，采用CCK8法分別檢測FL細胞的活力將50HZ磁場暴露組的細胞培養(yǎng)液孵育FL細胞5～60MIN，采用WESTERNBLOT法檢測MAPK信號通路ERK，P38和自噬信號通路P62，LC3相關(guān)蛋白的表達水平采用ΓH2AX焦點形成實驗檢測細胞DNA雙鏈斷裂情況，采用堿性彗星實驗檢測DNA片段化情況利用流式細胞儀檢測胞內(nèi)活性氧自由基ROS的變化。結(jié)果顯示，受40MT的50HZ磁場暴露的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)FL細胞，對細胞的活力、MAPK信號通路和自噬通路相關(guān)蛋白的表達水平、DNA損傷和胞內(nèi)ROS水平?jīng)]有顯著影響。另一方面，本研究采用相位SPR成像傳感技術(shù)分析50HZ磁場暴露對表皮生長因子EGF溶液SPR信號的影響。結(jié)果顯示，相對于假暴露組，50HZ磁場暴露組的EGF溶液SPR相位值較初始值減小。以表皮生長因子受體EGFR連接金膜為固定相，以EGF溶液為流動相，我們發(fā)現(xiàn)相位SPR成像傳感技術(shù)能檢測EGF和EGFR的相互作用，但經(jīng)50HZ磁場暴露的EGF未影響EGF和EGFR的相互作用。進一步，我們分析了受50HZ磁場暴露的EGF作用細胞產(chǎn)生的生物學效應，即將50HZ磁場暴露的EGF配制入含1％FBS的ΑMEM細胞培養(yǎng)液并培養(yǎng)FL細胞，然后檢測細胞活力和EGFR聚簇。結(jié)果顯示，EGF能增強細胞活力和促進EGFR聚簇但與假暴露組相比，50HZ磁場暴露組的EGF未能影響FL細胞的活力和EGFR聚簇?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，我們認為，在本實驗條件下，50HZ磁場暴露引起含10％FBS的ΑMEM細胞培養(yǎng)液SPR相位信號的變化，但受50HZ磁場暴露的細胞培養(yǎng)液對FL細胞活力、MAPK信號通路和自噬通路相關(guān)蛋白的表達水平、DNA損傷和細胞內(nèi)ROS水平均沒有顯著影響。此外，50HZ磁場暴露影響生物大分子EGF的SPR相位信號，但受50HZ磁場暴露的EGF末影響體外EGF和EGFR的相互作用和FL細胞活力、EGFR聚簇。我們的研究數(shù)據(jù)提示，與靜磁場、脈沖電場不同，50HZ磁場暴露引起的細胞生物學效應可能不是通過影響細胞培養(yǎng)液或培養(yǎng)液中生物大分子的物理特性實現(xiàn)的。

簡介：BTK抑制劑對急性髓系細胞自血病細胞生物學的影響及其機制的研究THEINFLUENCEOFBTKINHIBITORTOWARDSBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFAMLCELLLINESANDMECHANISMRESEARCH導論文課題起止時間2Q壘生魚月2Q魚生3旦中國醫(yī)科大學遼寧2016年3月目錄一、摘要中文論著摘要1英文論著摘要3二、英文縮略語6三、論文前言與背景7材料與方法9結(jié)果11討論17結(jié)論19四、本研究創(chuàng)新性的自我評價20五、參考文獻2L六、附錄綜述24致謝32個人簡介33