簡(jiǎn)介:第七章細(xì)菌與病毒的微生物學(xué)檢查法,微生物學(xué)教研室JIZZHAOJ12ZHAOALIYUNCOM,教學(xué)大綱,掌握內(nèi)容標(biāo)本的采集和送檢原則病原菌的檢驗(yàn)程序細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷及常用方法了解內(nèi)容病原體的抗原成分、核酸及其他成分的檢測(cè)方法,病原學(xué)檢查的目的,進(jìn)行病因?qū)W診斷指導(dǎo)合理用藥觀察治療進(jìn)行傳染病的流行病學(xué)調(diào)查,,標(biāo)本的采集和送檢六原則※,無(wú)菌操作避免雜菌污染,不同期不同標(biāo)本,用抗生素以前,采集病變明顯部位,,,,,,,,,,,,,運(yùn)送注意保存,采集雙份血清,第一節(jié)細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法,可疑細(xì)菌感染,,采集標(biāo)本,,,血清學(xué)實(shí)驗(yàn)雙份血清,直接形態(tài)學(xué)檢查,細(xì)菌成分檢測(cè),,特異性抗體檢測(cè),,細(xì)菌分離培養(yǎng),,鑒定,,,形態(tài)學(xué)檢查生化學(xué)檢查血清學(xué)鑒定藥物敏感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(毒力)實(shí)驗(yàn),,,抗原檢測(cè),核酸檢測(cè),,,直接凝集實(shí)驗(yàn)協(xié)同凝集實(shí)驗(yàn)乳膠凝集實(shí)驗(yàn)免疫熒光檢測(cè)ELISA等,核酸雜交聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)DNA芯片,凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和試驗(yàn)ELISA等,,,,,,,細(xì)菌學(xué)診斷,檢測(cè)病原菌成分,檢測(cè)患者血清中特異性抗體,,細(xì)菌病原學(xué)檢查法,形態(tài)學(xué)檢查分離培養(yǎng),純培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗(yàn)毒力實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),,抗原,核酸,一、細(xì)菌學(xué)診斷,(一)形態(tài)學(xué)檢查,光學(xué)顯微鏡檢查法細(xì)菌染色檢查法革蘭染色法抗酸染色法負(fù)染法暗視野檢查用于檢查活菌、螺旋體及其動(dòng)力熒光顯微鏡,腦脊液的直接涂片染色肺炎鏈球菌,,鏈球菌,淋病奈瑟球菌膿液直接涂片,結(jié)核分枝桿菌,霍亂弧菌,,暗視野顯微鏡,鉤端螺旋體,肺炎雙球菌,病原菌的分離培養(yǎng)/直接涂片,大小形態(tài)顏色表面性狀透明度溶血性,FLAMESTERILIZEWIRELOOP,METALFORCEPS,ETCBEFOREANDAFTERUSEINAHOODEDBUNSENBURNER,細(xì)菌動(dòng)力的檢測(cè),化膿性球菌,葡萄球菌,鏈球菌,腸道桿菌,大腸埃希菌,沙門(mén)氏菌,志賀菌,細(xì)菌形態(tài)無(wú)特異性可采用生化學(xué)檢查法鑒別細(xì)菌的重要方法,(二)生化試驗(yàn),糖發(fā)酵試驗(yàn)H2S試驗(yàn)枸櫞鹽利用試驗(yàn),鑒定中最重要的生化反應(yīng)※,乳糖發(fā)酵試驗(yàn),腸道非致病菌(埃希菌屬)發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣+,腸道致病菌(志賀菌屬、沙門(mén)菌屬等)不發(fā)酵乳糖,,,,,(三)血清學(xué)鑒定,利用含已知的特異性抗體的免疫血清,檢測(cè)未知的細(xì)菌抗原,對(duì)細(xì)菌進(jìn)行種的鑒定志賀菌屬、沙門(mén)菌屬常用方法是玻片凝集試驗(yàn),測(cè)定抗生素或其他抗微生物制劑在體外抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的能力方法擴(kuò)散法、稀釋法,(四)藥物敏感試驗(yàn),MICMBC,最低抑菌濃度,MIC最低殺菌濃度,MBC,全自動(dòng)分析儀,全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀,全自動(dòng)生化分析儀,(五)檢測(cè)毒力動(dòng)物實(shí)驗(yàn),1常用動(dòng)物MOUSEGUINEAPIGRABBITDOGMONKEY,接種途徑,皮內(nèi)皮下腹膜內(nèi)靜脈顱內(nèi)椎管內(nèi)鼻內(nèi)灌胃,毒力檢測(cè),半數(shù)致死量LD50半數(shù)感染量ID50,二、檢測(cè)病原菌成分,抗原的檢測(cè)核酸的檢測(cè),(一)抗原的檢測(cè),利用已知的特異性AB檢測(cè)AG的方法常用的方法有玻片凝集協(xié)同凝集試驗(yàn)ELISA免疫熒光法,ELISA,(二)核酸檢測(cè)方法,聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)核酸雜交技術(shù)SOUTHERNBLOTNORTHERNBLOTDOTBLOTINSITUHYBRIDIZATION基因芯片GENECHIP16SRRNA,16SRNA基因序列分析,只存在于原核細(xì)胞型微生物的染色體基因中16SRNA,23SRNA,5SRNA可變區(qū)和保守區(qū)保守區(qū)所有的細(xì)菌所共有可變區(qū)屬和種的特異性,PCR,GENECHIP,,,三、抗體的檢測(cè),用已知細(xì)菌或其AG檢測(cè)相應(yīng)的特異性AB及其量的多少,作為某些病原菌感染的輔助診斷急性期和恢復(fù)期雙份血清,恢復(fù)期效價(jià)升高≥4倍有診斷價(jià)值方法玻片或試管凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、冷凝集試驗(yàn)、ELISA局限難以早期診斷,第二節(jié)病毒感染的微生物學(xué)檢查法,形態(tài)學(xué)病毒的分離鑒定在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)病毒成分的檢測(cè)病毒抗體的檢測(cè),,(一)病毒的形態(tài)學(xué)檢查,電子顯微鏡(EM)免疫電鏡,IEM光學(xué)顯微鏡(CM)包涵體內(nèi)基小體(NEGRIBODY),HAV,NEGRIBODY,動(dòng)物接種動(dòng)物模型,雞胚接種9~14D,組織培養(yǎng),器官培養(yǎng),組織培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng),原代細(xì)胞培養(yǎng),,二倍體細(xì)胞培養(yǎng),傳代細(xì)胞培養(yǎng),三大培養(yǎng)方法,(二)病毒的分離培養(yǎng)的方法,,,血凝抑制實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)PCR檢測(cè),,,,病毒分離培養(yǎng)及鑒,細(xì)胞病變(CYTOPATHY※紅細(xì)胞吸附HEMADSORPTION病毒干擾作用VIRALINTERFERENCE中和試驗(yàn)NEUTRALIZATIONTEST,NT空斑形成試驗(yàn)PLAQUEFORMATION,病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)※,細(xì)胞病變細(xì)胞病變效應(yīng)※(CPE),細(xì)胞病變紅細(xì)胞吸附血凝素(HA)病毒干擾作用中和試驗(yàn)病毒數(shù)量及感染性的檢測(cè)空斑形成試驗(yàn)紅細(xì)胞凝集,紅細(xì)胞吸附,病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo),,PLAQUE,空斑形成試驗(yàn),用于病毒濃度的精確定量和測(cè)定抗病毒藥物的作用一個(gè)空斑是由一個(gè)病毒大量復(fù)制而成,稱(chēng)為空斑形成單位(PLAQUEFORMINGUNIT,PFU)。病毒的感染量用PFU/ML表示,(三)病毒成分的檢測(cè),病毒抗原的檢測(cè)ELISA病毒核酸的檢測(cè)核酸雜交、PCR、基因芯片,病毒成分的檢測(cè),(四)病毒抗體的檢測(cè),中和試驗(yàn)(NT)血凝抑制試驗(yàn)(HT)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)ELISA法蛋白印跡技術(shù),小結(jié),細(xì)菌感染的微生物學(xué)檢查法病原體檢查核酸的檢測(cè)抗原、抗體的檢測(cè)病毒感染的微生物學(xué)檢查法電鏡及免疫電鏡病毒的分離培養(yǎng)和鑒定核酸的檢測(cè)抗原、抗體的檢測(cè),小結(jié),抗細(xì)菌免疫固有免疫※獲得性免疫抗病毒免疫固有免疫干擾素※獲得性免疫,問(wèn)題,采集標(biāo)本的原則病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)干擾素的概念及其抗病毒機(jī)制,自檢內(nèi)容,1機(jī)體抗結(jié)核分枝桿菌的感染免疫主要依賴(lài)A屏障結(jié)構(gòu)B細(xì)胞免疫C抗體的中和作用D非特異性免疫分子E吞噬細(xì)胞的吞噬作用2滅活和清除游離病毒主要依靠A干擾素B抗體C細(xì)胞因子D非特異性免疫分子E皮膚粘膜屏障,自檢內(nèi)容,3抑制病毒的增殖,保護(hù)鄰近細(xì)胞免疫受病毒感染的抗病毒作用機(jī)制是A抗體BNK細(xì)胞C細(xì)胞因子D干擾素ECRP4傷寒病人,病程有5天左右,應(yīng)采集的標(biāo)本是A血液B糞便C尿液D咽部E膿液,
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上傳時(shí)間:2024-01-06
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