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    • 簡介:生物英語證書考試生物英語證書考試PEC微生物學詞匯微生物學詞匯MICROSCOPE顯微鏡ANTONYVANLEEUWENHOEK呂文虎克LOUISPASTEUR巴斯德JOSEPHLISTER李斯德ROBERTKOCH郭霍KOCHPOSTULATE郭霍法則MOLECULARKOCHPOSTULATE分子郭霍法則BACTERIUM細菌COCCUS球菌DIPLOCOCCUS雙球菌BACILLUS桿菌SPIRALBACTERIUM螺型菌VIBRIO弧菌SPIRILLUM螺菌POLYMPHISM多形性CELLWALL細胞壁PEPTIDOGLYCAN肽聚糖MUCOPEPTIDE粘肽GLYCOPEPTIDE糖肽MUREIN胞壁質NACETYLMURAMICACID,NAMN乙酰胞壁酸NACETYLGLUCOSAMINENAGN乙酰葡糖胺DIAMINOPIMELICACIDDAP二氨基庚二酸TEICHOICACID磷壁酸RIBITOL核糖醇LIPOTEICHOICACIDLTA脂磷壁酸OUTERMEMBRANE外膜LIPOPOLYSACIDELPS脂多糖LIPIDA脂質ALYSOZYME溶菌酶PROTOPLAST原生質體SPHEROPLAST圓球體BACTRRIALLFM細菌L形CYTOPLASMICMEMBRANE細胞膜MESOSOME中介體CYTOPLASM細胞質RIBOSOME核糖體PLAS質粒INCLUSION內含物METACHROMATICGRANULE異染顆粒PYROGEN熱原質ANTIBIOTIC抗生素EXOTOXIN外毒素ENDOTOXIN內毒素BACTERIOCIN細菌素CULTUREMEDIUM培養(yǎng)基BASALMEDIUM基礎培養(yǎng)基NUTRIENTMEDIUM營養(yǎng)培養(yǎng)基IVEMEDIUM選擇性培養(yǎng)基DIFFERENTMEDIUM鑒別培養(yǎng)基ANAEROBICMEDIUM厭養(yǎng)培養(yǎng)基COOKEDMEATMEDIUM庖肉培養(yǎng)基COLONY菌落,克隆PURECULTURE純培養(yǎng)AGAR瓊脂HEREDITY遺傳VARIATION變異GENOTYPE基因型PHENOTYPE表型CHROMOSOME染色體REPLICATIONFK復制叉LEADINGSTR前導鏈LAGGINGSTR隨從鏈SEMICONSERVATIVEREPLICATION半保留復制PLAS質粒CONJUGATIVEPLAS接合性質粒NONCONJUGATIVEPLAS非接合性質粒CURING消失FERTILITYPLAS致育性質粒,F(xiàn)質粒RESISTANCEPLAS耐藥性質粒,R質粒COLICINOGENICPLAS大腸桿菌定居原性質粒COL質粒VIRULENCEPLAS毒力質粒,V質粒EPISOME附加子COMPATIBILITY相容性INCOMPATIBILITY不相容性TRANSPOSABLEELEMENT轉位因子TRANSPOSASE轉位酶IONSEQUENCEIS插入序列TRANSPOSONTN轉座子BACTERIOPHAGEPHAGE噬菌體VIRULENTPHAGE毒性噬菌體TEMPERATEPHAGE溫和噬菌體LYSOGENY溶原性LYSOGENICPHAGE溶原性噬菌體
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    • 簡介:蛋白質的二級結構是指多肽鏈的主鏈骨架中若干肽單位,各自沿一定的軸盤旋或折疊,并以氫鍵為次級鍵而形成有規(guī)則的構象,如Α螺旋Β折疊Β轉角等。肽單位肽鍵是構成在分子的基本化學鍵,肽鍵與相鄰的原子所組成的基團,成為肽單位或肽平面。結構域是位于超二級結構和三級結構間的一個層次。結構域是在蛋白質的三級結構內的獨立折疊單元,其通常都是幾個超二級結構單元的組合。在較大的蛋白質分子中,由于多肽鏈上相鄰的超二級結構緊密聯(lián)系,進一步折疊形成一個或多個相對獨立的致密的三維實體,即結構域。超二級結構又稱模塊或膜序是指在多肽內順序上相鄰的二級結構常常在空間折疊中靠近,彼此相互作用,形成有規(guī)則的二級結構聚集體。三級結構具有二級結構、超二級結構或結構域的一條多肽鏈,由于其序列上相隔較遠的氨基酸殘基側鏈的相互作用,而進行范圍更廣泛的盤曲與折疊,形成包括主、測鏈在內的空間排列,這種在一條多肽鏈中所有原子和基團在三維空間的整體排布稱為三級結構。一級結構蛋白質多肽鏈中氨基酸的排列順序,以及二硫鍵的位置。四級結構多亞基蛋白質分子中各個具有三級結構的多肽鏈,以適當?shù)姆绞骄酆纤纬傻牡鞍踪|的三維結構。增色效應增色效應或高色效應。由于DNA變性引起的光吸收增加稱增色效應也就是變性后DNA溶液的紫外吸收作用增強的效應。固定化酶不溶于水的酶。是用物理的或化學的方法使酶與水不溶性大分子載體結合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的。脂肪酸的Β氧化飽和脂肪酸在一系列酶的作用下,羧基端的Β位C原子發(fā)生氧化,C鏈在Α位C原子與Β位C原子間發(fā)生斷裂,每次生成一個乙酰COA和較原來少兩個C單位的脂肪酸,這個不斷重復進行的脂肪酸氧化過程稱為脂肪酸的Β氧化。脂肪酸的Β氧化基本過程丁酰COA經最后一次Β氧化生成2分子乙酰COA。故每次Β氧化1分子脂酰COA生成1分子FADH2,1分子NADHH,1分子乙酰COA,通過呼吸鏈氧化前者生成2分子ATP,后者生成3分子ATP。尿素循環(huán)肝臟是動物生成尿素的主要器官,由于精氨酸酶的作用使精氨酸水解為鳥氨酸及尿素。精氨酸在釋放了尿素后產生的鳥氨酸,和氨甲酰磷酸反應產生瓜氨酸,瓜氨酸又和天冬氨酸反應生成精氨基琥珀酸,精氨基琥珀酸為酶裂解,產物為精氨酸及延胡索酸。由于精氨酸水解在尿素生成后又重新反復生成,故稱尿素循環(huán)。操縱子指啟動基因、終止基因和一系列緊密連鎖的結構基因的總稱。原核生物大多數(shù)基因表達調控是通過操縱子機制實現(xiàn)的。操縱子通常由2個以上的編碼序列與啟動序列、操縱序列以及其他調節(jié)序列在基因組中成簇串聯(lián)組成。啟動序列是RNA聚合酶結合并起動轉錄的特異DNA序列。多種原核基因啟動序列特定區(qū)域內,通常在轉錄起始錯誤⑥密碼子閱讀與翻譯具有一定的方向性從5端到3端⑦有起始密碼子和終止密碼子,起始密碼子有兩種,一種是甲硫氨酸(AUG),一種是纈氨酸(GUG),而終止密碼子(有3個,分別是UAA、UAG、UGA)沒有相應的轉運核糖核酸(TRNA)存在,只供釋放因子識別來事先翻譯的終止。在信使RNA中,堿基代碼A代表腺嘌呤,G代表鳥嘌呤,C代表胞嘧啶,U代表尿嘧啶一碳單位就是指具有一個碳原子的基團。指某些氨基酸分解代謝過程中產生含有一個碳原子的基團,包括甲基、亞甲基、甲烯基、甲炔基、甲酚基及亞氨甲基等。一碳單位具有以下下兩個特點1不能在生物體內以游離形式存在;2必須以四氫葉酸為載體。能生成一碳單位的氨基酸有絲氨酸、色氨酸、組氨酸、甘氨酸。另外蛋氨酸(甲硫氨酸)可通過S腺苷甲硫氨酸(SAM提供“活性甲基”(一碳單位),因此蛋氨酸也可生成一碳單位。遺傳基因組學是將微陣列技術和數(shù)量性狀座位分析結合起來,全基因組水平上定位基因表達的QTL它為研究復雜性狀的分子機理和調控網絡提供全新的手段氧化磷酸化是物質在體內氧化時釋放的能量供給ADP與無機磷合成ATP的偶聯(lián)反應。主要在線粒體中進行。在真核細胞的線粒體或細菌中,物質在體內氧化時釋放的能量供給ADP與無機磷合成ATP的偶聯(lián)反應。酶的活性中心酶分子中氨基酸殘基的側鏈有不同的化學組成。其中一些與酶的活性密切相關的化學基團稱作酶的必需基團。這些必需基團在一級結構上可能相距很遠,但在空間結構上彼此靠近,組成具有特定空間結構的區(qū)域,能和底物特異結合并將底物轉化為產物。這一區(qū)域稱為酶的活性中心或活性部位酶的活性單位酶的活性單位指在一定的作用條件下,酶促反應中單位時間內作用物的消耗量或產物的生成量。粘多糖粘多糖是含氮的不均一多糖,是構成細胞間結締組織的主要成分,也廣泛存在于哺乳動物各種細胞內?;瘜W組成為糖醛酸和酪氨基己糖交替出現(xiàn),有時含硫鍵。也稱為糖胺聚糖。重要的粘多糖有硫酸皮膚素,硫酸類肝素,硫酸角質素,硫酸軟骨素和透明質酸等固定化酶不溶于水的酶。是用物理的或化學的方法使酶與水不溶性大分子載體結合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的。必需脂肪酸維持哺乳動物正常生長所必需的,而動物又不能合成的脂肪酸,如亞油酸,亞麻酸。蛋白質的等電點在某一PH的溶液中,氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等,所帶凈電荷為零,呈電中性,此時溶液的PH稱為該氨基酸的等電點。乳糖操縱子大腸桿菌中控制Β半乳糖苷酶誘導合成的操縱子。包括調控元件P啟動子和O操縱基因,以及結構基因LACZ、LACY和LACA。在沒有誘導物時,調節(jié)基因LACI編碼阻遏蛋白,與操縱基因O結合后抑制結構基因轉錄;乳糖的存在可與LAC阻遏蛋白結合誘導結構基因轉錄,以代謝乳糖
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    • 簡介:淺談生物學實驗中對照實驗的類型廣東省揭東縣登崗中學曾鵬光摘要大多生物學實驗中都需設置對照實驗,在實驗設計過程中,首先要區(qū)分實驗組和對照組,對照實驗的類型又有很多,因此要根據(jù)不同的實驗,設計對照實驗。本文以高中生物課本的相關實驗為例,對對照實驗的類型進行逐一分析。關鍵詞關鍵詞生物學實驗對照原則“對照原則”是中學生物實驗設計中最常用的原則,通過設置對照實驗,既可排除無關變量的影響,又可增加實驗結果的可信度和說服力。一個實驗可包括實驗組和對照組,實驗組,是接受實驗變量處理的對象組,所處理的變量就是我們要研究的內容;對照組,也稱控制組,是不接受實驗變量處理的對象組。按對照的內容和形式上的不同,常用的對照類型有空白對照、自身對照、相互對照、條件對照、配對對照、標準對照、陽性對照、陰性對照、安慰劑對照等9種類型。1空白對照空白對照空白對照指不做任何實驗實驗的對照組或不給對照組以任何處理因素。值得注意的是,不給對照組任何處理因素是相對實驗組而言的,實際上對照組還是要做一定的處理,只是不加實驗組的處理因素,或者說相對于實驗組而言,除實驗變量外,別的處理與實驗組完全相同??瞻讓φ漳苊靼椎貙Ρ群鸵r托實驗組的變化和結果,增加說服力。通常未經實驗因素處理的對象組為對照組,經實驗因素處理的對象組為實驗組;或處于正常情況下的對象組為對照組,未處于正常情況下的對象組為實驗組。例如,在“生物組織中可溶性還原糖的鑒定”的實驗中,向甲試管溶液加入試劑,而乙試管溶液不加試劑(零劑量),一起進行溫水浴加熱,比較它們的變化。這樣,甲為實驗組,乙為對照組,且乙為典型的空白對照??瞻讓φ漳苊靼椎貙Ρ群鸵r托出實驗組的變化和結果,增強了說服力。例題剖析例題剖析有人設計實驗探究有機肥是否能提高土壤肥力并優(yōu)于化肥。實驗分為兩組,一組農田施有機肥,一組農田施化肥。該實驗設計缺少()A施用有機肥和適量化肥的對照田B既不施用有機肥也不施用化肥的對照田C施用大量化肥和少量有機肥的對照田D該實驗同一步所用的三種溶液用量必須相等,同一組前后兩步所用溶液用量可以不等解析該實驗通過甲組和乙組的自身對照,可驗證胰島素和胰高血糖素的功能以及它們在調節(jié)血糖過程中的拮抗作用。實驗要嚴格遵循對照原則和單一變量原則,因此該實驗所用的胰島素溶液和胰高血糖素溶液應是生理鹽水與相應激素配制而成,而且該實驗同一步所用的三種溶液用量必須相等,同一組前后兩步所用溶液用量可以不等。該實驗有組內的自身對照(第一步與第二步對照),也有甲乙兩組的相互對照,但是丙組的空白對照也很有必要,因為只有與空白對照相比較才能夠看出實驗組的情況是否異常。答案B3相互對照相互對照相互對照是指不單獨設對照組,而是幾個實驗組相互對比對照,其中每一組既是實驗組也是其他級別的對照組,由此得出相應的實驗結論。一般是在探究某種實驗因素對實驗結果的影響不明確的情況下使用,通過實驗的相互對比,確立實驗變量和反應變量的關系。在等組實驗法中,若不設空白對照,則大都是運用相互對照。相互對照較好地平衡和抵消了無關變量的影響,使實驗結果具有說服力。例如,“植物的向性運動”的等組實驗中,5個實驗組采用的都是相互對照,較好的平衡和抵消了無關變量的影響,使實驗結果更具有說服力。又如“驗證植物根對礦質離子有選擇吸收的特性”,可把番茄和水稻分別培養(yǎng)在成分相同的培養(yǎng)液中,過一段時間后,測定培養(yǎng)液中各種礦質元素離子濃度的變化,就會發(fā)現(xiàn)番茄吸收CA多,吸收SI少;而水稻吸收SI多,吸收CA少。以上就是兩個實驗組的相互對照。再如,在“探究酵母菌細胞呼吸的方式”的實驗中,需要設置有氧和無氧兩個條件,探究酵母菌在不同氧氣條件下細胞呼吸的方式,這兩個實驗組的結果都是事先未知的,通過對比可以看出氧氣條件對細胞呼吸的影響。典型分析典型分析溫度對唾液淀粉酶活性的影響實驗(1)實驗對象加了相同淀粉糊的四支試管。(2)對照處理不另設對照組,而是將四支試管分別放在溫度為80℃、60℃、37℃、0℃的不同環(huán)境中,并同時逐個加入相同的唾液。(3)實驗結果對相同時間內四組溶液中淀粉糊消化程度進行檢測,并記錄檢測值。(4)對照分析通過對四組檢測值之間相互對比,得出淀粉糊消化程度最高組的溫度,即為本探究實驗的唾液淀粉酶活性的最適溫度。
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    • 簡介:蛋白質結構與功能習題蛋白質結構與功能習題1欲獲得不變性的蛋白質制劑,可采用下述哪種分離方法DA生物堿試劑沉淀B重金屬鹽沉淀C常溫乙醇沉淀D低溫鹽析E加熱2構成天然蛋白質的基本單位是AALΑ氨基酸BDΑ氨基酸E核苷酸3維持蛋白質一級結構的鍵是DA氫鍵B鹽鍵C疏水鍵D肽鍵E35磷酸二酯鍵4各種蛋白質含氮量很接近,平均為DA24B55C16D625E305蛋白質變性時不應出現(xiàn)的變化是EA蛋白質的溶解度降低B失去原有的生理功能C蛋白的天然構象破壞D蛋白質分子中各種次級鍵被破壞E蛋白質分子個別肽鍵被破壞6測得某一蛋白質樣品的含氮量為040G,此樣品約含蛋白質多少BA200GB250GC640GD300G7下列含有兩個羧基的氨基酸是EA精氨酸B賴氨酸C甘氨酸D色氨酸E谷氨酸8維持蛋白質二級結構的主要化學鍵是DA鹽鍵B硫水鍵C肽鍵D氫鍵E二硫鍵9關于蛋白質分子三級結構的描述,其中錯誤的是BA天然蛋白質分子均有這種結構B具有三級結構的多肽鏈都具有生物學活性C三級結構的穩(wěn)定性主要是次級鍵維持D親水基團聚集在三級結構的表面E決定盤曲折疊的因素是氨基酸殘基10具有四級結構的蛋白質特征是EA分子中必定含有輔基B在兩條或兩條以上具有三級結構多肽鏈的基礎上,肽鏈進一步折疊,盤曲形成C每條多肽鏈都具有獨立的生物學活性D依賴肽鍵維持四級結構的穩(wěn)定性E由兩條或兩條以上具有三級結構的多肽鏈組成11蛋白質所形成的膠體顆粒,在下列哪種條件下不穩(wěn)定CA溶液PH值大于PIB溶液PH值小于PIC溶液PH值等于PID溶液PH值等于74E在水溶液中12蛋白質變性是由于DA氨基酸排列順序的改變B氨基酸組成的改變C肽鍵斷裂D蛋白質空間構象的破壞E蛋白質的水解13變性蛋白質的主要特點是DA粘度下降B溶解度增加C不易被蛋白酶水解的C谷胱甘肽是體內重要的氧化劑D谷胱甘肽的C端羧基是主要的功能基團E谷胱甘肽所含的肽鍵均為肽鍵26血紅蛋白BA是含有鐵卟啉的單亞基珠蛋白B血紅蛋白的氧解離曲線為S型C一個血紅蛋白可與一個氧分子可逆結合D血紅蛋白不屬于變構蛋白E血紅蛋白的功能與肌紅蛋白相同27蛋白質螺旋的特點是CA多為左手螺旋B螺旋方向與長鈾垂直C氨基酸側鏈伸向螺旋外側D肽鍵平面充分伸展E靠鹽鍵維系穩(wěn)定28蛋白質分子中的無規(guī)卷曲結構屬于AA二級結構B三級結構C四級結構D結構域E以上都不是29常出現(xiàn)在肽鏈轉角結構中的氨基酸為AA脯氨酸B半胱氨酸C谷氨酸D甘氨酸E丙氨酸30蛋白質的空間構象主要取決于AA肽鏈氨基酸的排列序順B螺旋和折疊C肽鏈中的氨基酸側鏈D肽鏈中的肽鍵E肽鏈中的二硫鍵位置31鹽析法沉淀蛋白質的原理是AA中和電荷,破壞水化膜B鹽與蛋白質結合成不溶性蛋白鹽C降低蛋白質溶液的介電常數(shù)D調節(jié)蛋白質的等電點E以上都不是32血清清蛋白PI為47在下列哪種PH值溶液中帶正電荷AAPH40BPH50CPH60DPH70EPH8033蛋白質分子中引起280NM光吸引的最主要成分是CA酪氨酸的酚基B苯丙氨酸的苯環(huán)C色氨酸的吲哚環(huán)D肽鍵E半胱氨酸的SH基34下列蛋白質通過凝膠過濾層析柱時,最先被洗脫的是AA馬肝過氧化氫酶分子量247500B肌紅蛋白分子量16900C血清清蛋白分子量68500D牛乳球蛋白分子量35000E牛胰島素分子量570035蛋白質變性過程中與下列哪項無關DA理化因素致使氫鍵破壞B疏水作用破壞C蛋白質空間結構破壞D蛋白質一級結構破壞,分子量變小E蛋白質的功能喪失36血紅蛋白的氧合動力學曲線呈S形,這是由于BA氧分子可氧化FE2,使之變?yōu)镕E3B一個亞基氧合后構象變化,引起其余亞基氧合能力增強C有利于血紅蛋白執(zhí)行輸氧功能的發(fā)揮D血紅蛋白與氧的親和力高E氧分子直接與血紅蛋白結合37蛋白質中多肽鏈形成螺旋時,主要靠哪種次級鍵維持CA疏水鍵B肽鍵C氫鍵D二硫鍵E范德華引力38有關亞基的描述,哪一項不恰當BA每種亞基都有各自的三維結構
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    • 簡介:水處理生物學課后思考題第一章緒論1“水處理生物學水處理生物學“的研究對象是什么的研究對象是什么“水處理生物學“研究的對象主要集中在與水中的污染物遷移、分解及轉化過程密切相關的微生物、微型水生動物和水生濕生植物,特別是應用于水處理工程實踐的生物種類。細菌等原核微生物在水處理工程中通常起著關鍵的作用,是水處理生物學研究的重點。2水中常見的微生物種類有哪些水中常見的微生物種類有哪些水中的主要微生物分為非細胞生物(病毒)和細胞生物兩種類型。在細胞生物中又分為古菌、原核生物(如細菌、放線菌、藍細菌、支原體、立克次氏體、衣原體等)、真核生物。真核生物又可細分為藻類、真菌(如酵母菌、霉菌等)、原生動物(分為肉足類、鞭毛類、纖毛類)、微型后生動物。3微生物有哪些基本特征為什么微生物有哪些基本特征為什么微生物除了具有個體微小、結構簡單、進化地位低等特點外,還具有以下特點(1)種類多。(2)分布廣。微生物個體小而輕,可隨著灰塵四處飛揚因此廣泛分布于土壤、水和空氣等自然環(huán)境中。土壤中含有豐富的微生物所需要的營養(yǎng)物質,所以土壤中微生物的種類和數(shù)量很多。(3)繁殖快。大多數(shù)微生物在幾十分鐘內可繁殖一代,即由一個分裂為兩個。如果條件適宜,經過10H就可繁殖為數(shù)億個。(4)易變異。這一特點使微生物較能適應外界環(huán)境條件的變化。第二章原核微生物1細菌的大小一般是用什么單位測量的細菌的大小一般是用什么單位測量的細菌的大小一般只有幾個ΜM,故一般用ΜM測量。2以形狀來分,細菌可分為哪幾類細菌的形態(tài)大致上可分為球狀、桿狀和螺旋狀(弧菌及螺菌)3種,僅少數(shù)為其他形狀,如絲狀、三角形、方形和圓盤形等。球狀、桿狀和螺旋狀是細菌的基本形態(tài)。自然界中,以桿菌最為常見,球菌次之,螺旋菌最少。4什么是革蘭氏染色其原理和關鍵是什么它有何意義1884年丹麥病理學家HANSCHRISTIANGRAM提出了一個經驗染色法,用于細菌的形態(tài)觀察和分類。其操作過程是結晶紫初染,碘液媒染,然后酒精脫色,最后用蕃紅或沙黃復染。這就是最常采用的革蘭氏染色法。革蘭氏染色的機理一般解釋為通過初染和媒染后,在細菌細胞的細胞壁及膜上結合了不溶于水的結晶紫與碘的大分子復合物。革蘭氏陽性菌細胞壁較厚、肽聚糖含量較高和分子交聯(lián)度較緊密,故在酒精脫色時,肽聚糖網孔會因脫水而發(fā)生明顯收縮。再加上它不含脂類,酒精處理也不能在胞壁上溶出大的空洞或縫隙,因此,結晶紫與碘的復合物仍阻留在細胞壁內,使其呈現(xiàn)出藍紫色。與此相反,革蘭氏陰性菌的細胞壁較薄、肽聚糖位于內層且含量低和交聯(lián)松散,與酒精反應后其肽聚糖不易收縮,加上它的脂類含量高且位于外層,所以酒精作用時細胞壁上就會出現(xiàn)較大的空洞或縫隙,這樣,結晶紫和碘的復合物就很易被溶出細胞壁,脫去了原來初染的顏色。當蕃紅或沙黃復染時,細胞就會帶上復染染料的紅色。酒精脫色是革蘭氏染色的關鍵環(huán)節(jié)。脫色不足陰性菌被誤染成陽性菌;脫色過度陽性菌可誤染為陰性菌。革蘭氏染色法的意義在于鑒別細菌,把眾多的細菌分為兩大類,革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。5簡述細胞膜的結構與功能。細胞膜又稱細胞質膜、質膜或內膜,是一層緊貼著細胞壁而包圍著細胞質的薄膜,其化學組成主要是蛋白質、脂類和少量糖類。整體細胞膜的結構,目前大家比較公認的是“鑲嵌模型“,其要點是①磷脂雙分子層組成膜的基本骨架。②磷脂分子在細胞膜中以多種方式不斷運動,因而膜具有流動性。③膜蛋白以不同方式分布于膜的兩側或磷脂層中。細胞膜的主要功能為①選擇性地控制細胞內外物質(營養(yǎng)物質和代謝產物)的運送和交換。②維持細胞內正常滲透壓。③合成細胞壁組分和莢膜的場所。④進行氧化磷酸化或光合磷酸化的產能基地。⑤許多代謝酶和運輸酶以及電子呼吸鏈組成的所在地。⑥鞭毛的著生和生長點。7什么是菌落將單個或少量同種細菌(或其他微生物)細胞接種于固體培養(yǎng)基表面(或內層)時,在適當?shù)呐囵B(yǎng)條件下(如溫度、光照等),該細胞會迅速生長繁殖,形成許多細胞聚集在一起且肉眼可見的細胞集合體,稱之為菌落。準確地講,菌落就是在固體培養(yǎng)基上(內)以母細胞為中心的、肉眼可見的、有一定形態(tài)、構造特征的子細胞團。8什么叫菌膠團菌膠團在污水生物處理中有何特殊意義當莢膜物質融合成一團塊,內含許多細菌時,稱為菌膠團。菌膠團是活性污泥中細菌的主要存在形式,有較強的吸附和氧化有機物的能力,在污水生物處理中具有重要的作用。一般說,處理生活污水的活性污泥,其性能的好壞,主要根據(jù)所含菌膠團多少、大小及結構的緊密程度來定。9簡述放線菌的特點與菌落特征。放線菌是一類主要呈菌絲狀生長和以孢子繁殖的陸生性較強的原核生物。它的細胞結構與細菌十分相近,是細菌中進化較高級的類群,絕大多數(shù)放線菌是革蘭氏陽性菌。放線菌都是單細胞的個體。細胞體內既沒有葉綠素,也沒有成形的細胞核。放線菌的菌絲分為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲。大多數(shù)放線菌為異養(yǎng)型,靠營養(yǎng)菌絲吸收營養(yǎng)物質,營腐生生活。大多數(shù)放線菌是好氧的,只有某些種是微量好氧菌和厭氧菌。當生長發(fā)育到一定時期時,氣生菌絲頂端長出孢子絲形成孢子。孢子散落出去,在適宜的條件藻類對給水工程有一定的危害性。當它們在水庫、湖泊中大量繁殖時,會使水帶有臭味,有些種類還會產生顏色。水源水中含大量藻類時會影響水廠的正常水處理過程,如造成濾池阻塞。水中即使含有數(shù)量很少的黃群藻,也能產生強烈的氣味而使水不適于飲用。12水處理中常見的原生動物有哪幾類它們在污水處理中的主要作用分別是什么污水處理中常見的原生動物有三類肉足類、鞭毛類和纖毛類。原生動物在水體凈化與廢水處理中的應用1凈化水質作用動物性營養(yǎng)型的原生動物吞食細菌、有機物顆粒,因此促進了水質凈化作用。2促進生物絮凝作用草履蟲等纖毛蟲具有生物絮凝作用,促進水體澄清作用。3作為水質處理的指示生物由于鞭毛蟲、肉足蟲、游泳型纖毛蟲與固著型纖毛蟲對生存的水質有一定要求。其數(shù)量的增多、減少,可反映水體的水質好壞。同時原生動物個體較大,易于觀察與分辨。因此常作為水體無機化和廢水處理運轉管理的指示生物。4廢水處理及水質凈化過程原生動物的變動運行初期出現(xiàn)肉足類、植物性、動物性鞭毛蟲;水質處理高峰期出現(xiàn)較多游泳型纖毛蟲;水質凈化較好時出現(xiàn)鐘蟲等。13水處理中常見的微型后生動物有哪幾類它們在污水處理中的主要作用分別是什么在水處理工作中常見的微型后生動物主要是多細胞的無脊椎動物,包括輪蟲、甲殼類動物和昆蟲及其幼蟲等。輪蟲以細菌、小的原生動物和有機顆粒等為食物,所以在污水的生物處理中有一定的凈化作用。在污水生物處理過程中,輪蟲也可作為指示生物。當活性污泥中出現(xiàn)輪蟲時,往往表明處理效果良好,但如數(shù)量太多,則有可能破壞污泥的結構,使污泥松散而上浮。輪蟲在水源水中大量繁殖時,有可能阻塞水廠的砂濾池。在給水排水工程中常見的甲殼類動物有水蚤和劍水蚤。它們以細菌和藻類為食料。若大量繁殖,可能影響水廠濾池的正常運行。楊花堂出水中往往含有較多藻類,可以利用甲殼類動物去凈化這種出水。昆蟲及其幼蟲可用作研究河川污染的指示生物。14簡述底棲動物的定義,主要類型,其在水環(huán)境中的作用與生態(tài)學意義。底棲動物是底棲生物中動物的總稱,包括腔腸動物、海綿動物、扁形動物、線形動物、環(huán)節(jié)動物、節(jié)足動物等。底棲生物由棲息在水域底部和不能長時間在水中游動的各類生物所組成,是水生生物中的一個重要生態(tài)類型。根據(jù)其生活類型,底棲動物可分為固著動物、穴居動物、攀爬動物和鉆蝕動物等。底棲動物壽命較長,遷移能力有限,且包括敏感種和耐污種,故常稱為“水下哨兵“,其種類與多樣性可作為長期監(jiān)測水體質量的指示生物。底棲生物鏈蝕水體生態(tài)環(huán)境健康的標志之一,底棲生物對水體內源污染控制及其重要,底棲生物鏈的建立能有效降低內源污染釋放總量和速度。第六章微生物的生理特性3什么叫生長因子它包括哪些物質微量元素和生長因子有何區(qū)別生長因子是一類調節(jié)微生物正常代謝所必需,但不能利用簡單的碳、氮源自行合成的有機物。并非所有的微生物都需要外界為它提供生長因子。廣義的生長因子包括維生素、堿基、卟啉及其衍生物、甾醇、胺類、C4~C6的分枝或直鏈脂肪酸,有時還包括氨基酸;狹義的生長因子一般指維生素。而微量元素屬于無機鹽,是指微生物的生長繁殖所需濃度在10-6~10-8MOLL范圍內的元素。4什么叫單純擴散、促進擴散、主動運輸、基因轉位比較微生物對營養(yǎng)物質吸收四種方式的異同。單純擴散又稱被動運輸,是最簡單的方式,也是微生物吸收水分及一些小分子有機物的運輸方式。它的特點是物質的轉運順著濃度差進行,運輸過程不需消耗能量,物質的分子結構不發(fā)生變化。促進擴散的特點基本與單純擴散相似,但是它須借助細胞膜上的一種蛋白質載體進行,因此對轉運的物質有選擇性,即立體專一性。除了細胞內外的濃度差外,影響物質轉運的物質的另一重要因素是與載體親合力的大小。主動運輸是微生物吸收營養(yǎng)物質的最主要方式。它的最大特點是吸收運輸過程中需要消耗能量(ATP,原子動勢或“離子泵“等),因此可以逆濃度差進行?;蜣D位與主動運輸非常相似,但有一個不同,即基因轉位過程中被吸收的營養(yǎng)物質與載體蛋白之間發(fā)生化學反應,因此物質結構有所改變。6何謂培養(yǎng)基培養(yǎng)基的分類方法有哪些培養(yǎng)基指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產生代謝產物的混合營養(yǎng)物。根據(jù)物理狀態(tài)的不同,培養(yǎng)基可分為液體、固體和半固體三大類;根據(jù)化學組分的不同,培養(yǎng)基可以分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基;根據(jù)用途的不同,培養(yǎng)基可分為選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和加富培養(yǎng)基。10何謂新陳代謝試用圖示說明合成代謝與分解代謝的相互關系。新陳代謝簡稱代謝,是推動一切生命活動的動力源,通常指在活細胞中的各種合成代謝和分解代謝的總和。合成代謝又稱同化作用或合成作用,是微生物不斷從外界吸收營養(yǎng)物質,合成細胞物質的過程,在此過程中需要吸收能量;分解代謝又稱異化作用或分解作用,是微生物將自身或外來的各種復雜有機物分解為簡單化合物的過程,在此過程中有能量釋放。(圖示)12細菌呼吸作用有哪幾種類型各有什么特點微生物的呼吸作用可分為好氧呼吸、厭氧呼吸和發(fā)酵三種。好氧呼吸是一種最普遍又最重要的生物氧化或產能方式,基質的氧化以分子氧作為最
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    • 簡介:實驗三玻璃器皿的清洗、包扎和干熱滅菌實驗三玻璃器皿的清洗、包扎和干熱滅菌一、目的要求一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干熱滅菌的操作方法。二、實驗材料實驗材料玻璃器皿、烘箱、牛皮紙、紗布、紗繩三、操作步驟三、操作步驟(一)清洗方法根據(jù)實驗目的、器皿的種類、所盛放的物品、洗滌劑的類別和沾污程度等的不同而有所不同。1新玻璃器皿的洗滌方法新玻璃器皿的洗滌方法新購置的玻璃器皿含游離堿較多,應在酸溶液內先浸泡數(shù)小時,酸溶液一般用2的鹽酸或洗滌液,浸泡后用自來水沖洗干凈。2使用過的玻璃器皿的洗滌方法使用過的玻璃器皿的洗滌方法1試管、培養(yǎng)皿、三角燒瓶、燒杯等可用瓶刷或海綿沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗滌劑刷洗,然后用自來水充分沖洗干凈。但是,洗衣粉和去污粉較難沖洗干凈,常在器壁上附有一層微小粒子,故要用水多次甚至10次以上充分沖洗,或可用稀鹽酸搖洗一次,再用水沖洗。若內壁的水是均勻分布成一薄層,表示油垢完全洗凈,若掛有水珠,則還需用洗滌液浸泡數(shù)小時,然后再用自來水充分沖洗。2裝有固體培養(yǎng)基的器皿應先將其刮去,然后洗滌。帶菌的器皿在洗滌前先浸在2煤酚皂溶液來蘇爾或025新潔爾滅消毒液內24小時或煮沸半小時,再用上法洗滌3載玻片與蓋玻片用過的載玻片與蓋玻片如滴有香柏油,要先用皺紋紙擦去或浸在二甲苯內搖晃幾次,使油垢溶解,再在肥皂水中煮沸510MIN,用軟布或脫脂棉花擦試,立即用自來水沖洗。然后在稀洗滌液中浸泡052H,自來水沖去洗滌液,最后用蒸餾水換洗數(shù)次,待干后浸于95酒精中保存?zhèn)溆谩?洗滌液的配制與使用洗滌液的配制與使用1洗滌液的配制洗滌液分濃溶液與稀溶液兩種,配方如下濃溶液濃溶液重鉻酸鈉或重鉻酸鉀工業(yè)用50G自來水150ML濃硫酸工業(yè)用800ML稀溶液稀溶液重鉻酸鈉或重鉻酸鉀工業(yè)用50G自來水850ML濃硫酸工業(yè)用100ML配法都是將重鉻酸鈉或重鉻酸鉀先溶解于自來水中,可慢慢加溫溶解,冷卻后徐徐加入濃硫酸,邊加邊攪動。配好后的洗滌液應是棕紅色或桔紅色。貯存于有蓋容器內。2原理重鉻酸鈉或重鉻酸鉀與硫酸作用后形成鉻酸,酪酸的氧化能力極強,因而此液具有極強的去污作用。3使用注意事項A洗滌液中的硫酸具有強腐蝕作用,玻璃器皿浸泡時間太長,會使玻璃變質,因此切忌到時忘記將器皿取出沖洗。其次,洗滌液若沾污衣服和皮膚應立即用水洗,再用蘇打水或氨液洗。如果濺在桌椅上,應立即用水洗去或濕布抹去;B玻璃器皿投入前,3恒溫當溫度升到所需溫度后,維持此溫度2H。4降溫切斷電源,自然降溫。5取出滅菌物品待電烘箱內溫度降到70℃以下后,才能打開箱門,取出滅菌物品。
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    • 簡介:題目四個無核葡萄品種在鄭州地區(qū)的生物學特征四個無核葡萄品種在鄭州地區(qū)的生物學特性四個無核葡萄品種在鄭州地區(qū)的生物學特性摘要摘要為豐富鄭州地區(qū)無核葡萄栽培的品種構成,本文對“無核白雞心”“紅寶石無核”“夏黑無核”“早熟紅無核”等4個無核葡萄品種的生物學特性進行了觀察比較。結果表明早熟紅無核,果粒整齊,品質優(yōu)秀,不裂果,不易落粒,長勢強,早熟,極豐產,抗病,抗旱,耐鹽堿,耐儲運。夏黑無核,果小,有濃玫瑰香味,極早熟,樹勢生長旺盛,豐產性強,果實品質好。無核白雞心,果穗大,果粒比較均勻,緊密,皮薄而韌,肉脆,有玫瑰香味,品質極佳,中熟,成熟一致。紅寶石無核長勢旺,坐果率高,晚熟,抗病性弱,有裂果現(xiàn)象。由于早熟紅無核結果性狀最好,長勢最旺,早果性非常明顯。適合鄭州地區(qū)栽培。關鍵詞關鍵詞無核葡萄;生物學特性;鄭州THEBIOLOGICALACTERISTICSCONDUCTOFFOURSEEDLESSGRAPEVARIETIESINZHENGZHOUAREAZHANGMEIFANGABSTRACTINDERTOENRICHTHESEEDLESSGRAPECULTIVARSINZHENGZHOUAREAONTHE“CENTENNIALSEEDLES““RUBYSEEDLESS““XIAHEISEEDLESS““PRECOCITYREDSEEDLESS“4SEEDLESSGRAPEVARIETIESOFBIOLOGYACTERISTICSWEREOBSERVEDCOMPAREDTHERESULTSSHOWEDTHATPRECOCITYREDSEEDLESSFRUITTIDYQUALITYEXCELLENTDEHISCENTFRUITNOTEASYTOSTRONGGROWTHPRECOCIOUSVERYHIGHYIELDDISEASERESISTANCEDROUGHTRESISTANCESALTRESISTANCERESISTANTSTAGETRANSPTATIONXIAHEISEEDLESSFRUITSMALLTHICKFRAGRANCEOFROSEPRECOCIOUSGROWTHVIGOUSGROWTHVERYHIGHYIELDFRUITQUALITYCENTENNIALSEEDLESSBIGEARFRUITISRELATIVELYUNIFMCOMPACTTHINTOUGHMEATCRISPWITHROSEFRAGRANCEEXCELLENTQUALITYMEDIUMMATURITYMATURECONSISTENTRUBYSEEDLESSGROWTHVIGFRUITSETTINGRATEHIGHLATEMATURINGRESISTANCEISWEAKTHEREISACRACKINGPHENOMENONBYEARLYREDSEEDLESSFRUITACTERISBESTTHEMOSTFLOURISHINGTHEEARLYFRUITISVERYOBVIOUSSUITABLEFCULTIVATINGINZHENGZHOUAREA果粉厚度成熟果粒的果粉厚薄程度。有薄、中、厚三種。花芽率的調查一個品種隨機選取三株,調查每株果樹全部的枝條量,統(tǒng)計全部發(fā)芽量,其中花芽占有的百分率。花芽起始節(jié)位一個品種任選三株,調查第一個花芽起始的結位,取其平均值。果實產量調查對試驗樹產量的調查,單采單收,稱重,以單株產量或單位面積產量記載,如KG株,KG6667M2采前落果一般不記在產量內??扇苄怨绦挝锖砍墒炱诠麑嵖扇苄怨绦挝锖?。可溶性固形物的含量采用VR113型手持測糖儀測定。每次觀測果實數(shù)量,以1020個過的平均值為宜。果實風味果實成熟時的味道。有酸甜、甜酸、甜等23結果與分析231物候期表1四個無核品種的物候期葡萄所處的生態(tài)環(huán)境是由許多生態(tài)因子組成的綜合體,溫度、光照、水分等各單因子之間既相互聯(lián)系,又相互制約。在生產中應了解不同品種對生態(tài)因子的適應性,把握和應用各生態(tài)因子的生態(tài)作用與效應,滿足各品種對生態(tài)因子的要求。232果實經濟性狀在4個無核品種中,早熟紅無核果粒著生緊密,果肉細脆,如管理不善不進行花序整形,果穗易分枝;無核白雞心果粒較大,平均單粒重35G(不進行果粒膨大),果粉厚;紅寶石無核果粒最大,平均單粒重47G(不進行果粒膨大),果肉硬脆,如果不進行花序整形果穗呈分枝形;夏黑無核果粒平均重23G不進行果實膨大處理。4個無核葡萄品種的內在品質,可溶性固形物含量紅寶石無核和無核白雞心含量為17左右,夏黑無核和早熟紅無核為20左右。表24個無核葡萄品種的果實經濟性狀品種穗重粒重果粒果皮果粉可溶性固風味(G)(G)形狀顏色形物含量()葡萄各品種物候期的形成是在不斷變化的氣候條件下的一個錯綜復雜過程,每年均有不同程度的差異從表1以看出各葡萄品種的物候期具有一定差異由表知2011年品種間萌芽期相差2D,森田尼無核,紅寶石無核,早熟紅無核萌牙較夏黑無核早2D。盛花期相差4D坐果期相差18D果實生長期相差大,早熟紅無核,夏黑無核生長期短,屬于早熟品種。森田尼無核生長期中等。紅寶石無核果實生長期相對要長,屬于晚熟品種。落葉期大致相同。在篩選的四個無核葡萄品種中,早熟紅無核的果實發(fā)育期108天左右,7月26日成熟,為早熟品種;無核白雞心果實發(fā)育期113天左右,7月29日果實成熟,為早熟品種;夏黑無核果實發(fā)育期102天左右,7月22日成熟,為早熟品種;紅寶石無核果實發(fā)育期151天左右,8月23日果實成熟,為晚熟品種。品種萌芽期初花期盛花期果實著色期成熟期落葉期森田尼無核040105170518072507291115夏黑無核040305130518071507221115紅寶石無核040105200522082508231115早熟紅無核040105180520071507261115
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    • 簡介:Ⅱ型超敏反應(A)A由IGG介導ABO血型的天然抗體是(C)CIGMB細胞表面的抗原受體是(D)DIGDB細胞表面識別抗原表位并向胞內傳遞刺激信號的結構是(B)BBCRCD79ACD79BCTL細胞殺傷靶細胞時(C)CCTL細胞具特異性殺傷作用HLAII類分子主要表達于(B)BAPC表面HLAII類抗原(B)B參與外源性抗原的加工處理NK細胞所不具備的生物學功能有(E)E通過釋放蛋白水解酶殺傷病毒感染的靶細胞SIGA的分子特性,正確的是(B)B是主要分布于外分泌液的抗體TCR的雙識別是指(D)D同時識別抗原肽和MHC分子TH細胞的TCR能識別(E)E抗原肽MHCII類分子復合物TH細胞活化的標志是表達(B)BIL2RT細胞表面識別抗原肽MHC復合物并向胞內傳遞刺激信號的結構是B)BTCRCD3T細胞分化成熟的場所是(B)B胸腺白細胞分化抗原是指(B)B血細胞在分化成熟為不同譜系、不同階段以及在活化中出現(xiàn)或消失的細胞表面標記分子補體激活途徑的共同點是(A)A形成攻膜復合體補體經典途徑激活的順序是(C)CC142356789不屬人工被動免疫的是(D)D白喉類毒素不屬人工主動免疫的是(B)B破傷風抗毒素參與TIAG激活B淋巴細胞產生抗體的細胞是(B)BTH細胞出生后,B細胞分化發(fā)育的部位是(A)A骨髓初次免疫應答的特點是(E)E抗體產生慢,維持時間短初次體液免疫應答產生的抗體主要是(D)DIGM發(fā)育成熟的T細胞還未接受抗原刺激時稱為(B)B初始T細胞給實驗動物在新生期摘除胸腺的結局是(C)C細胞免疫和體液免疫均缺陷骨髓的功能不包括(C)CT細胞分化發(fā)育成熟的場所固有免疫應答的生物學意義描述不正確的是(B)B抗再次感染關于Ⅳ型超敏反應描述正確的是(E)E以單個核細胞浸潤為主的炎癥關于細胞因子(E)E以上均正確關于胸腺描述正確的是(B)BB細胞分化發(fā)育成熟的場所過敏毒素作用最強的補體分子裂解片段是(E)EC5A機體適應性免疫應答的始動者是(B)BDC機體受抗原刺激后發(fā)生免疫應答的部位是(C)C淋巴結激活補體能力最強的抗體類型是(C)CIGM既具有吞噬殺菌作用,又具有抗原提呈作用的細胞是(B)B巨噬細胞介導I型超敏反應的抗體是(C)CIGE介導I型超敏反應速發(fā)相反應的最主要血管活性介質是(A)A組胺進行免疫整體調節(jié)的網絡系統(tǒng)是(C)C神經內分泌免疫具有調理作用的補體組份是(B)BC3B決定抗原物質免疫原性的因素不包括(E)E特異性抗體分子上的抗原結合部位在(B)BFAB段抗原的異物性是指(C)C異種物質抗原提呈細胞中不包括(E)E中性粒細胞早期固有免疫應答發(fā)生于(A)A感染4~24小時內粘膜局部抗感染的主要抗體是(A)ASIGA針對病原微生物的特異性IGM抗體水平具有診斷意義是因為C)C相對高水平的IGM抗體常常同近期感染的病原微生物有關中樞免疫器官的功能是(E)E免疫細胞分化成熟場所主要識別TI抗原,屬于固有免疫細胞的是(A)AB1細胞主要在細胞免疫中發(fā)揮作用的CD4T細胞亞群為A)ATH1主要針對局部引流淋巴液發(fā)揮過濾作用的免疫器官是(C)C淋巴結主要針對血源性抗原發(fā)生免疫應答的場所是D)D脾臟屬于Ⅳ型超敏反應的疾病是(D)D接觸性皮炎屬于III型超敏反應的疾病是(C)C血清病屬于II型超敏反應的是(B)B溶血性貧血屬于自身抗原的是(D)D甲狀腺球蛋白HIV的傳播途徑中不包括CC日常生活中的一般接觸HLAII類分子主要表達于BBAPC表面SIGA的分子特性,正確的是BB是主要分布于外分泌液的抗體白假絲酵母菌常引起CC皮膚粘膜、內臟感染病毒核心的主要成分是DD核酸病毒潛伏感染的特點是DD潛伏期抗體陽性但分離不到病毒病毒與衣原體在性狀上的相同點是DD活細胞內繁殖不符合血清HBSAG、HBEAG和抗HBC的解釋是CC乙型肝炎恢復期不屬微生物特點的是DD都可以致病不屬于條件致病性真菌的是DD皮膚癬菌不屬于原核細胞型的微生物是CC病毒產生抗生素的主要微生物是EE放線菌大腸埃希菌在食品衛(wèi)生細菌學方面的重要性在于(D)D常作為被糞便污染的檢測指標毒性作用最強的外毒素是DD肉毒毒素對病毒包膜敘述錯誤的是DD包膜的成分均由病毒基因組編碼對病毒抵抗力描述錯誤的是CC所有病毒對脂溶劑都敏感對熱原質特性的敘述中,錯誤的是CC可被高壓滅菌滅活對外毒素特性的敘述中,錯誤的是DD耐熱非原核細胞型微生物特點的是CC有核仁、核膜革蘭陽性菌細胞壁內特有的成分是AA磷壁酸革蘭陰性菌細胞壁內特有的成分是BB外膜各型鏈球菌中,致病力最強的BB乙型溶血性鏈球菌關于病毒,以下描述錯誤的是DD同時含有DNA和RNA關于結核分枝桿菌生物學特性的敘述,錯誤的是EE耐煮沸,100℃MIN才死亡關于皮膚癬菌下述描述錯誤的是DD一種皮膚癬菌僅能引起一種癬病關于破傷風抗毒素的特性下列哪項是錯誤的EE破傷風病后可產生大量破傷風抗毒素關于新生隱球菌致病性的描述錯誤的是BB主要經胃腸道進入機體關于真菌孢子的描述,錯誤的是AA是真菌的休眠狀態(tài)關于正常菌群的描述,不正確的是EE任何情況下均對機體有益無害是EEC5A霍亂弧菌致病的原因是(C)C腸毒素作用于小腸黏膜,引起腸液過度分泌
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    • 簡介:醫(yī)療器械生物學評價和審查指南一、目的與范圍為使GBT16886-ISO10993系列標準能夠正確而有效地實施,特制定本指南。本指南為醫(yī)療器械評價者提供了生物學評價指南,為醫(yī)療器械的審查提供了生物安全性審查指南。注本指南不涉及微生物污染、滅菌(如“無菌”、“細菌內毒素”)、除菌和動物源性醫(yī)療器械的病毒去除與控制等方面的生物安全性。二、術語(一)醫(yī)療器械同醫(yī)療器械管理管理條例。(二)制造者醫(yī)療器械制造者或商標持有人單位。(三)評價者醫(yī)療器械制造者或受其委托的專家。注醫(yī)療器械制造者對生物安全性評價負責。(四)審查者對醫(yī)療器械管理負有職責的行政管理部門或受其委托負責醫(yī)療器械審查的機構。三、醫(yī)療器械材料首次生物安全性評價(一)評價依據(jù)GBT16886-ISO10993醫(yī)療器械生物學評價系列標準。(二)評價者-醫(yī)療器械材料與市售產品的等同性比較(4)選擇或放棄生物學試驗的理由和論證;(5)已有數(shù)據(jù)和試驗結果的匯總;(6)完成生物學評價所需的其他數(shù)據(jù)。四、醫(yī)療器械生物安全性重新評價(一)在下列情況下,制造者應當考慮進行生物安全性重新評價1制造產品所用材料來源或技術條件改變時;2產品配方、工藝、初級包裝或滅菌改變時;3貯存期內最終產品發(fā)生變化時;4產品用途改變時;5有跡象表明產品用于人體會產生不良反應時。若企業(yè)提交了沒有發(fā)生第四條第(一)款所規(guī)定的重新評價情況的聲明,在該產品重新注冊時,可不要求重新開展和補充開展生物學評價。當產品的國家標準、行業(yè)標準和GBT16886-ISO10993的系列標準重新修訂后,若企業(yè)提交了沒有發(fā)生第四條第(一)款規(guī)定的情況的聲明,在該產品重新注冊時,不要求補充生物學評價。(二)重新評價時應當盡量利用臨床評價信息、臨床研究信息以及臨床不良事件信息來進行。重新評價應當在以往評價所形成文件的基礎上開展,以避免重復不必要的生物學試驗。重新評價應當按照第三條規(guī)定的程序進行。視具體情況,重新評價可以是全面的,也可以針對某一方面,但評價內容應當形成文件。五、醫(yī)療器械生物安全性審查
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    • 簡介:分子生物學進展主要授課內容及思考題分子生物學進展主要授課內容及思考題專題一細胞周期及其調控問答題CYCLINCDK及CKI在細胞周期進程中是如何發(fā)揮作用的專題二細胞凋亡問答題試述細胞凋亡的分子機制專題三癌及抗癌問答題試述原癌基因活化機制及抗癌基因的作用參考書來茂德主編醫(yī)學分子生物學,人民衛(wèi)生出版社1999(衛(wèi)生部規(guī)劃教材,研究生教材)專題四糖生物學一概述研究歷史研究內容及發(fā)展與醫(yī)學的關系二復合糖類1蛋白聚糖組成與結構生理功能病理時的變化2糖蛋白組成糖鏈與蛋白的連接方式糖化過程及特點生物功能研究寡糖鏈的常用方法與疾病的聯(lián)系糖生物學糖生物學GLYCOBIOLOGY糖復合物GLYCOCONJUGATE糖類與蛋白或脂類形成共價結合物。一研究歷史研究歷史5060年代以前,其研究僅限于(寡多)糖的化學組成和一般結構測定,基本屬于有機化學范疇。70年代后,研究逐漸活躍,至80年代中、后期到90年代初,飛速發(fā)展,發(fā)現(xiàn)糖類在生物體中不僅是能源及結構成份,而且擔負極為重要的生物學功能?,F(xiàn)認為,糖復合物中的糖鏈是生命科學中肽鏈、核苷酸鏈之外具有重大生物意義的第三鏈,其研究已成為繼蛋白、核酸之后探索生命奧秘的第三里程碑。具有相同殘基數(shù)的寡糖與肽和寡核苷酸相比更為復雜,包含有更多信息(例如4肽有數(shù)十種異構體,4糖基理論上有三萬種異構體)。越多的事實證明,糖復合物中的寡糖是體內重要的信息分子,在分子識別中起舉足輕重的作用,形成一新興學科。二二研究內容研究內容硫酸皮膚素DERMATINSULFATEDS硫酸角質素KERATANSULFATEKS硫酸乙酰肝素HEPARANSULFATEHS肝素HEPARANHEP(一)(一)蛋白聚糖的結構蛋白聚糖的結構1GAG(1)HA葡萄糖醛酸乙酰氨基葡萄糖GLCUAGLCNAC結構最簡單的GAG,|Β1→3|Β1,4不含硫酸,HA分子量大,可達1000萬(2萬5千個重復二糖)。生理溶液中,為多聚陰離子,COOH分子相當剛硬,呈無規(guī)扭曲團狀。分子間可交織形成網絡。一些蛋白可以特異地非共價作用與HA結合。(2)CS及DSCS葡萄糖醛酸乙酰氨基半乳糖GLCUAGALNADS艾杜糖醛酸乙酰氨基半乳糖IDOUAGALNACS單個糖鏈分子量小于10萬(250個重復二糖),DS實際上是CS的一種修飾形式。(由酶催化使D葡萄糖醛酸轉變?yōu)長艾杜糖醛酸)(3)KS半乳糖乙酰氨基葡萄糖GALGLCNAC單個KS很少大于4萬(80個重復二糖),無糖醛酸。(4)HS及HEP2核心蛋白與GAG共價結合的蛋白。A絲甘蛋白聚糖核心蛋白最小的GAG,存于造血細胞及肥大細胞。B飾膠蛋白聚糖可修飾膠原蛋白,MW36萬的核心蛋白,調節(jié)結締組織形成。C粘結蛋白聚糖32萬的核心蛋白,其細胞外結構域可連接GAG鏈。D可聚蛋白聚糖核心蛋白225萬25萬,為軟骨中主要結構大分子。除HA外,所有GAG均是以共價連接在核心蛋白上,寡糖分布在核心蛋白的不同區(qū)域,形狀似“瓶刷”。(二)蛋白聚糖的生理功能(二)蛋白聚糖的生理功能蛋白聚糖主要為結構成分,分布于軟骨、結締組織、角膜等基質內,其密集的負電荷可以吸入大量水分子,構成凝膠,起機械保護作用,“篩子”阻止細菌。其次為關節(jié)的潤滑液、眼的玻璃體和粘液,起潤滑作用,故以前稱為粘蛋白。正常動脈壁含豐富的透明質酸、硫酸軟骨素、肝素,以蛋白多糖的形式覆蓋于內皮及平滑肌細胞表面,填充間質,維持血管結構通透性、彈性。硫酸肝素可嵌入細胞質膜的核心蛋白,連于膜表面,在細胞生長、細胞通訊、細胞與環(huán)境的識別中起作用。1HA2可聚蛋白聚糖3多能蛋白聚糖4飾膠蛋白聚糖5纖調蛋白聚糖和光蛋白聚糖6基底膜蛋白聚糖7細胞表面蛋白聚糖粘連蛋白聚糖134糖基磷脂酰肌醇蛋白聚糖8細胞內蛋白聚糖(絲甘蛋白聚糖)
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    • 簡介:分子生物學實驗室的常規(guī)儀器設備及有關操作分子生物學實驗室的常規(guī)儀器設備及有關操作一、驗室的常規(guī)儀器、設備一溫度控制系統(tǒng)1冰箱根據(jù)藥品、試劑及多種生物制劑保存的需要,必須具備不同控溫級別的冰箱,最常使用的有4℃、20℃、80℃冰箱。4℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等。20℃適用于某些試劑、藥品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質樣品等。80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。010℃的冷柜適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實驗。2液氮罐有些實驗材料、某些器官組織、細胞株、菌株及純化的樣品等,要求速凍和長期保存在超低溫環(huán)境下,就需要一個液氮罐(196℃)具有經濟、省力和較好地保持細胞生物學特性的優(yōu)點。3培養(yǎng)箱37℃恒溫箱用于細菌的固體培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)。CO2培養(yǎng)箱適用于培養(yǎng)各種細胞,可恒定地提供一定量的CO2(通常5),用來維持培養(yǎng)液的酸度(PH值)。37℃恒溫空氣搖床可進行液體細菌的培養(yǎng)。4水浴鍋用于保溫。25100℃水浴搖床可用于分子雜交試驗,各種生物化學酶反應等試驗的保溫。25100℃水浴箱用于常規(guī)試驗。5烘箱主用于烘干實驗器皿,有些需要溫度高些,有些需要溫度低些。用于RNA方面的實驗用具,需要在250℃烤箱中烘干,有些塑料用具只能在4245℃的烤箱中進行烘干。(二)水的凈化裝置隨著分子生物學的飛速發(fā)展,許多實驗對水純度的要求越來越高。PH試紙只適用于培養(yǎng)液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的PH值的粗略估計。而大部分試劑的配制要求嚴格的PH值,需精確度高(小數(shù)點后兩位)的PH計。4OD值測量光密度、分光光度計是利用物質在可見光和紫外線區(qū)域中的吸收光譜來鑒定該物質的性質及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測量儀表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質定量的方便指標之一,通過所產生的單色光而測定某一溶液對該單色光的吸收值,利用它可進行核酸溶液定量和純度的初步判斷。(五)離心機離心技術是研究生物的結構和功能中不可缺少的一種物理技術手段。因為各種物質在沉淀系數(shù)、浮力、和質量等方面有差異,可利用強大的離心力場,使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機。可供少于005ML到幾升的樣品離心之用。離心技術應用廣泛,包括收集和分離細胞、細胞器和生物大分子等。據(jù)其轉速的不同,可分為以下幾種類型1普通離心機最大轉速6000RM,最大離心力6000G①醫(yī)用或臺式離心機是離心機中最簡單而廉價的,最常用于收集快速沉降系數(shù)的物質,如紅細胞、粗大的沉淀物、酵母菌和細菌等。②低速冷凍離心機主要用于細胞、細胞核、細胞膜和細菌的沉淀和收集等。2高速離心機最大轉速25000RM,最大離心力89000G有冷凍和常溫兩種,多用于制備和手收集微生物、細胞碎片、細胞、大的細胞器、硫酸銨沉淀物以及免疫沉淀物等。3超速離心機最大轉速9000RM,最大離心力694000G。4臺式超速離心機最大轉速12000RM,最大離心力625000G。(六)超凈工作臺內有紫外燈、照明燈、還應有酒精燈火焰、75乙醇等滅菌的設備,是一種提供局部潔凈度的設備。其原理是鼓風機驅動空氣,經過低、中效的過濾器后,通過工作臺面,使實驗操作區(qū)域成為無菌的環(huán)境。超凈臺按氣流方向的不同大致有幾種類型
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    • 簡介:1第二章染色體與DNA染色體(染色體(CHROMOSOME)是細胞在有絲分裂時遺傳物質存在的特定形式,是間期細胞)是細胞在有絲分裂時遺傳物質存在的特定形式,是間期細胞染色質結構緊密包裝的結果。染色質結構緊密包裝的結果。真核生物的染色體在細胞生活周期的大部分時間里都是以染色質真核生物的染色體在細胞生活周期的大部分時間里都是以染色質CHROMATIN的形式的形式存在的。存在的。染色質是一種纖維狀結構,叫做染色質絲,它是由最基本的單位染色質是一種纖維狀結構,叫做染色質絲,它是由最基本的單位核小體核小體NUCLEOSOME成串排列而成的。成串排列而成的。原核生物原核生物PROKARYOTEDNA形成一系列的環(huán)狀附著在非組蛋白上形成類核。形成一系列的環(huán)狀附著在非組蛋白上形成類核。染色體由DNA和蛋白質組成。蛋白質由非組蛋白和組蛋白(H1H2AH2BH3H4)DNA和組蛋白構成核小體。組蛋白的一般特性組蛋白的一般特性P24①進化上的保守性②無組織特異性③肽鏈氨基酸分布的不對稱性堿性氨基酸集中分布在N端的半條鏈上。④組蛋白的可修飾性甲基化、乙基化、磷酸化及ADP核糖基化等。⑤H5組蛋白的特殊性富含賴氨酸(24)鳥類、魚類及兩棲類紅細胞染色體不含H1而帶有H5組蛋白的可修飾性組蛋白的可修飾性在細胞周期特定時間可發(fā)生甲基化、乙?;⒘姿峄驮诩毎芷谔囟〞r間可發(fā)生甲基化、乙酰化、磷酸化和ADP核糖基化等。核糖基化等。H3、H4修飾作用較普遍,修飾作用較普遍,H2B有乙?;饔?、有乙?;饔?、H1有磷酸化作用有磷酸化作用。所有這些修飾作用都有一個共同的特點,即降低組蛋白所攜帶的正電荷。這些組蛋所有這些修飾作用都有一個共同的特點,即降低組蛋白所攜帶的正電荷。這些組蛋白修飾的意義一是改變染色體的結構,直接影響轉錄活性;二是核小體表面發(fā)生白修飾的意義一是改變染色體的結構,直接影響轉錄活性;二是核小體表面發(fā)生改變,使其他調控蛋白易于和染色質相互接觸,從而間接影響轉錄活性。改變,使其他調控蛋白易于和染色質相互接觸,從而間接影響轉錄活性。2、DNA1DNA的變性和復性的變性和復性■變性(變性(DENATURATIONDNA雙鏈的氫鍵斷裂,最后完全變成單鏈的過程稱為變性。雙鏈的氫鍵斷裂,最后完全變成單鏈的過程稱為變性?!鲈錾錾狧YPERCHROMATICEFFECT在變性過程中,在變性過程中,260NM紫外線吸收值先緩慢上紫外線吸收值先緩慢上升,當達到某一溫度時驟然上升,稱為增色效應。升,當達到某一溫度時驟然上升,稱為增色效應?!鋈诮鉁囟龋ㄈ诮鉁囟龋∕ELTINGTEMPERATURE,TM變性過程紫外線吸收值增加的中點稱為變性過程紫外線吸收值增加的中點稱為融解溫度。融解溫度。生理條件下為生理條件下為8595℃影響因素影響因素GC含量,含量,PH值,離子強度,尿素,甲酰胺等值,離子強度,尿素,甲酰胺等■復性(復性(RENATURATION熱變性的熱變性的DNA緩慢冷卻,單鏈恢復成雙鏈。緩慢冷卻,單鏈恢復成雙鏈?!鰷p色效應(減色效應(HYPOCHROMATICEFFECT隨著隨著DNA的復性,的復性,260NM紫外線吸收值降紫外線吸收值降低的現(xiàn)象。低的現(xiàn)象。2C值反?,F(xiàn)象(值反?,F(xiàn)象(CVALUEPARADOXC值是一種生物的單倍體基因組值是一種生物的單倍體基因組DNA的總量。的總量。真核細胞基因組的最大特點是它含有大量的重復序列,而且功能真核細胞基因組的最大特點是它含有大量的重復序列,而且功能DNA序列大多被序列大多被不編碼蛋白質的非功能不編碼蛋白質的非功能DNA所隔開,這就是著名的所隔開,這就是著名的“C值反?,F(xiàn)象值反?,F(xiàn)象”。(四)核小體(四)核小體NUCLEOSOME用于包裝染色質的結構單位,是由用于包裝染色質的結構單位,是由DNA鏈纏繞一個組鏈纏繞一個組33、引物、引物DNA的合成需要一段的合成需要一段RNA鏈作為引物鏈作為引物4、引物合成酶(引發(fā)酶)此酶以、引物合成酶(引發(fā)酶)此酶以DNA為模板合成一段為模板合成一段RNA這段這段RNA作為合成作為合成DNA的引物(的引物(PRIMER。實質是以。實質是以DNA為模板的為模板的RNA聚合酶。聚合酶。5、DNA聚合酶聚合酶以DNA為模板的為模板的DNA合成酶合成酶●以四種脫氧核苷酸三磷酸為底物以四種脫氧核苷酸三磷酸為底物●反應需要有模板的指導反應需要有模板的指導●反應需要有反應需要有3OH存在存在●DNA鏈的合成方向為鏈的合成方向為53性質性質聚合酶聚合酶Ⅰ聚合酶聚合酶Ⅱ聚合酶聚合酶Ⅲ35外切活性外切活性53外切活性外切活性53聚合活性聚合活性中很低很低很高很高新生鏈合成新生鏈合成聚合酶聚合酶Ⅰ主要是對主要是對DNA損傷的修復;以及在損傷的修復;以及在DNA復制時切除復制時切除RNA引物并填補其引物并填補其留下的空隙。留下的空隙。聚合酶聚合酶Ⅱ修復紫外光引起的修復紫外光引起的DNA損傷損傷聚合酶聚合酶ⅢDNA復制的主要聚合酶,還具有復制的主要聚合酶,還具有3→5’外切酶的校對功能,提高外切酶的校對功能,提高DNA復制的保真性制的保真性6、DNA連接酶(連接酶(1967年發(fā)現(xiàn))若雙鏈年發(fā)現(xiàn))若雙鏈DNA中一條鏈有切口,一端是中一條鏈有切口,一端是3’OH,另一端是另一端是5’磷酸基,連接酶可催化這兩端形成磷酸二酯鍵,而使切口連接。磷酸基,連接酶可催化這兩端形成磷酸二酯鍵,而使切口連接。但是它不能將兩條游離的但是它不能將兩條游離的DNA單鏈連接起來單鏈連接起來DNA連接酶在連接酶在DNA復制、損傷修復、重組等過程中起重要作用復制、損傷修復、重組等過程中起重要作用7、DNA拓撲異構酶拓撲異構酶DNATOPISOMERASE拓撲異構酶拓撲異構酶使使DNA一條鏈發(fā)生斷裂和再連接,作用是松解負超螺旋。主要集中一條鏈發(fā)生斷裂和再連接,作用是松解負超螺旋。主要集中在活性轉錄區(qū),同轉錄有關。例大腸桿菌中的在活性轉錄區(qū),同轉錄有關。例大腸桿菌中的Ε蛋白蛋白拓撲異構酶拓撲異構酶Ⅱ該酶能暫時性地切斷和重新連接雙鏈該酶能暫時性地切斷和重新連接雙鏈DNA,作用是將負超螺旋引入,作用是將負超螺旋引入DNA分子。同復制有關。例大腸桿菌中的分子。同復制有關。例大腸桿菌中的DNA旋轉酶旋轉酶8、DNA解螺旋酶解螺旋酶解鏈酶(解鏈酶(DNAHELICASE通過水解通過水解ATP獲得能量來解開雙鏈獲得能量來解開雙鏈DNA。ECOLI中的中的REP蛋白就是解螺旋酶,還有解螺旋酶蛋白就是解螺旋酶,還有解螺旋酶I、II、III。REP蛋白沿蛋白沿3’5’移動,而解螺旋酶移動,而解螺旋酶I、II、III沿5’3’移動。移動。9、單鏈結合蛋白、單鏈結合蛋白SSBPSINGLESTRBINDINGPROTEIN穩(wěn)定已被解開的穩(wěn)定已被解開的DNA單鏈,單鏈,阻止復性和保護單鏈不被核酸酶降解。阻止復性和保護單鏈不被核酸酶降解。(三)(三)DNA的復制過程(大腸桿菌為例)的復制過程(大腸桿菌為例)雙鏈的解開雙鏈的解開RNA引物的合成引物的合成DNA鏈的延伸鏈的延伸切除切除RNA引物,填補缺口,連接相鄰的引物,填補缺口,連接相鄰的DNA片段片段1、雙鏈的解開、雙鏈的解開FTJU制有特定的起始位點,叫做復制原點。制有特定的起始位點,叫做復制原點。I或O)、富含、富含A、T的區(qū)段。的區(qū)段。
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    • 簡介:臨床分子生物學檢驗臨床分子生物學檢驗練習題及答案練習題及答案一名詞解釋1、基因能夠表達和產生蛋白質和RNA的DNA序列是決定遺傳性狀的功能單位2、端粒以線性染色體形式存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結構叫端粒該結構是一段DNA序列和蛋白質形成的一種復合體僅在真核細胞染色體末端存在3、啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列4、增強子位于真核基因中遠離轉錄起始點能明顯增強啟動子轉錄效率的特殊DNA序列它可位于被增強的轉錄基因的上游或下游也可相距靶基因較遠5、基因表達是指生物基因組中結構基因所攜帶的遺傳信息經過轉錄翻譯等一系列過程合成特定的蛋白質進而發(fā)揮其特定的生物學功能和生物學效應的全過程6、信息分子調節(jié)細胞生命活動的化學物質其中由細胞分泌的調節(jié)靶細胞生命活動的化學物質稱為細胞間信息分子而在細胞內傳遞信息調控信號的化學物質稱為細胞內信息分子7、受體是存在于靶細胞膜上或細胞內能特異識別生物活性分子并與之結合進而發(fā)生生物學效應的的特殊蛋白質8、分子克隆在體外對DNA分子按照即定目的和方案進行人工重組將重組分子導入合適宿主使其在宿主中擴增和繁殖以獲得該DNA分子的大量拷貝9、載體能在連接酶的作用下和外源DN段連接并運送DNA分子進入受體細胞的DNA分子當促使變性的因素解除后兩條DNA鏈又可以通過堿基互補配對結合形成DNA雙螺旋結構21、退火指將溫度降至引物的TM值左右或以下引物與DNA摸板互補區(qū)域結合形成雜交鏈22、定量PCR基因表達涉及的轉錄水平的研究常需要對MRNA進行定量測定對此采用的PCR技術就叫定量PCR23、基因表達是指生物基因組中結構基因所攜帶的遺傳信息經過轉錄翻譯等一系列過程合成特定的蛋白質進而發(fā)揮其特定的生物學功能和生物學效應的全過程24、基因治療一般是指將限定的遺傳物質轉入患者特定的靶細胞以最終達到預防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法25、管家基因在生物體生命的全過程都是必須的且在一個生物個體的幾乎所有細胞中持續(xù)表達的基因26、SD序列轉錄出的MRNA要進入核糖體上進行翻譯需要一段富含嘌呤的核苷酸序列與大腸桿菌16SRRNA3末端富含嘧啶的序列互補是核糖體的識別位點27、核酸探針探針是指能與某種大分子發(fā)生特異性相互作用并在相互作用之后可以檢測出來的生物大分子核酸探針是指能識別特異堿基順序的帶有標記的一段DNA或RNA分子28、周期蛋白是一類呈細胞周期特異性或時相性表達累積與分解的蛋白質它與周期素依賴性激酶共同影響細胞周期的運行二問答題1、影響DNA穩(wěn)定性的因素有哪些
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    • 簡介:醫(yī)學微生物學實驗,,第8次病毒學實驗,病毒培養(yǎng)(錄像)觀察正常細胞與病變細胞的鏡下特征(示教)病毒包涵體的鏡下特點(示教)血凝試驗(操作),血凝抑制實驗(結果示教),,病毒感染的致病機制,病毒感染對宿主細胞的直接作用殺細胞效應。CYTOPATHICEFFECT,CPE致細胞病變效應穩(wěn)定狀態(tài)感染包涵體INCLUSIONBODY形成細胞凋亡基因整合與細胞轉化病毒感染的免疫病理過程,,,CYTOMEGALOVIRUSINCLUSIONDISEASETHEINTRANUCLEARINCLUSIONBODYHASATYPICAL“OWLEYED”APPEARANCE,,,HISTOPATHOLOGICFEATURESOFRABIES,BRAINCHARACTERISTICNEGRIBODIESAREPRESENTWITHINAPURKINJECELLOFTHECEREBELLUMPATIENTDIEDOFRABIES,血凝試驗血凝抑制試驗,,,HEMAGGLUTININ,HAH1H15,NEURAMINIDASE,NAN1N9,血凝試驗HEMAGGLUTININTEST,HA,原理病毒表面血凝素與雞紅細胞表面糖蛋白受體發(fā)生結合而發(fā)生凝集檢測病毒的存在,滴定病毒的血凝效價,大致估計病毒顆粒的數(shù)量1個血凝單位=106病毒顆粒,操作,,,02棄去,結果觀察以發(fā)生50凝集者為該病毒血凝效價,其稀釋度即為一個血凝單位。,第一課件網網站WWW1KEJIANCOM,血凝抑制試驗HEMAGGLUTINININHIBITIONTEST,HI,原理特異性抗體與相應病毒結合,使病毒失去凝集紅細胞的能力,從而抑制血凝現(xiàn)象。檢測血清中是否存在抗體及抗體的效價對病毒進行分型,血凝抑制試驗,操作流感病人血清倍比稀釋151640200?L4個血凝單位病毒200?L1雞紅細胞200?L結果觀察完全抑制紅細胞凝集者為紅細胞凝集抑制效價。,,第8次病毒學實驗,病毒培養(yǎng)(錄像)觀察正常細胞與病變細胞的鏡下特征(示教)病毒包涵體的鏡下特點(示教)血凝試驗(操作),血凝抑制實驗(結果示教),,
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    • 簡介:分子生物學技術,分子雜交與印跡技術MOLECULARHYBRIDIZATIONANDBLOTTINGTECHNIQUE,核酸分子雜交NUCLEICACIDHYBRIDIZATION在DNA復性過程中,如果把不同DNA單鏈分子放在同一溶液中,或把DNA與RNA放在一起,只要在DNA或RNA的單鏈分子之間有一定的堿基配對關系,就可以在不同的分子之間形成雜化雙鏈HETERODUPLEX。,一、分子雜交與印跡技術的原理,(一)印跡技術,利用各種物理方法使電泳膠中的生物大分子轉移到NC等各種膜上,使之成為固相化分子。這一技術類似于用吸墨紙吸收紙張上的墨跡,因此稱之為“BLOTTING”,譯為印跡技術。,用放射性核素、生物素或熒光染料標記其末端或全鏈的已知序列的多聚核苷酸鏈被稱為“探針”,探針可以與固定在NC膜上的核苷酸結合,判斷是否有同源的核酸分子存在。,(二)探針技術,二、印跡技術的類別及應用,(一)DNA印跡SOUTHERNBLOTTING,(二)RNA印跡NORTHERNBLOTTING,(三)蛋白質的印跡WESTERNBLOTTING,用于基因組DNA、重組質粒和噬菌體的分析。,用于RNA的定性定量分析。,用于蛋白質定性定量及相互作用研究。,其他斑點印跡DOTBLOTTING原位雜交INSITUHYBRIDIZATIONDNA點陣DNAARRAYDNA芯片技術DNACHIP,三種印跡技術的比較,分子雜交實驗,①,②,③,,,放射自顯影照片,DNA芯片技術,PCR技術的原理與應用THEPRINCIPLEANDAPPLICATIONOFPCRTECHNOLOGY,,5?,PRIMER1,,5?,PRIMER2,,,,5?,5?,TEMPLATEDNA,,一、PCR技術的工作原理,,,,,,,,,,,,,,PCR技術原理示意圖,PCR的基本反應步驟,變性95?C,延伸72?C,退火TM5?C,,,,,模板DNA特異性引物耐熱DNA聚合酶DNTPSMG2,PCR體系基本組成成分,利用特異性引物以CDNA或基因組DNA為模板獲得已知目的基因片段,或與逆轉錄反應相結合,直接以組織和細胞的MRNA為模板獲得目的片段;利用簡并引物從CDNA文庫或基因組文庫中獲得序列相似的基因片段;利用隨機引物從CDNA文庫或基因組文庫中克隆基因。,二、PCR技術的主要用途,(一)目的基因的克隆,利用PCR技術可以隨意設計引物在體外對目的基因片段進行嵌和、缺失、點突變等改造。,PCR技術高度敏感,對模板DNA的量要求很低,是DNA和RNA微量分析的最好方法。,(三)DNA和RNA的微量分析,(二)基因突變,將PCR技術引入DNA序列測定,使測序工作大為簡化,也提高了測序的速度;待測DNA片段既可克隆到特定的載體后進行序列測定,也可直接測定。,PCR與其他技術的結合可以大大提高基因突變檢測的敏感性。,(四)DNA序列測定,(五)基因突變分析,逆轉錄PCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR,RTPCR是將RNA的逆轉錄反應和PCR反應聯(lián)合應用的一種技術。RTPCR是目前從組織或細胞中獲得目的基因以及對已知序列的RNA進行定性及半定量分析的最有效方法。,(一)逆轉錄PCR技術,三、幾種重要的PCR衍生技術,原位PCRINSITUPCR是在組織切片或細胞涂片上的單個細胞內進行的PCR反應,然后用特異性探針進行原位雜交,即可檢出待測DNA或RNA是否在該組織或細胞中存在。原位PCR方法彌補了PCR技術和原位雜交技術的不足,是將目的基因的擴增與定位相結合的一種最佳方法。,(二)原位PCR技術,(三)實時PCR技術,實時PCRREALTIMEPCR技術通過動態(tài)監(jiān)測反應過程中的產物量,消除了產物堆積對定量分析的干擾,亦被稱為定量PCR。,實時PCR技術原理,實時PCR分類,圖203TAQMAN探針法實時PCR原理示意圖,基因文庫GENELIBRARY,基因組DNA文庫GENOMICDNALIBRARYCDNA文庫CDNALIBRARY,基因文庫GENELIBRARY,是指一個包含了某一生物體全部DNA序列的克隆群體。,一、基因組DNA文庫,基因組DNA文庫是指生物的基因組DNA的信息(包括所有的編碼區(qū)和非編碼區(qū))以DNA片段形式貯存的克隆群體。,用于構建基因組文庫的載體有?噬菌體、粘粒和酵母人工染色體等。,基因組文庫和CDNA文庫的構建和篩選,第一輪篩選,第二輪篩選,第三輪篩選,基因組文庫篩選結果舉例,CDNA文庫是包含某一組織細胞在一定條件下所表達的全部MRNA經逆轉錄而合成的CDNA序列的克隆群體,它以CDNA片段的形式貯存著該組織細胞的基因表達信息。,二、CDNA文庫,生物芯片技術BIOLOGICALCHIPTECHNIQUE,是指將許多特定的DNA片段有規(guī)律地緊密排列固定于單位面積的支持物上,然后與待測的熒光標記樣品進行雜交,雜交后用熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進行掃描,通過計算機系統(tǒng)對每一位點的熒光信號做出檢測、比較和分析,從而迅速得出定性和定量的結果。該技術亦被稱作DNA微陣列DNAMICROARRAY。,一、基因芯片,基因芯片GENECHIP,基因芯片工作流程示意圖,是將高度密集排列的蛋白分子作為探針點陣固定在固相支持物上,當與待測蛋白樣品反應時,可捕獲樣品中的靶蛋白,再經檢測系統(tǒng)對靶蛋白進行定性和定量分析的一種技術。,二、蛋白質芯片,蛋白質分子間的親和反應,蛋白質芯片PROTEINCHIP,蛋白質芯片作用原理,生物大分子相互作用研究技術THEMETHODOFPROTEINPROTEINANDPROTEINDNAINTERACTIONSTUDY,一、蛋白質相互作用研究技術,酵母雙雜交各種親和分析(標簽蛋白沉淀、免疫共沉淀等)熒光共振能量轉換效應分析噬菌體顯示系統(tǒng)篩選,常用蛋白質相互作用的研究技術,標簽融合蛋白結合實驗是一個基于親和色譜原理的、分析蛋白質體外直接相互作用的方法。,(一)標簽蛋白沉淀,標簽融合蛋白結合實驗主要用于證明兩種蛋白分子是否存在直接物理結合、分析兩種分子結合的具體結構部位及篩選細胞內與融合蛋白相結合的未知分子。,標簽融合蛋白沉淀實驗流程示意圖,(二)酵母雙雜交技術的基本原理和用途,酵母雙雜交系統(tǒng)的應用,證明兩種已知基因序列的蛋白質可以相互作用的生物信息學推測。分析已知存在相互作用的兩種蛋白質分子的的相互作用功能結構域或關鍵的氨基酸殘基。將擬研究的蛋白質的編碼基因與BD基因融合成為“誘餌”表達質粒,可以篩選AD基因融合的“獵物”基因表達文庫,篩選未知的相互作用蛋白質。,(三)免疫共沉淀技術的基本原理和用途,免疫沉淀(IMMUNOPRECIPITATIONIP)免疫沉淀是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。利用抗體可與抗原特異性結合的特性,將抗原(常為靶蛋白)從混合體系沉淀下來。免疫共沉淀(COIMMUNOPRECIPITATION,COIP)免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。COIP與質譜分析以細胞內源性靶蛋白為誘餌,用抗靶蛋白抗體與細胞總蛋白進行免疫共沉淀純化靶蛋白免疫復合物,凝膠電泳分離后,質譜鑒定靶蛋白的結合蛋白,免疫沉淀原理圖解,免疫共沉淀原理圖解,免疫共沉淀原理圖解,蛋白A,蛋白B抗A抗體C進行洗脫抗B抗體D進行驗證,COIP與質譜分析流程,,電泳遷移率變動測定ELECTROPHORETICMOBILITYSHIFTASSAY,EMSA或稱凝膠遷移變動實驗GELSHIFTASSAY最初用于研究DNA結合蛋白與相應DNA序列間的相互作用,可用于定性和定量分析,已經成為轉錄因子研究的經典方法。目前這一技術也被用于研究RNA結合蛋白和特定RNA序列間的相互作用。,二、DNA蛋白質相互作用分子分析技術,(一)電泳遷移率變動測定,凝膠遷移實驗結果示意圖,染色質免疫沉淀技術CHROMATINIMMUNOPRECIPITATIONASSAY,CHIP是目前可以研究體內DNA與蛋白質相互作用的主要方法。,(二)染色質免疫沉淀法,染色質免疫沉淀實驗流程及結果示意圖,二、RNA蛋白質相互作用分子分析技術,RNA結合蛋白免疫沉淀(RNABINDINGPROTEINIMMUNOPRECIPITATION,RIP),是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術。應用范圍研究蛋白與DNA動態(tài)作用研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達之間的關系研究蛋白與RNA的相互作用,激光共聚集顯微鏡應用技術LASERSCANNINGCONFOCALMICROSCOPYLSCM,激光經放大、分光后由物鏡聚焦于焦平面上,同時,焦平面上被激光掃描的點F所發(fā)出的一定波長的熒光通過檢測針孔光欄達到檢測器,并成像于顯示器上,得到相應的熒光圖象。,激光共聚焦顯微鏡工作原理示意圖,人眼及各類顯微鏡分辯率,人眼分辯率020MM光學顯微鏡分辯率025UM共焦顯微鏡分辯率018UM電子顯微鏡分辯率020NM激光共聚焦顯微鏡有四個熒光通道,一個透射光通道,激光共聚焦顯微鏡的應用,定位、定量三維重組動態(tài)測量?活細胞或組織內游離CA2分布和濃度的變化測量MG2、ZN、NA、K?自由基的檢測?藥物進入細胞的動態(tài)過程、定位分布及定量?蛋白質的轉位活細胞內H濃度(PH值)的測量線粒體膜電位的測量熒光漂白恢復(FRAP)的測量籠鎖解籠鎖的測量熒光能量共振轉移(FRET)的測量其他應用,THANKYOU,
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