簡介：後旦大學碩士學位論文專業(yè)學位PPAR丫蛋白的體液表達及其對母胎界面滋養(yǎng)細胞和蛻膜基質(zhì)細胞生物學功能的影響院系專業(yè)姓名指導老師完成日期婦產(chǎn)科醫(yī)院婦產(chǎn)科學劉雙萍程海東教授2013年4月30日目錄英文縮略詞1中文摘要2英文摘要6第一部分12第二部分17第三部分21結(jié)侖35參考文獻36附錄I綜述39附錄II發(fā)表綜述44附錄III發(fā)表病例報告52附錄IV致謝54

簡介：浙江大學醫(yī)學院碩士學位論文ⅢΒ微管蛋白和多藥耐藥基因1表達與非小細胞肺癌生物學特性的相關(guān)性研究姓名胡立紅申請學位級別碩士專業(yè)呼吸系病指導教師周建英20090401浙江大學碩上學位論文中文摘要1116．TUBULIN和MDRL表達陽性的患者其3年生存率分別為37％和32％，經(jīng)分析差異有顯著性P0．05。結(jié)論IIIGTUBULIN和MDRL在肺癌的發(fā)生和進展中發(fā)揮著一定的作用，可作為判斷肺癌預(yù)后的重要指標．關(guān)鍵詞III型D微管蛋白MDRL蛋白非小細胞肺癌免疫組化

簡介：復(fù)旦大學博士學位論文ERΒ對乳腺癌細胞株生物學特性的影響及肺高轉(zhuǎn)移乳腺癌細胞系的建立姓名侯意楓申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師沈鎮(zhèn)宙20040427ERB對人乳腺癌復(fù)旦大學博士論文中文摘要第二部分自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移人乳腺癌細胞系的建立目的建立具有自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移特性的人乳腺癌細胞系，為乳腺癌轉(zhuǎn)移的相炎研究提供一個良好的實驗平臺。方法采用人乳腺癌細胞株MDAMB435構(gòu)建裸鼠原位移植瘤模型，連續(xù)進行6輪肺轉(zhuǎn)移篩選，取其肺轉(zhuǎn)移灶建立具有自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移特性的人乳腺癌細胞系MDAMB一435HM并運用核型分析、MT7R、流式細胞儀檢測技術(shù)、TRANSWELL、R，L、一PCR及基因芯片等方法比較該細胞系和源細胞的差異。結(jié)果MDAMB一435HM細胞呈圓梭型、亞三倍體核型、主流染色體數(shù)目為50～52條細胞倍增時間縮短至“小時，較源細胞增殖速度顯著加快伊一?！拊始毎那忠u能力提高約2倍滬口OO；S期細胞所占的比例為5546％，較源細胞4034％顯著增高伊N05；兩株細胞的成瘤率均為100％，但MDAMB一435細胞的4周肺轉(zhuǎn)移率為40％，而MDAMB一435HM細胞為100％伊N016周時，MDAMB一435HM細胞和源細胞的中位肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)分別為37個／肺和6個／肺；RTPCR檢測顯示，MDAMB～435IIM細胞的MMP一2、7MRNA表達水平分別提高32倍和21倍伊口卯基因芯片檢測顯示，有60條基因的表達發(fā)生改變。結(jié)論自發(fā)性肺高轉(zhuǎn)移乳腺癌細胞系是研究乳腺癌轉(zhuǎn)移機制的良好工具。關(guān)鍵詞乳腺腫瘤動物模型轉(zhuǎn)移基質(zhì)金屬蛋白酶基因芯片

簡介：間充質(zhì)干細胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS是一種具有多向分化潛能的成體干細胞，是當前干細胞研究領(lǐng)域的熱點，在組織器官缺損性疾病、退行性疾病、自身免疫性疾病、遺傳缺陷等疾病的治療中有著巨大的臨床應(yīng)用前景。隨著MSCS臨床應(yīng)用的進程，對MSCS生物學特性的研究和認識提出了更高的要求。一直以來，骨髓MSCS被認為是骨髓單個核細胞中具有貼壁的特性、并可在體外培養(yǎng)增殖和誘導多向分化的非造血系統(tǒng)的干細胞。值得注意的是，迄今為止MSCS尚未發(fā)現(xiàn)有特異性的表面分子。目前國際公認的MSCS表型特征為細胞表面CD73、CD90、CD105等抗原呈陽性，而CD14、CD19、CD34、CD45、HLADR等造血譜系分子表達陰性。由于缺乏鑒定細胞的特異性標志，導致對MSCS的生物學特征缺乏嚴格統(tǒng)一的定義，制約了對MSCS生物學特性的研究和認識，使得MSCS的檢測、分離純化以及應(yīng)用均面臨著巨大的難題。第1章人間充質(zhì)干細胞特異性單克隆抗體及其抗原特征的鑒定為發(fā)現(xiàn)新的MSCS特異的表面標志，以期深入研究MSCS的生物學特性，本研究以培養(yǎng)的人骨髓MSCS為免疫原免疫BALBC小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)研究制備了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的人骨髓MSCS特異性單克隆抗體ZUB1，并對ZUB1單克隆抗體及其識別抗原的生物學特性進行了深入研究。通過對抗體種屬和組織細胞特異性鑒定，證實ZUB1單克隆抗體針對人MSCS有高度的特異性和敏感性，ZUB1可識別骨髓、脂肪組織、臍帶組織和臍帶血來源的MSCS，與大鼠、小鼠和兔骨髓MSCS均無交叉反應(yīng)。WESTERNBLOT結(jié)果顯示，ZUB1單克隆抗體識別一種分子量約為250KD的抗原分子，該種抗原在13種人血液系統(tǒng)惡性疾病細胞株和10種人實體組織細胞株均無表達。骨髓、脂肪組織、臍帶組織和臍帶血來源的MSCS在傳代擴增過程中形態(tài)基本一致，流式細胞術(shù)檢測傳代擴增細胞表達ZUB1抗原的陽性率分別為9758±068％、8950±397％、9663±123％、8723±407％，此外CD29、CD44、CD105、CD166、CD146陽性標記出現(xiàn)單峰，CD3、CD14、CD19、CD34、CD117、CD133、CD45、CD235A、HLADR均表達陰性，傳代細胞ZUB1抗原和其他各表面抗原表達均無顯著性差異。當誘導骨髓MSCS向成骨細胞和脂肪細胞定向分化時，流式細胞檢測顯示ZUB1抗原表達相應(yīng)減弱，提示ZUB1抗原可作為MSCS干細胞特征的標志分子，且可能參與了MSCS分化的細胞活動。為進一步鑒定ZUB1單克隆抗體識別的抗原表位，我們通過WESTERNBLOT實驗證實ZUB1單克隆抗體識別的抗原分子量約為250KD，應(yīng)用ZUB1單克隆抗體通過免疫沉淀的方法從人骨髓MSCS細胞裂解液中獲取與ZUB1抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，ZUB1抗體蛋白復(fù)合物經(jīng)SDSPAGE電泳分離后切取蛋白質(zhì)條帶，質(zhì)譜分析提示ZUB1單克隆抗體識別的分子量為250KD的抗原肽段為非肌性肌球蛋白9重鏈NONMUSCLEMYOSINHEAVYCHAIN9，NMMHCⅡA。生物信息學分析提示該類細胞骨架蛋白的同型異構(gòu)體在不同組織和干細胞的不同分化階段有不同的異構(gòu)體的表達，MSCS特異的形態(tài)特征和細胞骨架結(jié)構(gòu)與其多向分化潛能是相適應(yīng)的該研究進一步豐富了對骨髓MSCS特異性分子特征的認識，也為進一步研究MSCS分化等細胞活動提供了一個重要的線索第2章ZUB1抗原陽性骨髓間充質(zhì)干細胞亞群的鑒定和生物學特性的研究隨著對體外培養(yǎng)MSCS的生物學特性認識的深入，研究者利用不同的表面分子分離骨髓單個核細胞以期進一步研究和鑒定骨髓原始MSCS及其不同亞群的生物學特性。利用ZUB1單克隆抗體，我們建立了ZUB1骨髓MSCS的分離培養(yǎng)體系，并深入研究了ZUB1骨髓MSCS亞群的生物學特性。應(yīng)用ZUB1單克隆抗體通過免疫磁珠分選骨髓單個核細胞，流式細胞儀檢測分選后細胞純度為6152±669％，分選后獲得的ZUB1骨髓單個核細胞體積較小、核質(zhì)比大，符合干細胞的形態(tài)學特征。ZUB1骨髓單個核細胞培養(yǎng)3天后細胞貼壁呈梭形，5天后細胞擴增明顯，梭形貼壁細胞增殖呈集落樣分布，培養(yǎng)15天左右貼壁細胞達80％～90％匯合，細胞形態(tài)均一，且具有很好的增殖活性，細胞擴增至第8代細胞生長曲線無明顯差異。流式細胞術(shù)分析顯示ZUB1骨髓單個核細胞貼壁培養(yǎng)后具有MSCS的表型特性，且可誘導向成骨細胞、脂肪細胞和神經(jīng)元樣細胞。因此，ZUB1單克隆抗體可用于分離富集ZUB1骨髓MSCS亞群。一直以來MSCS缺乏特異性分子標志，目前尚無有效的指標可以鑒定骨髓中不同亞群的原始MSCS的含量。CFUF可用于評估骨髓單個核細胞中MSCS集落的形成情況，也是目前用于評估骨髓中原始MSCS的數(shù)量的主要指標之一。將未分選的骨髓單個核細胞、及磁珠分選后ZUB1和ZUB1髓單個核細胞按2104CM2、1103CM2、2104CM2的細胞密度分別接種培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)15D，ZUB1骨髓單個核細胞形成CFUF的數(shù)量和直徑明顯多于未分選的骨髓單個核細胞，而ZUB1骨髓單個核細胞未見集落形成按照每105單個核細胞計算ZUB1單克隆抗體分選骨髓單個核細胞的CFUF富集指數(shù)ENRICHMENTFACT為19309±3281，且ZUB1骨髓MSCS增殖較快。為進一步分析ZUB1骨髓MSCS的表型特征，對MSCS公認的一系列表面分子檢測結(jié)果顯示該類細胞的表型一致CD29、CD105、CD166、CD146表達陽性，而CD3、CD14、CD19、CD33、CD235A、HLADR、CD45、CD34、CD133、CD117為陰性。由此，我們認為ZUB1單克隆抗體可有效地富集骨髓單個核細胞中的MSCS，ZUB1抗原可以作為研究骨髓原始MSCS的分子標志；ZUB1骨髓MSCS體外培養(yǎng)增殖較快，并可多向分化為成骨細胞、脂肪細胞和神經(jīng)元樣細胞。本研究制備了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗人骨髓MSCS特異性單克隆抗體，并證實ZUB1抗原針對人MSCS有高度的特異性，可用于人MSCS的檢測、鑒定以及富集骨髓中原始MSCS。ZUB1抗原為一種在MSCS中特異的細胞骨架蛋白，參與了MSCS定向分化的生命活動。骨髓細胞中ZUB1骨髓單個核細胞作為一個新的骨髓MSCS亞群，豐富了對MSCS生物學特性的認識，并為MSCS的研究帶來新契機。

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文造血干細胞體內(nèi)衰老模型的構(gòu)建及相關(guān)生物學研究姓名楊斌申請學位級別碩士專業(yè)人體解剖學與組織胚胎學指導教師王亞平20100501重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文在為研究HSC衰老機理以及延緩其衰老的途徑提供理論與實驗依據(jù)。方法1免疫磁性分選法MACS分離、純化雄性C57小鼠SCA1HSC，流式細胞術(shù)FCM鑒定分選細胞純度，免疫熒光檢測分選HSCSEA1抗原的表達，臺盼藍拒染法檢測分選SCA。1HSC的活性。2用雄性供體HSC連續(xù)尾靜脈移植給雌性受體鼠，建立小鼠HSC復(fù)制性衰老體內(nèi)模型；經(jīng)PCR分析Y染色體基因，鑒定受體鼠造血細胞是否來源于雄性供體；觀察移植后受體鼠脾結(jié)節(jié)CFUS形成數(shù)量、測定脾臟指數(shù)，胸腺指數(shù)，觀察移植HSC后受體鼠外周血血象指標WBC，RBC以及PLT的恢復(fù)，以觀察受體鼠造血功能重建情況。3采用造血祖細胞混合性集落CFUMIX培養(yǎng)、細胞周期測定和衰老相關(guān)P半乳糖苷酶SA一13染色，觀察連續(xù)移植所致衰老HSC自我更新和多向分化能力的生物學特點。結(jié)果1小鼠SEA1IISC分離純化及鑒定流式細胞術(shù)檢測MACS前骨髓單個核細胞MNCS中SCA1HSC百分比僅為17％；MACS分離純化后SEA1HSC純度可達872％以上。免疫熒光觀察顯示，分選前MNCS中僅有極少數(shù)細胞表達SCA1抗原，MACS分離純化后標記的細胞中見大多數(shù)細胞表達SCA1抗原。臺盼藍拒染法檢測分選的SCA1HSC活性為96％99％。提示分選的SCA1細胞有較高純度和活性。2供體HSC連續(xù)移植后受體鼠脾結(jié)節(jié)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及外周血4

簡介：I781200糾博士學位論文2004屆人胎盤源間充質(zhì)樣千細胞生物學特性及移植治療腦出血的實驗研究EXPERIMENTALSTUDIESOFBIOLOGICALCHARACTEROFHUMANPLACENTADERIVEDMESENCHYMALLIKESTEMCELLSANDTRANSPLANTATIONININTRACEREBRALHEMORRHAGE研究生姓名指導教師姓名申請學位級別專業(yè)名稱研究方向論文提交時間藍登張學光匡堂監(jiān)內(nèi)科學王細胞廑壓薹趟2004年11月人胎盤問充質(zhì)樣干細胞生物學特性及移植治療腦出血的實驗研究中文摘要而用體外微孔隔離室穿越實驗觀察其對NPCS遷移的影響。結(jié)果1由胎盤分離培養(yǎng)得到的細胞具有BMSCS相似的形態(tài)和細胞表面標志細胞形態(tài)呈類似成纖維細胞，免疫熒光標記和流式細胞儀檢測顯示該群細胞表達CD29、CD44和CDL05SH2分子，但不表達CDILB、CD34、CD45、CDL9，CDL06、HLADR、VWF、CDLL7等表面抗原分子，免疫細胞化學顯示HPMSCS表達ASMA、I型和III型膠原，不表達MYSM；2HPMSCS表達神經(jīng)干細胞標志巢蛋白NESTIN，并可誘導表達神經(jīng)元標志抗原主要微管相關(guān)蛋白2MAJORMICROTUBULEASSOCIATEDPROTEIN2，MAP2、神經(jīng)元特異性烯醇化酶NEURONSPECIFICENOLASE，NSE、神經(jīng)微絲NEUROFILAMENT，NF、星型膠質(zhì)細胞標志抗原膠質(zhì)纖維酸性蛋白GLIALFIBRILAMENTACIDICPROTEIN，GFAP和少突膠質(zhì)細胞標志GALC等；3進一步的移植實驗發(fā)現(xiàn)，HPMSCS可跨越血腦屏障，并遷移到損傷側(cè)病灶周圍；同時EBST和BEDERSON評分結(jié)果提示，在移植后5天、14天，對側(cè)腦移植組、同側(cè)腦移植組和同側(cè)頸總動脈移植組明顯優(yōu)于自然恢復(fù)組；且28天時未見成瘤現(xiàn)象4／IPMSCS與HBMSCS相似，不表達一系列免疫分子HLADR、CD40、CD40L、CD28、CDS0和CD86。首次證實HPMSCS表達PDL1這一負性調(diào)節(jié)的共刺激分子，其與T淋巴細胞體外共培養(yǎng)，無明顯的促T細胞增殖反應(yīng)，提示其具有低免疫源性的特點；5HPMSCS可分泌高水平的SDF一1A，并可在體外趨化培養(yǎng)的神經(jīng)前體細胞；TNFATUMOURNECROSISFACTORA和GPL30信號均可上調(diào)NPC上功能性CXCR4的表達，從而增強SDFLD對表達CXCR4的NPCS的趨化能力。結(jié)論人胎盤源間充質(zhì)樣干細胞具有來源豐富、方便、免疫源性低、可塑性好和擴增能力強等特性，并能跨越血腦屏障并向病灶處定向遷移且未見成瘤現(xiàn)象，它能分泌SDF一1D并趨化NPCS，具備臨床應(yīng)用的潛在價值。移植入腦出血模型實驗結(jié)果表明其可促進動物的神經(jīng)功能缺損的修復(fù)。鑒此，HPMSCS符合移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病對移植種子細胞的要求，有望成為I艋床治療神經(jīng)系統(tǒng)病變的新的組織干細胞來源。關(guān)鍵詞胎盤問充質(zhì)干細胞神經(jīng)誘導趨化SDFLQCXCR4GPL30信號移植PDL一1研究生薛群指導教師張學光教授IL

簡介：該實驗的目的旨在通過對HS的成纖維細胞中SP的檢測以及觀察SP對其增殖、膠原代謝和形態(tài)學的影響探討SP對HS中成纖維細胞的作用和在HS形成中的作用機制為HS的防治拓展新的領(lǐng)域為此該研究應(yīng)用免疫組化法對HS成纖維細胞中的SP進行檢測并與正常皮膚做比較用細胞計數(shù)及MTT法研究SP對HS成纖維細胞增殖及活力的影響用H脯氨酸參入及SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測SP對HS成纖維細胞膠原代謝的影響并用光鏡和電鏡進行形態(tài)學的對比研究結(jié)論1HS成纖維細胞中SP的表達較正常皮膚顯著增加提示SP參與了HS的形成過程2SP可以促進HS成纖維細胞增殖和活力增加提示SP可直接作用成纖維細胞通過增強其數(shù)量和功能來促進HS的形成3SP增加H脯氨酸攝入降低膠原酶活性提示SP通過促進成纖維細胞的膠原合成增加和降低膠原酶活性抑制膠原降解兩條途徑破壞膠原代謝平衡導致HS的形成4P物質(zhì)可以直接影響HS成纖維細胞的超微結(jié)構(gòu)從而引起細胞功能的改變

簡介：關(guān)節(jié)軟骨損傷是關(guān)節(jié)外科常見的疾病軟骨由于其自身的解剖特點，損傷后很難自愈，這也是導致關(guān)節(jié)疾病和關(guān)節(jié)不穩(wěn)的主要原因。目前，關(guān)節(jié)鏡下盥洗術(shù)、微骨折技術(shù)、馬賽克移植術(shù)等治療方法遠期效果均不滿意，最終導致關(guān)節(jié)軟骨的退變和骨性關(guān)節(jié)炎。采用自體軟骨細胞移植AUTOLOGOUSCHONDROCYTEIMPLANTATION，ACI能夠?qū)崿F(xiàn)透明軟骨或透明樣軟骨修復(fù)，并取得較好的臨床療效。但ACI的缺點是供區(qū)出現(xiàn)新的缺損，需要二次手術(shù)，增加患者的痛苦。采用干細胞移植治療軟骨缺損是一個新興的治療手段，并認為間充質(zhì)干細胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS是最有希望的干細胞。MSCS是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的一類多能干細胞。目前，MSCS主要來源于骨髓，但獲得骨髓時造成患者的痛苦，且骨髓源性間充質(zhì)干細胞BONEMARROWSTROMALCELLS，BMSCS隨著年齡增長其細胞數(shù)量和擴增、分化能力出現(xiàn)明顯下降趨勢，故尋找一種能替代BMSCS，并可彌補其缺陷干細胞來源，已越來越受到各國學者的關(guān)注。胚胎干細胞EMBRYONICSTEMCELLS，ESCS尚存在定向分化和純化的技術(shù)障礙，且面臨眾多倫理、法律方面的問題，也有移植后形成畸胎瘤的報道，應(yīng)用受到一定限制。臍帶屬于胚胎外組織，是胎兒分娩后的廢棄物，組織來源廣泛，無倫理學限制。臍帶由臍帶外膜、臍動脈、臍靜脈以及血管周圍的黏蛋白樣組織，后者被稱為WHARTON膠。本研究目的為探討臍帶WHARTON膠中干細胞作為軟骨組織工程種子細胞的可行性，并從四個方面進行闡述。第一部分為人臍帶WHARTON膠中的基質(zhì)成分定性和定量分析的實驗研究；第二部分為人臍帶臍帶WHARTON膠中MSCS的分離、培養(yǎng)及生物學性狀的實驗研究；第三部分人臍帶WHARTON膠中MSCS向軟骨誘導培養(yǎng)的實驗研究；第四部分為細胞因子在人臍帶WHARTON膠間質(zhì)干細胞及其誘導產(chǎn)生的軟骨細胞的表達本研究從組織學、細胞學和組織化學、基因水平和蛋白表達水平探討臍帶WHARTON膠及WHARTON膠中MSCS的生物學特性和向軟骨誘導的可行性。方法1對臍帶組織進行組織化學和免疫組織化學染色，同時對WHARON膠進行葡萄糖胺聚糖GLYCOSAMINOGLYCANS，GAGS和總膠原含量的測定。2從手術(shù)臺取足月正常產(chǎn)健康產(chǎn)婦臍帶組織，去除臍血管和外膜組織，剝離WHARTON膠，采用膠原酶消化法和小組織塊兩種培養(yǎng)方法進行原代培養(yǎng)；對不同代的臍帶MSCS進行生長曲線、表面標志、流式細胞檢測表面標志、成纖維細胞集落生成單位COLONYFMINGUNITFIBROBLAST，CFUF、生長周期、凍存與復(fù)蘇及逆轉(zhuǎn)錄PCRREVERSETRANIONPOLYMERASECHAINRACTION，RTPCR分析，并進行番紅“O”染色、甲苯胺藍染色以及Ⅱ型膠原免疫組化染色進行軟骨特異性標志的鑒定。3在DMEM中加入10％FBS，10NGMLTGFΒ1，25NGMLBFGF，107M地塞米松作為誘導培養(yǎng)基。采用普通誘導培養(yǎng)、密集誘導培養(yǎng)、結(jié)合生物反應(yīng)器技術(shù)體外構(gòu)建無支架軟骨組織。成軟骨細胞表型通過番紅“O”染色、甲苯胺蘭染色以及Ⅱ型膠原免疫組織化學染色進行鑒別。GAGS定量檢測應(yīng)用二甲基亞甲蘭法，Ⅱ型膠原定量檢測通過ELISA法。4分別對人臍帶WHARTON膠MSCS、向軟骨誘導培養(yǎng)后的MSCS以及人軟骨細胞進行細胞因子抗體芯片檢測，比較人臍帶WHARTON膠MSCS軟骨誘導前后與正常人軟骨細胞細胞因子表達水平，為同種異體移植奠定實驗基礎(chǔ)結(jié)果1人臍帶組織富含膠原和GAGS，HE染色發(fā)現(xiàn)WHARTON膠中含有大量的間質(zhì)細胞；2采用酶消化法分離可以快速分離WHARTON膠中間質(zhì)細胞，并迅速貼壁生長；采用組織塊法培養(yǎng)原代培養(yǎng)時間較長。流式細胞檢測表明這些細胞表達CD44、CD105、CD271等MSCS標志物；不表達CD34、CD45等造血等標志物；HLAABC陽性表達，HLADPDQDR陰性表達。經(jīng)過凍存復(fù)蘇后免疫表型無顯著變化。3未進行軟骨誘導的細胞弱表達軟骨細胞標志，誘導后GAGS和Ⅱ型膠原定量檢測結(jié)果均顯著高于未誘導細胞。RTPCR結(jié)果顯示人臍帶WHARTON膠MSCS誘導前后均表達SOX9、COL2AL人臍帶WHARTON膠MSCS經(jīng)密集誘導培養(yǎng)后迅速結(jié)成膜狀；采用密集誘導培養(yǎng)結(jié)合生物反應(yīng)器培養(yǎng)體外可以構(gòu)建大塊無支架組織工程軟骨。4采用細胞因子芯片技術(shù)對人臍帶WHARTON膠MSCS、誘導后的軟骨細胞以及正常軟骨細胞進行比較分析發(fā)現(xiàn)，臍帶WHARTON膠干細胞以及誘導后的軟骨細胞在軟骨相關(guān)因子表達水平與軟骨細胞接近；同時還表達腫瘤抑制生長因子以及某些神經(jīng)生長因子。結(jié)論1人臍帶WHARTON膠富含膠原和GAGS，具有與軟骨組織相似的細胞外基質(zhì)；2人臍帶WHARTON膠中MSCS來源廣泛，無倫理學限制；臍帶MSCS具有間質(zhì)干細胞的特性，不向造血系分化；3臍帶MSCS具有前軟骨細胞的特性，有望作為軟骨組織工程的新型的種子細胞。臍帶MSCS密集誘導培養(yǎng)結(jié)合旋轉(zhuǎn)式細胞培養(yǎng)系統(tǒng)可體外構(gòu)建大塊無支架組織工程軟骨組織，有望作為新型體外構(gòu)建軟骨組織的方法。4人臍帶WHARTON膠MSCS以及誘導后的軟骨細胞具有與軟骨細胞相同的表達譜，表明其更為接近軟骨細胞，是較好的軟骨組織工程的種子細胞來源。

簡介：南方醫(yī)科大學2007級碩士學位論文鼻咽癌細胞系5．8F中SP亞群的檢測及其生物學功能的分析CHARACTERIZATIONANDFUNCTIONALANALYSESOFTHESIDEPOPULATIONOFTHENASOPHARYNGEALCANCERCELLLINE58F課題來源自選專業(yè)名稱學位申請人指導教師答辯委員會主席答辯委員會成員病理學焦鋒姚開泰教授曾木圣教授鐘雪云教授姚開泰教授曾木圣教授羅深秋教授李欣教授論文評閱人顧為望教授陳系古教授黃冰副教授2010年05月12日廣州碩士學位論文鼻咽癌細胞系58F中SP亞群的檢測及其生物學功能分析碩士研究生焦鋒指導教師姚開泰教授摘要背景腫瘤干細胞學說認為腫瘤組織中存在極少量腫瘤細胞，具有正常干細胞相似的特性自我更新的能力和多向分化的潛能，是腫瘤增殖生長、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的根源。什么是腫瘤干細胞目前認為腫瘤干細胞具有如下幾個特點1腫瘤組織中的極少量腫瘤細胞，具有強大的致瘤，轉(zhuǎn)移和耐藥能力。2無限的自我更新能力，腫瘤干細胞能夠產(chǎn)生與上一代完傘相同的子代細胞。3分化能力，腫瘤干細胞除了自我更新之外，還能夠產(chǎn)生不同表型的腫瘤細胞，能夠在體內(nèi)形成新的腫瘤。4具有與非致瘤細胞NONTUMORIGENICCELLS不同的表面標志。現(xiàn)今，人們已成功的從急性髓性白血病，多發(fā)性骨髓瘤，乳腺癌，腦腫瘤，非小細胞肺癌，黑色素瘤，前列腺痛和膀胱癌等多種類型的腫瘤患者組織中分離并培養(yǎng)出各自的腫瘤干細胞。這證明在腫瘤細胞群體中確實存在一類極少數(shù)的能使群體擴增的腫瘤干細胞。腫瘤干細胞現(xiàn)已成為腫瘤研究的熱點。目前，主要依據(jù)腫瘤細胞表面膜蛋白，粘附分子及受體的差異，通過一些假想的干細胞表面標記，如CDL33、CD44等分離和鑒定腫瘤干細胞。但是由于大部分的腫瘤尚缺乏特異性的表面標記，因此腫瘤干細胞的分離純化一直是長久以來亟待解決的難題之一。而側(cè)群SIDEPOPULATION，SP細胞作為一種不通過尋找特異性的表面標記，利用熒光染料外排的特性來富集腫瘤干細胞，作為研究腫瘤干細胞的方法是一種理想的途徑。SP細胞是指可將熒光染料HOECHST33342泵出細胞外，在一步法骨

簡介：點擊查看更多宿主細胞對LPS刺激的應(yīng)答機制中金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域和解整合素結(jié)構(gòu)域的表達及其分子生物學意義.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第四軍醫(yī)大學碩士學位論文人舌鱗狀細胞癌脊髓轉(zhuǎn)移細胞系TS的建立和生物學特性姓名朱曉英申請學位級別碩士專業(yè)口腔基礎(chǔ)醫(yī)學指導教師吳軍正200351第四軍醫(yī)太學頑士學位論文英文縮略語表英文縮寫英文全名ABCAVIDINBIO_TINPEROXIDASECOMPLEXSABCS訂EPTAVIDINBIOTINCOMPLEXALPALKALINEPHASPH01啞SEDTDOUBLINGTIMEFBSFATALBOVINESCFILMHRPHORSEEADISHPCMXIDASEDAB3，3DIAMINOBCNZIDINEFCMFLOWC舛鯽髓YIHCIMMUNOHISTOCHEMISTRYNMTM?？鰣”。1。甜。“MI。?！啊盤CPBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPCNAPROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGENSCCSQUAMOUSCELLCARCINOMAMMPMATRIXMETALLOPROTEINASE中譯名抗生素一生物素一過氧化物酶復(fù)合物鏈酶親和素過氧化物酶復(fù)合物堿性磷酸酶群體倍增時問胎牛血清辣掇過氧化物酶3，3二胺基聯(lián)苯胺流式細胞僅免疫組織化學透射電鏡磷酸鹽緩沖液增殖細胞棱抗原鱗狀細胞癌基質(zhì)金屬蛋白酶

簡介：目的調(diào)查研究寧夏地區(qū)綿羊中的BDV的自然感染狀況。對陽性檢測樣本的核苷酸序列進行連接測序，比較分析BDVP24基因序列，建立病毒株的種系發(fā)生樹，闡明其在寧夏地區(qū)綿羊中的自然感染情況及其可能的種系來源；應(yīng)用轉(zhuǎn)染的OL作進一步的病毒核蛋白的細胞內(nèi)定位研究，初步探討病毒的感染和發(fā)病機制。方法應(yīng)用巢式逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCRFQNRTPCR技術(shù)檢測中國寧夏地區(qū)綿羊腦組織和PBMC中的BDVP24和P40基因片段；對檢測BDVP24和P40基因片段均為陽性標本的P24基因片段進行連接、克隆、測序，并應(yīng)用EMBL、DNASP40和MEGA40軟件分析核苷酸和氨基酸序列同源性相似度，構(gòu)建NEIGHBJOINING基因系統(tǒng)發(fā)生樹并分析病毒感染的可能來源；對轉(zhuǎn)染的OL應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)和WESTERNBLOT的方法觀察病毒核蛋白在細胞內(nèi)的表達定位。結(jié)果在寧夏地區(qū)163只綿羊腦組織和710只綿羊的PBMC中檢測到BDVP24和P40陽性基因片段，檢出率分別為368％6163和127％9710；對15例陽性檢出標本進行連接、克隆、測序，連同14例前期檢測序列基因聚合分析顯示核酸之間的同源相似度為965％～100％，氨基酸的同源相似度為953％～100％。與德國馬源性標準株HE80同源相似度較高。構(gòu)建基因的系統(tǒng)發(fā)生樹發(fā)現(xiàn)寧夏的VE患者、抑郁癥患者、綿羊和同德國馬、綿羊、奧地利馬都各自形成了獨立的支系，其余陽性檢出序列形成混合支系，其中寧夏的VE患者、牛、綿羊同德國的馬、日本的綿羊形成了‘德國中國寧夏日本’的混合支系；在轉(zhuǎn)染BDVP40基因片段的熒光表達質(zhì)粒的OL內(nèi)激光共聚焦顯微鏡提示核蛋白存在于細胞漿和細胞膜中；WESTERNBLOT的結(jié)果顯示在細胞膜蛋白中存在核蛋白，而在細胞漿中未檢測到該蛋白。結(jié)論中國寧夏地區(qū)綿羊中可能存在BDV的自然感染；寧夏地區(qū)人和動物BDV的感染存在區(qū)域源性BDV獨立株和國外傳入基因保守株的多源性；在轉(zhuǎn)染的OL內(nèi)穩(wěn)定表達了BDV核蛋白，并將其定位在細胞的結(jié)構(gòu)蛋白中，尤其在細胞膜中含量更為豐富，推斷其可能在細胞的信號轉(zhuǎn)導或介導病毒感染入胞過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文糖皮質(zhì)激素和TGFΒ1對人成骨肉瘤細胞RHOB的誘導作用、機制及生物學意義姓名刁飛申請學位級別博士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師盧建20100501第二軍醫(yī)大學博士學位論文者聯(lián)合作用時促進粘附的效果明顯大于兩者單獨作用的效果；對其機制的研究表明DEX在PC3細胞和HO8910細胞中都可以上調(diào)TGFPL的II型受體的表達，并增強TGF131的信號轉(zhuǎn)導，表明兩條通路間的確存在相互作用。但是對于兩條通路間協(xié)同作用的很多細節(jié)以及共同影響的靶基因的表達，我們至今了解的不多。在前期研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)DEX能夠上調(diào)人卵巢癌HO8910細胞RHOB的表達，RHOB的上調(diào)參與了DEX對HO8910細胞的增殖抑制作用，并發(fā)現(xiàn)DEX能明顯抑制骨肉瘤細胞的增殖、誘導其分化，但是RHOB是否參與了DEX對骨肉瘤細胞的上述作用還不清楚。此外，有研究表明，TGF131能夠抑制MG63等骨細胞的增殖。新近還有報道TGF131在31“3成纖維細胞和HACAT角質(zhì)細胞中能夠上調(diào)RHOB的表達。因此TGF131對MG63細胞RIMB的表達是否有影響，以及RHOB在骨肉瘤細胞中的作用也是令人感興趣的問題。本實驗以骨肉瘤細胞為模型，首先研究了DEX對人成骨肉瘤MG63和HOS8603細胞RHOB的誘導作用，在證實DEX可以上調(diào)上述細胞RHOB之后，進一步研究了DEX上調(diào)MG63細胞RHOB的分子機制以及RHOB在DEX調(diào)節(jié)MG63細胞增殖、分化和粘附中可能的作用。在此基礎(chǔ)上，我們又研究了TGF13對RHOB表達的影響及其可能的機制，以及DEX和TGFBL聯(lián)合作用對人成骨肉瘤MG63細胞RHOB的誘導作用和對MG63細胞增殖與粘附的影響。本課題有助于進一步闡明RHOB的作用和調(diào)節(jié)機制，以及糖皮質(zhì)激素和TGFP對骨細胞和骨肉瘤細胞的作用機制。一、糖皮質(zhì)激素對人成骨肉瘤細胞RHOB的誘導作用、機制及生物學意義一DEX對人成骨肉瘤細胞RHOB表達的影響我們選擇MG63和HOS8603兩種人成骨肉瘤細胞作為研究對象，用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT方法檢測了DEX對RHOB表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DEX能夠上調(diào)成骨肉瘤細胞剛10B的表達。二DEX誘導MG63細胞RHOB表達的機制研究1DEX上調(diào)RHOB的表達通過GR介導用GR的拮抗劑RU486預(yù)處理MG63細胞，再加DEX處理，分別用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT方法檢測RHOBMRNA和蛋白水平的表達情況。發(fā)現(xiàn)RU486幾乎完全阻斷DEX對RHOB的誘導。表明DEX對RHOB表達的誘導作用是由GR受體介導的。ZDEX不能誘導含有人RHOB啟動子序列1765／111的報告基因的表達為明確DEX對RHOB的誘導作用是否發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，我們將含有人RHOB基因部分啟動子的序列1765／111的熒光素酶報告基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MG63細胞，再用DEX處理，并利用報告基因技術(shù)來進行分析。結(jié)果表明在RHOB啟動子的這段長19KB的區(qū)域1765／111內(nèi)沒有功能性的GRE存在。用生物信息學方法檢索了人RHOB基

簡介：揚州大學碩士學位論文MIR21對宮頸癌HELA細胞生物學特性的影響姓名梅佳申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師李國利賈筱琴20100501揚州大學碩士學位論文24、TRANSWELL侵襲實驗結(jié)果顯示MIR21上調(diào)組穿膜細胞數(shù)為21624MIR一21下調(diào)組穿膜細胞數(shù)為536；MIRNA前體陰性對照組穿膜細胞數(shù)為12215MIRNA抑制劑陰性對照組穿膜細胞數(shù)為11510；正常對照組穿膜細胞數(shù)為11514。MIR一2L上調(diào)組與對照組比較，穿摸細胞數(shù)明顯增多，差異具有顯著性P001，而MIR21下調(diào)組與對照組比較，穿膜細胞數(shù)明顯減少，差異具有顯著性P001。結(jié)論L、MIR2L前體能夠有效上調(diào)MIR21在HELA細胞中的表達水平，而MIR21抑制劑能夠有效下調(diào)MIR2L在HELA細胞中的表達水平。2、上調(diào)MIR21在HELA細胞中的表達可以促進細胞的增殖活性，對細胞的遷移，侵襲能力有明顯的增強作用；下調(diào)MIR21在HELA細胞中的表達則抑制細胞的增殖，同時減弱細胞的遷移及侵襲能力。3、MIR21與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。關(guān)鍵詞宮頸癌；HELA細胞；RNIR21細胞遷移及侵襲；

簡介：江蘇大學碩士學位論文VEGF對耐藥白血病細胞生物學特性的影響姓名方莉莉申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學指導教師許文林20090604江蘇大學碩士學位論文檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細胞的凋亡情況，采用MTT法檢測轉(zhuǎn)染前后阿霉素對耐藥白血病細胞的半數(shù)抑制濃度50％INHIBITINGCONCENTRATION，IC50的變化，計算其增敏倍數(shù)，RTPCR、流式細胞術(shù)和WESTERNBLOTTING檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細胞耐藥相關(guān)基因MDRL、MRPL、TOPOII及其蛋白的表達變化，采用胞內(nèi)羅丹明123RH0123潴留試驗檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細胞跨膜轉(zhuǎn)運蛋白PGP及MRPL的功能狀態(tài)，采用免疫印跡法檢測轉(zhuǎn)染前后白血病細胞MAPK／ERK和P13K／AKT信號傳導通路的活化水平。結(jié)果1與敏感株K562細胞比較，耐藥株K562／A02細胞VEGF基因的表達水平更高，兩組細胞VEGFMRNA與13ACTIN的灰度比值分別為05180055、08140073T6845，P0001，具有顯著的統(tǒng)計學差異；并且免疫印跡法顯示類似的結(jié)果，K562／A02細胞VEGF蛋白的表達水平顯著高于K562細胞。通過脂質(zhì)體介導的方法將隨機片段HK和VEGFSHRNA轉(zhuǎn)染入K562／A02細胞，共獲5組細胞，依次為K562／A02、K562／A02HK、K562／A02VEGFSHRNAL、K562／A02VEGFSHRNA2和K562／A02VEGFSHRNA3；轉(zhuǎn)染24H、48H及72H后，RTPCR結(jié)果顯示不同時間點隨機片段HK組和未轉(zhuǎn)染組細胞VEGFMRNA的表達均無差異，而轉(zhuǎn)染VEGFSHRNA的各組細胞VEGFMRNA的表達水平均低于HK組，其中轉(zhuǎn)染VEGFSHRNA2和VEGFSHRNA3組與HK組比較均有統(tǒng)計學差異PO05，并且轉(zhuǎn)染不同時間VEGFSHRNA3對VEGF的抑制率分別為29611％、459土16％和432415％；WESTERNBLOTTING結(jié)果也顯示轉(zhuǎn)染24H、48H及U