簡介：目的該課題研究了AGEΒM對滑膜細胞的病理生物學(xué)作用為闡明DRA時骨、關(guān)節(jié)損害機制為臨床預(yù)防和治療DRA提供理論依據(jù)方法分離線性化并在體外培養(yǎng)人關(guān)節(jié)滑膜細胞用放射性配體受體結(jié)合分析法檢測細胞表面的晚期糖基化終產(chǎn)物結(jié)合蛋白的表達并分析TNFΑ、IL1Β和AGEHSA對其表達的調(diào)節(jié)用ELISA法檢測AGEM刺激下HSCS培養(yǎng)上清的MCP1以及抗RAGE抗體ΑRAGE對其抑制作用用NTHERNBLOT法測定HSCSMCP1MRNA的表達用雙室法行單核細胞趨化實驗用ELISA法檢測HSCS培養(yǎng)上清TNFΑ和IL1Β以及ΑRAGE對其抑制作用用放射免疫測定法檢測HSCS培養(yǎng)上清的透明質(zhì)酸HA、層粘蛋白和Ⅲ型前膠原用WESTERNBLOT法測定分泌的HA分子量結(jié)論我們首次證實人類關(guān)節(jié)固有細胞滑膜細胞表達對AGE特異的受體RAGE介導(dǎo)了AGE修飾蛋白引起的關(guān)節(jié)滑膜細胞的病理生物學(xué)改變因此DRA時淀粉樣沉積中的AGEΒM能夠通過影響關(guān)節(jié)組織細胞的功能直接引起骨、關(guān)節(jié)組織的炎癥反應(yīng)和損傷

簡介：課題背景OA是醫(yī)學(xué)臨床最常見的骨關(guān)節(jié)疾病，為目前導(dǎo)致中老年人殘障的第二大病因僅次于心腦血管疾病。OA分為原發(fā)性特發(fā)性和繼發(fā)性兩類。研究表明，原發(fā)性O(shè)A是關(guān)節(jié)軟骨損傷與修復(fù)失衡所致；MSCS具有自我更新和多向分化潛能，在一定條件下被激活后，可大量增殖并向成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等方向分化，在維持組織自身穩(wěn)定和修復(fù)病變組織中起著至關(guān)重要的作用；BFGF和TGFΒ1具有顯著的促MSCS增殖的作用；核結(jié)合蛋白SOX6和SOX9是誘導(dǎo)MSCS成軟骨分化相關(guān)基因表達的必要因子，是成軟骨分化的關(guān)鍵開關(guān)。新近研究發(fā)現(xiàn)正常入和原發(fā)性O(shè)A患者關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)存在具有MSCS特性的MPCS，且原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MPCS的數(shù)量較正常關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MPCS增多。而原發(fā)性O(shè)A和正常人關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MPCS的生長和增殖特性及其成軟骨、成骨和成脂分化能力，以及在原發(fā)性O(shè)A發(fā)生和發(fā)展中起的作用如何；BFGF和TGFPI對關(guān)節(jié)軟骨MPCS的促增殖作用，SOX6和SOX9對MPCS的成軟骨分化作用，目前尚未見相關(guān)研究報道。因此，觀察比較原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨MPCS的生長和增殖特性及其成軟骨、成骨和成脂分化能力及其在關(guān)節(jié)軟骨退變及原發(fā)性O(shè)A發(fā)生和發(fā)展中的作用，可為探討關(guān)節(jié)軟骨退變及原發(fā)性O(shè)A發(fā)病的機制提供新思路同時觀察相關(guān)生物因子對OA關(guān)節(jié)軟骨MPCS的促增殖和成軟骨分化的作用，可為通過調(diào)控關(guān)節(jié)軟骨MPCS以防治原發(fā)性O(shè)A提供理論依據(jù)。目的觀察比較原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨MPCS的生長和增殖特性及其成軟骨、成骨和成脂分化能力，明確關(guān)節(jié)軟骨MPCS在原發(fā)性O(shè)A發(fā)病中的重要作用；觀察BFGF和TGFΒ1對原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS的促增殖作用，以及SOX6和SOX9對其MPCS的成軟骨分化作用，為通過調(diào)控關(guān)節(jié)軟骨MPCS以防治原發(fā)性O(shè)A提供理論依據(jù)。方法1采用改良酶消化分離法觀察比較原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨單位濕重的細胞含量。采用免疫磁珠法，以CD105、CD166為標志物，分別于原代培養(yǎng)原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨細胞中，分選其關(guān)節(jié)軟骨MPCS，并分別計算其陽性細胞比率和存活率，流式細胞儀檢測分選細胞表面的分子表型，對比觀察原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨MPCS的細胞數(shù)量、生長特性、細胞增殖的變化。2觀察原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨MPCS成軟骨微團培養(yǎng)誘導(dǎo)分化后的細胞形態(tài)變化，TB、II型膠原、AGGRECAN染色，GAG含量及II型膠原MRNA表達；成骨單層傳代培養(yǎng)誘導(dǎo)分化后細胞形態(tài)變化，鈣結(jié)節(jié)染色，ALP活性及BGPMRNA表達；成脂單層傳代培養(yǎng)誘導(dǎo)分化后細胞形態(tài)變化，油紅染色，油紅染色陽性細胞比率及TG含量。3采用MTT法測定不同濃度BFGF和TGFΒ1單獨或聯(lián)合作用下對原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS的增殖作用。分別以PADTRACKCMVSOX6、SOX9腺病毒穿梭質(zhì)粒構(gòu)建SOX6、SOX9基因，并感染原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS，比較基因感染組和未感染組成軟骨誘導(dǎo)分化后，TB、Ⅱ型膠原以及II型膠原MRNA表達的變化。結(jié)果1原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨單位濕重的細胞含量為155±016106個細胞G僅為正常人關(guān)節(jié)軟骨細胞數(shù)357±018的413％。原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨細胞中的CD105細胞比率分別為957±116、952±118％，CD166為68±026、66±019，CD105CD166為45±009、46±007，二者之間均無統(tǒng)計學(xué)差異P值均005；分選細胞存活率為9395％；經(jīng)流式細胞儀檢測，其分選原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨MPCS的CD105分別為965±112、955±116，CD166為968±126、975±131，CD105CD166細胞分別為935±109、946±113，而CD34、CD45細胞僅為05±0012、04±001及08±0014、06±0011。與正常人關(guān)節(jié)軟骨MPCS比較，原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS的生長速度和增殖速率較快。2原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨MPCS成軟骨誘導(dǎo)分化后細胞TB、Ⅱ型膠原、AGGRECAN染色均呈陽性，原發(fā)性O(shè)A者GAG含量減少及II型膠原MRNA表達減弱P005；BFGFLONGMLTGFΒ10NGML聯(lián)合作用時，對原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS具有明顯促增殖作用P005。SOX6和SOX9能夠分別穩(wěn)定感染OA關(guān)節(jié)軟骨MPCS；經(jīng)二者分別感染的關(guān)節(jié)軟骨MPCS成軟骨誘導(dǎo)分化后，其TB染色、Ⅱ型膠原染色呈強陽性表達，未基因感染細胞為弱陽性著色；SOX6基因感染原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS的Ⅱ型膠原MRNA表達量為未基因感染細胞的38倍P001，SOX9基因為未感染細胞的515倍P001。結(jié)論1原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)的細胞含量顯著少于正常人關(guān)節(jié)軟骨。原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨存在MPCS；相同數(shù)量的原發(fā)性O(shè)A及正常人關(guān)節(jié)軟骨中分選出的關(guān)節(jié)軟骨MPCS數(shù)量相同。原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS的生長與增殖較正常入關(guān)節(jié)軟骨MPCS活躍。據(jù)此推測單位體積關(guān)節(jié)軟骨中，原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS數(shù)量可能明顯少于正常人關(guān)節(jié)軟骨，并提示關(guān)節(jié)軟骨MPCS在原發(fā)性O(shè)A病理過程中具有重要作用。2關(guān)節(jié)軟骨MPCS經(jīng)成軟骨、成骨及成脂誘導(dǎo)后均能分化為具有相應(yīng)功能細胞特性的分化細胞；原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS成軟骨和成骨分化能力降低，而成脂分化能力增加，提示原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS分化功能出現(xiàn)異常，OA關(guān)節(jié)軟骨細胞對軟骨損傷修復(fù)能力降低。3BFGF、TGFΒ1對原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS增殖具有重要作用，不同濃度的BFGF、TGFΒ1及BFGFTGFΒ1促增殖作用不同。構(gòu)建的SOX6、SOX9基因序列與基因庫報道序列完全一致；SOX6和SOX9能穩(wěn)定感染原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS，并顯著促進感染細胞成軟骨分化。提示通過適宜濃度的BFGF、TGFΒ1對原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨MPCS的作用及SOX6和SOX9基因感染，可能具有促進原發(fā)性O(shè)A關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的作用。

簡介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名基壟逛．一E1期坐堡Z丕也蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、中國社科院文獻信息情報中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬方數(shù)據(jù)電子出版社、中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文囤論文作者簽名圣速EL期趨剛I2立導(dǎo)師簽名趔紐乞EL期迦蘭』§F曼里

簡介：目的該研究通過DC呈遞自體抗原途徑體外誘導(dǎo)MM患者CTL并探討其免疫生物學(xué)特征為臨床過繼免疫治療MM打下基礎(chǔ)研究內(nèi)容分為四個部分一MM患者外周血DC的分離、培養(yǎng)和鑒定二MM患者外周血CTL的誘導(dǎo)INVITRO三MM患者CTL細胞KIR表達研究四MM患者CTL體內(nèi)免疫效能觀察INVITRO結(jié)論一可用體外無血清培養(yǎng)體系從MM患者外周血中獲取足夠數(shù)量和功能正常的DC用于MM患者臨床治療研究二從MM患者外周血獲取的DC可以有效地呈遞自體抗原并體外激活T細胞增殖通過該途徑培養(yǎng)擴增抗原特異性CTL細胞為臨床過繼免疫治療MM提供了一嶄新手段三CTL細胞表達KIR的研究豐富了KIRMHC結(jié)合這樣一個抑制性信號系統(tǒng)對于T細胞功能影響的認識研究揭示KIR表達抑制CTL體外殺瘤活性影響其細胞因子分泌并在激發(fā)后誘導(dǎo)CTL細胞凋亡四SCID荷骨髓瘤小鼠模型試驗證實KIRCTL較KIRCTL有更強的免疫保護和免疫治療效能提示KIRCTL有臨床應(yīng)用潛能同時提示臨床設(shè)計免疫治療方案時必須合理考慮KIR表達因素以增強療效

簡介：第一部分RMSCS生物學(xué)特性的研究骨髓中含有兩大類細胞群一個是能產(chǎn)生紅細胞、血小板、單核細胞、粒細胞的造血干細胞HEMATOPOIETICSTEMCELLSHSCS它為循環(huán)血液提供前體細胞或稱為祖細胞這是人所共知的另一個就是同樣符合干細胞定義的非造血性干細胞我們對MSCS的分離培養(yǎng)條件下的生長特性及表面抗原標志進行了觀察研究第二部分RMSCS體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細胞我們研究MSCS在體外培養(yǎng)中在多種誘導(dǎo)因子的作用下MSCS向神經(jīng)細分化的能力對MSCS34代培養(yǎng)細胞分別以3種神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)光學(xué)顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化誘導(dǎo)培養(yǎng)6天后細胞進行神經(jīng)元特導(dǎo)抗體免疫組化染色鑒定了解細胞分化的情況記數(shù)MSCS分化為神經(jīng)元的比率第三部分RMSCS靜脈移植治療大鼠腦損傷進行神經(jīng)移植的主要障礙在于有限的供體組織異體胚胎胎兒神經(jīng)干細胞是一個理想的移植組織但采集細胞及移植時間窗較短倫理及法律原因也阻礙了胚胎組織用來進行廣泛的神經(jīng)移植MSCS是一個潛在的能應(yīng)用于移植并能誘導(dǎo)內(nèi)源性干細胞增殖的細胞使用自體的MSCS進行移植避免了外源物質(zhì)的進入也避免了倫理學(xué)法律方面的障礙并可顯著減少免疫抑制劑的應(yīng)用我們將大鼠MSCS經(jīng)尾靜脈注射移植入腦創(chuàng)傷大鼠了解骨髓源性細胞有腦內(nèi)的遷移情況以及對大鼠神經(jīng)運動功能的影響

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簡介：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文急性髓系白血病細胞中IL6的生物學(xué)效應(yīng)與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制姓名張紀巖申請學(xué)位級別博士專業(yè)分子免疫學(xué)指導(dǎo)教師沈倍奮200061摘要AML細胞中IL6的生物學(xué)效應(yīng)與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制胞方向分化。而在生長受IL6促進的靶細胞7TDL、TFL中，IL6對RAS／MAPK通路的激活水平明顯強于受IL6抑制的靶細胞，提示RAS／MAPK通路轉(zhuǎn)導(dǎo)IL6的促增殖信號。采用STAT3反義寡核苷酸ASODN減弱M1細胞中STAT3的激活水平發(fā)現(xiàn)，IL6的增殖抑制效應(yīng)受到顯著的拮抗，表明JAKSTAT3通路轉(zhuǎn)導(dǎo)增殖抑制信號。為進一步分析JAKSN虹3通路的功能，我們又構(gòu)建了SN盯3反義表達載體并通過G418篩選得到了STAT3反義EDNA穩(wěn)定表達的M1細胞亞株。STAT3反義EDNA顯著拮抗IL6對M1細胞的增殖抑制效應(yīng)與分化誘導(dǎo)效應(yīng)，證實了STAT3的激活為IL一6誘導(dǎo)AML細胞生長停止、向巨噬細胞方向分化所必需。STAT3反義EDNA加強IL一6誘導(dǎo)的M1細胞凋亡，說明IL6的凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)不是STAT3轉(zhuǎn)導(dǎo)的，相反，STAT3在一定程度上拮抗這種效應(yīng)，STAT3在IL一6對AML細胞的生物學(xué)效應(yīng)中發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)的作用。為探討RAS／MAPK通路的功能，我們采用NFIL6ASODN及RAS／MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的特異性抑制劑PD098059阻斷了M1細胞中RAS／MAPK通路的激活。NFIL6ASODN與PD098059均加強IL6的增殖抑制作用，表明RAS／MAPK通路轉(zhuǎn)導(dǎo)促增殖信號。在分化調(diào)控方面，PD098059不影響IL6誘導(dǎo)的M1細胞形態(tài)改變、酸性醋酸酯酶活性增強和CDLLB表達上調(diào)，但可顯著減弱IL6誘導(dǎo)的M1細胞貼附性增強和吞噬功能的獲得，說明RAS／MAPK通路的組成型激活及誘導(dǎo)激活對于分化了的AML細胞擁有完整功能是必不可少的。PD098059還增強IL6誘導(dǎo)的M1細胞凋亡，說明具有組成型激活的RAS／MAPK通路在維持細胞生存方面有重要意義。以■研究結(jié)果表明，在增殖調(diào)控方面JAKSTAT3通路與RAS／MAPK通路是相互拮抗的；在分化調(diào)控方面，二者是相互協(xié)同的在凋亡調(diào)控方面，二者都有維持細胞生存的作用。提示IL6在AML細胞中通過其它信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)凋亡。要闡明IL6誘導(dǎo)M1細胞凋亡的機制，還需要進一步的研究。關(guān)鍵詞白細胞介素6；急性髓系白血病；STAT3；RAS／MAPK

簡介：該研究采用兔大段骨缺損動物模型探討骨髓MSCS作為種子細胞在骨組織工程領(lǐng)域中的應(yīng)用參考人骨髓MSCS分離培養(yǎng)方法我們將兔骨髓細胞經(jīng)過密度為1073GML的PERCOLL分離液分離骨髓單個核細胞用含10﹪篩選血清的低糖DMEM進行培養(yǎng)隨后的實驗結(jié)果證明用這種方法分離的MSCS的形態(tài)與人骨髓MSCS相似呈紡錘型貼壁生長體外培養(yǎng)細胞倍增時間為20小時左右說明其增殖較快組織化學(xué)染色結(jié)果顯示所分離的兔MSCS細胞化學(xué)特征為糖原強陽性PAS部分細胞堿性磷酸酶ALP陽性陽性率約5﹪蘇丹黑陰性SB酸性醋酸酯酶ANAE弱陽性非特異性脂酶NSE陰性細胞周期分析表明G0G1、S和G2M所占比例分別為8456﹪326﹪和1218﹪結(jié)果提示體外培養(yǎng)的MSCS具有典型的干細胞增殖特點即只有少數(shù)細胞處于活躍的增殖期大部分的細胞處于靜息期我們通過合適的方法制成聚DL乳酸磷酸三鈣I型膠原復(fù)合物其性能上互相取長補短將TCP引入聚DL乳酸可改善聚DL乳酸機械性能差降解速度快骨結(jié)合力弱等缺點將I型膠原引入基質(zhì)材料可顯著提高材料與組織細胞的相互作用利于細胞黏附該研究所分離的兔BMSCS接種于PDLLATCP后的掃描電鏡結(jié)果顯示MSCS不僅黏附于材料表面而且能夠移行入三維支架材料內(nèi)部說明我們所設(shè)計材料的孔徑及孔隙率較為合適在移植于動物體內(nèi)后這種結(jié)構(gòu)可提供寬大的表面積和空間利于細胞粘附生長細胞外基質(zhì)沉積營養(yǎng)和氧氣進入代謝物產(chǎn)出也有利于血管和神經(jīng)長入在動物體內(nèi)骨缺損修復(fù)研究部分該研究采用了大段骨缺損模型15CM同時設(shè)計了三個實驗組A組為材料復(fù)合細胞組B組只用材料而不加細胞C組為空白對照組即無細胞無材料組為進一步研究MSCS在體內(nèi)的成骨過程我們對MSCS體內(nèi)骨組織修復(fù)過程進行了連續(xù)的組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)2周時細胞復(fù)合材料組即有成骨細胞形成及胞外基質(zhì)分泌8周時可見新生血管形成12周時出現(xiàn)部分類骨結(jié)構(gòu)電鏡切片觀察也獲得了相近的結(jié)果提示MSCS復(fù)合生物材料后可在損傷局部自發(fā)啟動體內(nèi)成骨過程和骨折等病理狀態(tài)下的骨修復(fù)相似但成骨速度遠較生理過程緩慢而且在觀察的時間段內(nèi)未出現(xiàn)完整的骨缺損修復(fù)總之該實驗建立了一種簡便可行的兔MSCS培養(yǎng)方法細胞增殖能力強并可定向分化為成骨及脂肪細胞利用大段骨缺損模型的研究發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的MSCS接種PDLLATCPI型膠原復(fù)合材料構(gòu)建的人工骨組織能加速骨缺損的修復(fù)實驗為MSCS的臨床應(yīng)用提供了較為詳細的信息

簡介：點擊查看更多抗轉(zhuǎn)化生長因子β1核酶對肝星狀細胞生物學(xué)活性影響的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：碩士學(xué)位論文論文題目聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵磁性納米顆粒對SHI1細胞生物學(xué)特性的影響及體內(nèi)初步成像研究生姓名陳曉麗指導(dǎo)教師姓名陳子興專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）研究方向白血病的基礎(chǔ)與臨床研究論文提交日期20120315聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵磁性納米顆粒對SHI1細胞生物學(xué)特性的影響及體內(nèi)初步成像中文摘要I聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵磁性納米顆粒對SHI1細胞生物學(xué)特性的影響及體內(nèi)初步成像中文摘要一、聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵磁性納米顆粒對SHI1細胞生物學(xué)特性的影響目的目的初步探討聚乙烯亞胺包被的四氧化三鐵（PEIFE3O4）磁性納米顆粒對白血病細胞株SHI1的生物學(xué)特性的影響，探究磁共振細胞影像技術(shù)跟蹤細胞生物學(xué)行為的可行性。方法方法（1）、以人急性單核細胞白血病細胞株SHI1為對象，用透射電鏡觀察PEIFE3O4磁性納米顆粒能否被細胞內(nèi)吞；（2）、用電感耦合等離子發(fā)射光譜儀及普魯士藍染色觀察細胞納米顆粒載量的影響因素；（3）、用CCK8法檢測PEIFE3O4磁性納米顆粒對SHI1細胞增殖的影響；用流式細胞術(shù)（FCM）檢測PEIFE3O4磁性納米顆粒對細胞分化、凋亡的影響；以甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)法檢測PEIFE3O4磁性納米顆粒對細胞集落形成能力的影響；（4）、以TRANSWELL跨膜實驗檢測PEIFE3O4磁性納米顆粒對SHI1細胞侵襲能力的影響；以熒光實時定量PCR檢測PEIFE3O4磁性納米顆粒對SHI1細胞MMP2、MMP9、CD44、CXCR4、TIMP1、TIMP2MRNA表達水平的影響；以未經(jīng)PEIFE3O4磁性納米顆粒處理的SHI1細胞作為對照組。結(jié)果結(jié)果（1）、PEIFE3O4磁性納米顆粒能成功被SHI1細胞內(nèi)吞；（2）、細胞內(nèi)磁性納米顆粒載量與其起始濃度及與細胞共培養(yǎng)的時間呈正相關(guān)，隨細胞分裂傳代而減少。（3）、以5100ΜGFEMLPEIFE3O4處理細胞，60100ΜGFEML組對細胞的抑制率高于550ΜGFEML組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P005）；以0、20、50ΜGFEMLPEIFE3O4處理24H后的SHI1細胞的集落形成率，在各組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P005）；（4）、以050ΜGFEMLPEIFE3O4處理SHI1細胞24H，細胞凋亡率隨PEIFE3O4濃度的增加而增高（P005），實驗組SHI1細胞侵襲能力較對照組顯著下降（P005），測量標記細胞的MMP2、MMP9、CD44、

簡介：研究目的1復(fù)蘇，傳代培養(yǎng)羊水干細胞2對其生物學(xué)特性及向成骨細胞定向分化經(jīng)行研究3沿尾靜脈注射AFS，對其治療大鼠骨質(zhì)疏松（OP）效果進行評價材料和方法1選取不同代數(shù)的AFS，復(fù)蘇，傳代培養(yǎng)。2觀察細胞的形態(tài)學(xué)特性，描述體外培養(yǎng)的AFS的生物學(xué)特性3應(yīng)用誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)AFS定向分化為成骨細胞，并通過一系列方法（細胞形態(tài)，細胞堿性磷酸酶染色，Ⅰ型膠原蛋白測定等）對分化后的細胞進行鑒定4AFS對大鼠OP治療效果的評價采用同齡SD大鼠，隨機分為4組，A組正常組，B組模型組，C組制造模型并且一次性注入AFS，D組制造模型并且不同時間兩次注入AFS。除A組灌胃用等量生理鹽水，其余各組連續(xù)14天灌胃RA，同時，C組于灌胃第14天尾靜脈注射AFS，D組于灌胃第7天及第14天尾靜脈注射AFS。實驗過程觀察生活習(xí)性及體重變化，骨密度測定，血清骨代謝指標檢測定，測量股骨橫斷面外徑（B）及濕重，骨微觀結(jié)構(gòu)的觀察。結(jié)果1成功復(fù)蘇AFS，誘導(dǎo)分化細胞具有成骨細胞特性2AFS對大鼠骨質(zhì)疏松治療效果的評價21股骨骨密度（BMD）測定結(jié)果顯示D組實驗前后差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P005），說明AFS對骨質(zhì)疏松具有潛在緩解效果22血清生化指標檢測結(jié)果顯示D組血鈣，血磷，TRACP實驗前后均無統(tǒng)計學(xué)差異（P005），ALP實驗后較前明顯增加，說明AFS對骨質(zhì)疏松鈣鹽沉積具有潛在治療效果23D組大鼠股骨濕重實驗前后無統(tǒng)計學(xué)差異，說明AFS對骨質(zhì)疏松的修復(fù)作用表現(xiàn)在股骨重量上24骨薄片GOLDNER三色法染色顯示D組可見部分膠原恢復(fù)到與A組骨膠原相似的結(jié)構(gòu)結(jié)論1成功復(fù)蘇并傳代不同代數(shù)的AFS，證明其具有定向誘導(dǎo)分化的能力2RA具有致骨質(zhì)疏松作用，成功制造出OP模型3AFS可以抑制血鈣濃度升高，增加鈣鹽沉積，減少TRACP的生成，減少骨吸收，從而增加骨量。4AFS對OP具有潛在修復(fù)作用。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)2005級博士學(xué)位論文腫瘤相關(guān)蛋白RAIB和STARD7對肝癌細胞生物學(xué)影響的實驗研究PRIMARYSTUDYCONCERNEDTHEBIOLOGCALINFLUENCEONHCCPERFORMEDBYTUMORRELATEDRALBANDSTARD7課題來源國家863基金項目NO．2006AA02A311專業(yè)名稱學(xué)位申請人指導(dǎo)教師答辯委員會主席答辯委員會成員免疫學(xué)潘華政李明教授余新炳教授朱家勇教授李英杰教授黎誠耀教授何慶瑜教授高毅教授申洪教授論文評閱人陳觀今教授孫晗笑教授董文其教授2008年04月15日博士學(xué)位論文腫瘤相關(guān)蛋白RALB和STARD7對肝癌細胞生物學(xué)影響的實驗研究博士研究生潘華政導(dǎo)師李明教授摘要肝癌是一種嚴重威脅人體健康的惡性腫瘤，其發(fā)病率在所有惡性腫瘤中據(jù)第3位。肝癌在東南亞地區(qū)具有較高的發(fā)病率，中國廣東、臺灣兩地是肝癌的高發(fā)地區(qū)。肝癌的發(fā)病機制目前仍不是特別清楚，一般認為與病毒侵襲、化學(xué)污染物的接觸、環(huán)境及飲食習(xí)慣、遺傳易感性及其他方面的因素有關(guān)。目前臨床對于肝癌的治療方法以手術(shù)治療為主，配合放療和化療，但是由于肝癌診斷較為困難，發(fā)現(xiàn)時多為晚期，因此治療效果并不十分顯著。惡性腫瘤的基因診斷與治療是近年來研究和開發(fā)的熱點，同時發(fā)現(xiàn)一些相對于惡性腫瘤的診斷及治療靶標，但是由于肝臟器官體積較大、功能復(fù)雜，因此迄今為止，還并沒有發(fā)現(xiàn)針對于肝癌的診斷及治療靶標。RALB是小G蛋白RALRASLIKE家族的成員之一，RAL家族由RALA和RALB組成。RAL是RAS超家族的一個成員，具有參與介導(dǎo)許多不同細胞外信號活化的潛能。RAL蛋白與RAS具有55％的氨基酸同源性，其作為輔助因子并活化，從而參與腫瘤基因RAS誘導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)化，RAL通過相應(yīng)的信號通路和不同的效應(yīng)因子，引起基因轉(zhuǎn)錄的改變從而影響細胞形態(tài)的改變，進而影響細胞的轉(zhuǎn)化。小G蛋白RAL家族參與腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移，但對于RAL家族成員RALA和RALB的各自生物學(xué)功能并未完全研究清楚。RALB對于維持腫瘤細胞的存活具有特異性的作用，RALB還能夠抑制不同腫瘤細胞的程序性死亡，RALA的生物學(xué)功能主要在于促進不同的腫瘤細胞錨定非依賴性增殖，推測RALA和RALB可能具有協(xié)同參與腫瘤轉(zhuǎn)化、介導(dǎo)腫瘤細胞增殖和存活信號。同時，RALB能夠增強腫瘤細

簡介：廣西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移細胞系的建立及生物學(xué)特性的研究姓名阮和云申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師黎丹戎20070601碩士研究生畢業(yè)論文人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移細胞系的建立及生物學(xué)特性研究人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移細胞系的建立及生物學(xué)特性的研究【摘要】目的篩選人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移惡性腫瘤細胞亞群，并對其生物學(xué)特性進行鑒定和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因差異表達的研究。方法將卵巢癌細胞株SKOV3細胞種植于裸鼠爪墊下，待植入物在裸鼠體內(nèi)成瘤并發(fā)生轉(zhuǎn)移時，取其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶癌細胞再次種植于裸鼠爪墊下傳代，每代均取出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶瘤組織進行細胞培養(yǎng)，通過單細胞分離克隆培養(yǎng)或局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶篩選的方法建立連續(xù)傳代細胞系，重復(fù)傳3代后，通過裸鼠接種實驗觀察各代裸鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。利用細胞生長曲線測定、HE染色、染色體分析、流式細胞儀、裸鼠接種、免疫組化等方法鑒定各代細胞的生物學(xué)特性。基因芯片技術(shù)研究各代轉(zhuǎn)移的細胞與原代細胞進行與轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的差異表達。結(jié)果所建立的連續(xù)傳代細胞系，分別命名為SKOV3一PMI，SKOV3一PM2SBSKOV3一PM3細胞，癌細胞在裸鼠體內(nèi)傳3代后，裸鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為100％I0／I0，形成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目較母系為多，母系轉(zhuǎn)移率10％I／10，統(tǒng)計學(xué)分析P005，有顯著差異。且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移途徑較為單一；細胞染色體分析顯示原代SKOV3細胞染色體數(shù)目眾數(shù)為83～89條，SKOV3一PM3染色體眾數(shù)91～105條，并保持著卵巢上皮癌細胞生物學(xué)特性；SKOV3一PM3細胞倍增時間為227H，原代SKOV3細胞為499H，前者的生長速度明顯快于后者。流式細胞分析顯示，SKOV3PM細胞DNA合成期和分裂期細胞的比例高于母株SKOV3細胞。本研究在96個人類已知與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)基因的篩選中發(fā)現(xiàn)60個表達差異性基因，將SKOV3一PM2、SKOV3一PM3與SKOV3比較均有上調(diào)的基因31個，一個共同下調(diào)。結(jié)論本研究成功建立了人卵巢癌淋巴道定向高轉(zhuǎn)移的細胞模型，為研究卵巢癌的淋巴結(jié)浸潤轉(zhuǎn)移的發(fā)病機制提供了良好的實驗材料。篩選出了與定向高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異基因?！娟P(guān)鍵詞】卵巢腫瘤；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；裸小鼠；基因差異表達1

簡介：實驗背景及目的內(nèi)皮祖細胞（ENDOTHELIALPROGENITCELLS，EPCS），又稱成血管細胞，存在于骨髓（BONEMARROW，BM）、臍帶血（UMBILICALCDBLOOD，UCB）及外周血（PERIPHERALBLOOD，PB）中，可以分化為成熟的內(nèi)皮細胞（ENDOTHELIALCELLS，ECS），是血管ECS的前體細胞。研究表明，EPCS不僅參與胚胎時期血管生成，而且在缺血、血管損傷等刺激下，可動員并遷移至病變局部參與出生后的血管發(fā)生及受損內(nèi)皮的修復(fù)，在缺血組織的血運重建方面發(fā)揮著重要作用，給缺血性疾病的治療帶來了新的希望。但對EPCS的生物學(xué)特性及其影響因素尚缺乏全面了解，而這是對于更好的應(yīng)用EPCS為人類造福所必需的。最新的研究發(fā)現(xiàn)，EPCS的數(shù)量、功能等生物學(xué)特性與心血管疾病的危險因素如高脂血癥、糖尿病、C反應(yīng)蛋白（CREACTIVEPROTEIN，CRP）等成負相關(guān)。血管緊張素II（ANGII）是一種與多種心血管疾病的病理生理過程密切相關(guān)的致病因素，它的水平是否也會影響EPCS的生物學(xué)特性尚不清楚。另一方面，近些年不斷有研究報道ANGII可以促進新生血管的形成，提示它可能與EPCS存在一定的相互關(guān)系。ANGII可以促進ECS的增殖，抑制凋亡，上調(diào)其粘附分子的表達，增加其內(nèi)皮型一氧化氮合酶（ENDOTHELIALNITRICOXIDESYNTHASE，ENOS）MRNA的合成，從而增加一氧化氮（NITRICOXIDE，NO）的分泌。因此，我們假設(shè)ANGII對EPCS也具有類似作用。本實驗在體外培養(yǎng)大鼠BMEPCS的基礎(chǔ)上，觀察一定濃度的ANGII對其增殖、凋亡、NO分泌及粘附能力等生物學(xué)特性的影響，并進一步探討其可能機制，以期為臨床更好地利用EPCS治療缺血性疾病提供思路。實驗方法第一部分大鼠BMEPCS的體外分離、誘導(dǎo)分化及鑒定。無菌分離大鼠股骨及脛骨，沖洗骨髓腔，收集細胞懸液，利用FICOLL密度梯度離心法分離BM單個核細胞（MONONUCLEARCELLS，MNCS），接種在含有特定濃度血管內(nèi)皮生長因子（VULARENDOTHELIALGROWTHFACT，VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（BASICFIBROBLASTGROWTHFACT，BFGF）的培養(yǎng)基中進行誘導(dǎo)分化。對原代細胞的表面標志分子CD133和血管內(nèi)皮生長因子2型受體（VULARENDOTHELIALGROWTHFACTTYPE2RECEPT，VEGFR2FLK1）進行雙染，激光共聚焦鑒定，雙陽性為EPCS。第二部分ANGII對BMEPCS增殖能力的影響及機制探討。取原代培養(yǎng)的EPCS，分成若干組，在其培養(yǎng)基中添加不同濃度的ANGII，至培養(yǎng)終點，四甲基偶氮唑鹽（METHYLTHIAZOLYLTETRAZOLIUM，MTT）比色法測定細胞增殖活性。利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINRACTION，RTPCR）對不同實驗組的FLK1MRNA進行擴增，半定量分析其表達量的差異。第三部分ANGII對BMEPCS凋亡、NO分泌及粘附能力的影響。取原代培養(yǎng)的EPCS，不同濃度的ANGII干預(yù)后，HOECHST染色測定凋亡率，試劑盒測定NO分泌量，結(jié)晶紫染色測定粘附能力。實驗結(jié)果1、體外成功培養(yǎng)出大鼠BMEPCS，并經(jīng)鑒定證實。2、與空白對照組比較，在VEGF存在的前提下，不同濃度的ANGII可以使EPCS的增殖活性增強（P005），且呈濃度依賴性；ANGII可以促進EPCSFLK1MRNA的表達。血管緊張素II1型受體（ANGIOTENSINIITYPE1RECEPT，AT1R）拮抗劑纈沙坦、蛋白激酶C（PROTEINKINASEC，PKC）抑制劑均可以拮抗這種作用（P005）。3、與空白對照組比較，不同濃度的ANGII可以使無血清條件下EPCS的凋亡率下降（P005）；不同濃度的ANGII可以使EPCSNO的分泌量增加（P005）；不同濃度的ANGII可以使短期內(nèi)EPCS的貼壁細胞數(shù)量增加（P005）。作用均呈濃度依賴性，纈沙坦可拮抗ANGII的上述作用（P005）。結(jié)論一定濃度的ANGII可以改善BMEPCS的生物學(xué)特性，表現(xiàn)為細胞增殖活性增強、凋亡率下降、NO分泌量增加、粘附能力增強，而ANGII的上述作用是通過AT1R介導(dǎo)的。結(jié)果提示ANGII可能是通過對EPCS的作用產(chǎn)生促進血管生成的效應(yīng)。

簡介：糖尿病已成為繼心血管疾病和腫瘤之后的人類第三大疾病。目前糖尿病患者多采用外源胰島素來控制血糖水平，但是不可避免會產(chǎn)生低血糖癥狀。近年來，胰島移植已經(jīng)發(fā)展成為有望嚴格控制血糖水平的糖尿病治療方法。由于供體胰腺的短缺，人們開始尋找胰島的替代資源，如干細胞、豬胰島等。胰腺干細胞是存在于胰腺組織中、能自我更新、具有多向分化潛能的一類成體干細胞。胰腺干細胞體外增殖分化為胰島細胞的途徑具有方法簡便、成功率高、致瘤風(fēng)險小和無倫理因素制約等優(yōu)勢，有望率先用于治療糖尿病。本實驗室于2004年建立一株人胰腺干細胞系，但對其生物學(xué)特性僅進行了初步檢測。本研究以該胰腺干細胞為試驗材料，對其表達特征、生長特性、體內(nèi)外分化能力進行了較為系統(tǒng)的鑒定，以進一步完善其生物學(xué)特性的檢測；同時將其體外定向誘導(dǎo)分化為胰島樣細胞團并植入糖尿病大鼠模型體內(nèi)，觀察其改善糖尿病癥狀的效果，旨在為糖尿病的臨床治療研究提供一株背景清楚的種子細胞。本研究主要內(nèi)容包括1人胰腺干細胞的生物學(xué)特性免疫組化染色結(jié)果顯示，該胰腺干細胞表達PDX1、NESTIN、CK7、CK19、胰高血糖素、生長抑素、胰多肽、GLUT2、E鈣黏素、波形蛋白、AFP和PCNA，不表達胰島素和胰淀素；RTPCR進一步證實細胞轉(zhuǎn)錄PDX1、NESTIN、CK7、CK19、GLUT2和ΒGAL基因，不轉(zhuǎn)錄胰島素基因；流式細胞儀分析顯示，該胰腺干細胞表達CD29、CD44、CD166，不表達CD14、CD34、CD45、CD11A、CD90、CD105、CD117。該胰腺干細胞與目前所報道的胰腺干細胞的表達特征基本一致。該胰腺干細胞呈克隆性生長。當(dāng)培養(yǎng)皿中細胞數(shù)較少時，可見多角形的上皮樣胰腺干細胞呈典型的單克隆方式生長；當(dāng)細胞生長至70％融合時，則呈鋪路石樣。接種培養(yǎng)1～4D，細胞生長緩慢處于潛伏期；5～7D，進入對數(shù)生長期；之后生長速度減慢進入平臺期。與第30、44代細胞相比，第20代細胞從第6D起生長較快。目前此胰腺干細胞已擴增培養(yǎng)3年。該胰腺干細胞植入裸鼠體內(nèi)后，在其腹股溝處形成腫塊。移植后6周，取腫塊做切片。HE染色，可見細胞在裸鼠體內(nèi)分化形成的組織含有未成熟的腺泡樣結(jié)構(gòu)，而組織部分區(qū)域可見壞死細胞，可能是營養(yǎng)缺乏所致。結(jié)合PDX1、NESFIN、CK19免疫組化染色陽性結(jié)果，提示該胰腺干細胞在體內(nèi)可自發(fā)分化為胰腺來源的細胞。體外采用添加煙酰胺、BFGF與HGF的無血清誘導(dǎo)液誘導(dǎo)干細胞分化為DTZ染色陽性的Β細胞；采用ΒME誘導(dǎo)其分化為ΒTUBLIN免疫組化染色陽性的神經(jīng)細胞；采用地塞米松和VC誘導(dǎo)其分化為甲苯胺藍染色陽性的軟骨細胞；但是應(yīng)用5氮胞苷并未將干細胞誘導(dǎo)分化為心肌細胞，提示可能是該誘導(dǎo)條件不適合其向心肌方向分化或該胰腺干細胞分化能力有限。綜上，該胰腺干細胞體內(nèi)可自發(fā)分化為胰腺來源的細胞，體外可定向誘導(dǎo)分化為內(nèi)胚層的胰腺Β細胞、中胚層的軟骨細胞及外胚層的神經(jīng)細胞，表明其具備多向分化潛能。2人胰腺干細胞誘導(dǎo)胰島樣細胞團及其治療大鼠糖尿病采用無血清誘導(dǎo)液將隨機解凍的第18代人胰腺干細胞體外誘導(dǎo)分化為胰島樣細胞團，DTZ染色陽性，RTPCR檢測轉(zhuǎn)錄胰島素MRNA，葡萄糖刺激能釋放胰島素。將獲得的胰島樣細胞團植入STZ制備的糖尿病大鼠腎背膜下，移植后48H，血糖水平即明顯下降，維持約兩周時間，但其血糖濃度仍高于正常血糖濃度范圍；移植后第3周血糖濃度迅速上升，之后一直維持高血糖狀態(tài)。與胰島樣細胞團移植組大鼠相比，糖尿病對照組大鼠血糖濃度一直處于糖尿病血糖濃度范圍內(nèi)。初步證實人胰腺干細胞體外誘導(dǎo)分化的胰島樣細胞團具有一定的抗大鼠糖尿病作用。