簡介：本實驗研究課題以人宮頸癌細胞株HELA為研究載體將ADAM10干擾質粒轉染進入HELA細胞中通過篩選獲得穩(wěn)定轉染的HELA細胞ADAM10基因沉默細胞系從而研究HELA細胞ADAM10基因沉默前后細胞活性的改變。目的通過研究ADAM10基因沉默前后的HELA細胞活性的改變找出ADAM10基因引起腫瘤細胞增殖遷移的作用靶點與可能作用機制為進一步的以ADAM10為核心的腫瘤治療提供更多可靠依據(jù)。方法制備可供轉染的高純度環(huán)狀干擾質粒熒光顯微鏡觀測轉染效率REALTIMEPCR檢測ADAM10基因表達WESTERNBLOTTING檢測ADAM10蛋白表達水平MTT法比較沉默前后HELA細胞增殖的變化TRANSWELL細胞侵襲實驗流式細胞計數(shù)法檢測細胞周期變化REALTIMEPCR檢測CD44、CD44V6、CYCLINA1CYCLIND1WESTERNBLOTTING檢測ERK、PERK。結果轉染后得到ADAM10沉默細胞系幾乎不表達ADAM10蛋白MTT法顯示沉默前后細胞增殖有顯著性差異TRANSWELL實驗結果顯示沉默前后細胞侵襲有顯著性差異流式細胞計數(shù)顯示沉默ADAM10基因后HELA細胞發(fā)生G1期阻滯沉默ADAM10基因后CD44基因表達無顯著性差異CD44V6基因表達下調CYCLINA1無顯著性變化CYCLIND1表達下調沉默ADAM10基因后WESTERNBLOTTING顯示ERK表達無顯著性差異PERK表達下調。結論1HELA細胞中ADAM10蛋白表達水平可以影響CD44V6的基因表達2沉默ADAM10基因后細胞的侵襲性顯著性降低可能是通過ADAM10蛋白表達水平影響CD44V6的基因表達。3沉默ADAM10基因后HELA細胞出現(xiàn)G1期阻滯細胞增殖速率降低4沉默ADAM10基因后HELA細胞出現(xiàn)G1期阻滯其機制可能與ADAM10調節(jié)細胞信號RAS通路引起PERK表達下降有關。

簡介：分類號學號學號D201078344學校代碼學校代碼10487密級密級博士學位論文博士學位論文結直腸癌中新的細胞亞群結直腸癌中新的細胞亞群NCCC的分離與生的分離與生物學物學功能的研究功能的研究申請人申請人姓名姓名閔江指導教師師龔建平龔建平教授教授學科專業(yè)業(yè)外科學外科學研究方向向胃腸腫瘤胃腸腫瘤論文起止時間論文起止時間20109－20134華中科技大學博士學位論文獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果的總結。盡我所知，除文中已經(jīng)標明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本人將承擔本聲明引起的一切法律后果。學位論文作者簽名日期年月日學位論文版權使用授權書學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權華中科技大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權書。本論文屬于不保密□。（請在以上方框內打“√”）學位論文作者簽名指導教師簽名日期年月日日期年月日

簡介：四川I大學博士學位論文題目墊蕉墮生絲緝絲生墊鱟塾廛盈甚握壹墊壁疸墊塹盟瘟塾魚墊堡盆塹作者塹塾完成日期2QQ量生壘目培養(yǎng)單位生全盤堂堂隆指導教師墊奎窒墮圭專業(yè)盈塹莖研究方向盤塹紐絲魚金量生塹鱟授予學位日期年月日四川大學博上學位論文胞周期、細胞凋亡率、細胞中的超氧化物歧化酶SUPEROXIDEDISMUTASESOD、丙二醛MALEICDIALDEHYDE，MDA的變化。結果發(fā)現(xiàn)，細胞膜受到～一定強度的電磁脈沖處理時，其通透性障礙受到抑制，細胞膜上出現(xiàn)微孔，微孔的直徑為LLM級，大小不等，分布不均勻，發(fā)生電穿孔的細胞幾率達到8963％。細胞膜的微絨毛受到損傷，細胞內容物噴出。細胞周期發(fā)生改變，其中G2期發(fā)生顯著改變。線粒體發(fā)生腫脹，嵴消失，內膜斷裂。細胞核出現(xiàn)染色質凝集，內質網(wǎng)腫脹。電磁脈沖處理后細胞的凋亡率提高78％，與對照組相比顯著提高PM05。通過檢測SOD活性和MDA濃度，發(fā)現(xiàn)電磁脈沖對細胞內的SOD活性和MDA的濃度沒有顯著性影響P005。在體外，將培養(yǎng)到對數(shù)生長期的S180肉瘤細胞隨機分為4組，即對照組、電療組、化療組和電化療組。然后分析各組細胞的細胞周期、凋亡率、SOD活性和MDA濃度。結果表明，電化療組、電療組、化療組、對照組的凋亡率分別為44131％、7119％、28324％、2516％，電化療組的凋亡率與化療組、電療組、對照組相比，顯著提高FP005。在體內，用昆明小鼠復制S180肉瘤模型，將荷有肉瘤的昆明小鼠隨機分為對照組、電療組、化療組和電化療組。此外，還用無腫瘤健康小鼠作為空白對照組。然后，檢91|I各組腫瘤抑癯率、治愈率、小鼠衄漿中的SOD、MDA、過氧化氫酶CATALASE，CAT、肝功、腎功、肝指數(shù)、脾指數(shù)，血液電導率和介電常數(shù)。通過免疫組化，檢測腫瘤組織中的血管內皮生長因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTORVEGF的表達以及腫瘤微血管的密度MICROVESSELDENSITYMVD。運用組織病理學切片技術觀察比較各組腫瘤組織的病理變化。結果表明，電化療組腫瘤抑瘤率、治愈率顯著高于化療組和電療組，表明電化療法能顯著提高抗腫瘤藥物的療效。通過分析，電化療組的治愈率比化療組和電療組的治愈率之和還高，表明電磁脈沖和抗腫瘤藥物相結合具有協(xié)同增效的作用。電化療組的超氧化物歧化酶和過氧化氫酶顯著提高，丙二醛的濃度顯著降低，提高了機體的抗氧化能力和減2

簡介：背景干細胞治療急性心肌梗死是近年來研究的熱點。脂肪源性間充質干細胞ADIPOSETISSUEDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，ADMSCS作為一種新的細胞工程的種子細胞因為取材方便、來源充足、更易被人們所接受等優(yōu)點逐漸被大家接受。國內、外對于ADMSCS的研究還外于起步階段，其治療機制的基礎研究還很有限，在臨床應用前尚有許多問題有待解決。目前干細胞移植治療心梗的可能機制主要有兩種1、MSCS可分化為心肌細胞。2、通過旁分泌生長因子如HGF、VEGF等來發(fā)揮作用。最近科學家們發(fā)現(xiàn)干細胞的分化能力存在性別差異，從雌性小鼠肌肉中提取的干細胞比雄性肌肉中提取的更易分化為身體組織。那么人干細胞是否也存在分化的性別差異呢性別或其它個體因素如年齡、是否有高血壓、糖尿病、冠心病等對于干細胞增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力等生物學特性是否有影響呢這些問題的解決對于了解ADMSCS本身的生物學特性，指導ADMSCS基礎研究和臨床應用具有十分重要的意義。目的一是要建立從人腹部皮下脂肪組織中分離、培養(yǎng)ADMSCS方法，并從表面標志物及多向分化潛能方面對其進行鑒定，為后續(xù)研究做準備。二是觀察比較不同人ADMSCS增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力的差別，從細胞水平探索ADMSCS是否存在個體差異，為今后干細胞的基礎研究及臨床應用提供一種新的視角。內容和方法根據(jù)以上目的，本研究分成為兩個部分第一部分研究人ADMSCS的分離及體外培養(yǎng)；并通過對獲取的細胞進行CD13、CD44、CD45、HLADR和VWF免疫組化細胞表面間充質干細胞相關標志的鑒定及成脂、成骨、成心肌多向分化潛能的檢驗來驗證其是否為間充質干細胞。第二部分對第一部分獲取的人ADMSCS分別采用MTT比色實驗、ELISA雙抗體夾心法、流式細胞計數(shù)技術來比較不同人ADMSCS在增殖、旁分泌、分化及抗凋亡能力方面的差別。結果從人腹部皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出長梭形細胞。這些細胞的細胞表面分子CD13、CD44皆陽性，CD45，HLADR、VWF均陰性；具有成脂、成骨、成心肌的多向分化能力。MTT比色實驗示人ADMSCS由OD值描繪的生長曲線大致形狀相似，呈S型。在第5D、7D、9D女性HADMSCS的OD值明顯高于相應的男性HADMSCSP＜001，同時年輕個體ADMSCS的OD值更高。經(jīng)10UMOLL5AZA誘導24小時后，流式細胞技術示女性HADMSCS的TNT的表達率普遍高于男性HADMSCS273％±24％VS189％±25％，P＜001，而且年輕個體的ADMSCS更容易被誘導并表達TNT。ELISA結果示女性HADMSCS分泌VEGF和HGF的能力要強于男性HADMSCS，前者為1582±132PG106個細胞VS1265±133PG106個細胞P＜001，后者為13316±1404PG106個細胞VS11790±1541PG106個細胞P＜001。用含500UMOLLH2O2的培養(yǎng)基誘導30分鐘后，流式細胞技術示女性HADMSCS的凋亡率低于男性HADMSCS1868％±135％VS2521％±157％，P＜001，同時年輕個體的AOMSCS更容易被誘導凋亡。結論1通過酶消化的方法成功地從人皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出具有多向分化潛能的ADMSCS。2HADMSCS在增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力上存在性別差異。年齡也是影響HADMSCS增殖、分化和凋亡的一個重要因素。個體本身的冠心病、高血壓、糖尿病狀況并不會影響其ADMSCS的生物學特性。

簡介：點擊查看更多人臍帶間充質干細胞生物學特性及體外轉化為神經(jīng)細胞的實驗研究.pdf精彩內容。

簡介：分類號密級UDC編號學位論文MICRNA134靶向靶向NANOG基因調控基因調控膠質瘤細胞生物學活性膠質瘤細胞生物學活性MICRNA134REGULATESBIOLOGICALACTIVITIESOFGLIOMACELLSVIAREDUCINGNANOGEXPRESSION楊洋指導教師姓名牛朝詩教授安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院神經(jīng)外科申請學位級別碩士專業(yè)名稱神經(jīng)外科提交論文日期2013年3月論文答辯日期2013年5月學位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學答辯委員會主席教授評閱人教授等2013年05月學位論文獨創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確說明并表示謝意。學位論文作者簽名日期學位論文使用授權聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定學校有權保留學位論文并向國家主管部門或其指定機構送交論文的電子版和紙質版，有權允許論文進入學校圖書館被查閱，有權將學位論文的內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，有權將學位論文的標題和摘要匯編出版。愿意將本人的學位論文提交中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國優(yōu)秀碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡及其他數(shù)字媒體形式公開出版，并同意編入CNKI中國知識資源總庫，在中國博碩士學位論文評價數(shù)據(jù)庫中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學位論文在解密后適用本規(guī)定。學位論文作者簽名導師簽名日期日期

簡介：復旦大學博士學位論文腦動靜脈畸形臨床病理與血管平滑肌細胞的相關生物學研究姓名曾濤申請學位級別博士專業(yè)神經(jīng)外科指導教師陳銜城20051101●●●◆復旦大學博士學位論文方法對經(jīng)伽瑪?shù)吨委煹?例CAVM患者的病理標本采用HE染色，并用。一平滑肌肌動蛋白SMA、增殖細胞核抗原PCNA、骨橋蛋白OPN及血管內皮生長因子VEGF等抗體進行免疫組化研究，其中1例作透射電鏡檢查。結果CAVM在伽瑪?shù)吨委熜g后進行性的血管病理變化包括內皮細胞損傷、內膜增厚，管壁增厚，管腔狹窄。繼之管壁玻璃樣變，管腔逐漸消失。玻璃樣變的管壁或閉塞的管腔可以出現(xiàn)管腔再通。OPN、PCNA在表現(xiàn)為早期放射反應的動脈管壁中有強表達，在晚期放射反應的血管中表達消失；電鏡檢查發(fā)現(xiàn)，內皮細胞損傷脫落，內彈力層分層或者斷裂，血管平滑肌細胞分布不規(guī)則。內膜下、血管中膜及外膜大量膠原沉著為電鏡檢查的特征；L例標本見內皮細胞PCNA及VEGF陽性染色的網(wǎng)狀毛細血管樣血管。結論放射治療后CAVM血管中層的VSMC增生，部分轉變?yōu)楹铣杀硇?。VSMC的遷移、增生是伽瑪?shù)吨委熀蠊芮贿M行性狹窄的關鍵因素。關鍵詞嚙動靜脈琦形；放射外科伽瑪?shù)恫±鞷免疫組織化學第三部分骨橋蛋白在腦動靜脈畸形中的表達及意義目的骨橋蛋白OPN的表達是合成型血管平滑肌細胞的標志，也是血管主要細胞成分的重要趨化因子和黏附分子，在病理性血管重塑過程中起重要作用。本研究旨在探討OPN在人腦動靜脈畸形CAVM血管組織及其在立體定向伽瑪?shù)斗派?、血管內栓塞治療后的表達情況并探討其意義。方法42例其中5例經(jīng)過伽瑪?shù)斗派渲委?，LL例經(jīng)歷過血管內栓塞治療手術切除的CAVM病理標本進行HE及免疫組化染色分析，并檢測畸形血管中OPN的表達情況。結果26例無術前治療史的畸形血管組織中22例OPN有不同程度的表達，主要表達在CAVM的靜脈部分，尤多見于管壁不規(guī)則增厚的靜脈。在類似粥樣硬化樣的動脈處也有表達。正常腦組織的血管中未見有OPN的表達，表明CAVM血管中有部分VSMC轉變?yōu)楹铣杀硇?。按有無出血史及畸形血管團大小分組進行對比分析，未發(fā)現(xiàn)組間有顯著性差異經(jīng)歷伽瑪?shù)吨委煹?例中，2例在早期及中期放射反應的動脈中可見OPN的較強陽性表達。在經(jīng)歷栓塞治療的11／N中，7FF『J在新生內膜組織或者異物巨細胞中見至IJOPN的陽性表達。結論OPN在人CAVM血管組織中多有表達，這是CAVM的血管適應血流動力學狀態(tài)而具有的血管重塑的特征性表現(xiàn)。在放射、血管內栓塞治療后的血管組織中的表達提示它對血管重塑可能發(fā)揮重要作用。關鍵詞』鎣塾靜脈畸形骨橋蛋白確瞬軻卜崩塞一

簡介：分類號分類號密級密級UDC編號編號碩士學位論文碩士學位論文DADS對DJ1核定位高表達人白血核定位高表達人白血病HL60細胞生物學行為的影響細胞生物學行為的影響研究生姓名秦晶導師姓名、職稱譚暉副教授學科、專業(yè)名稱病理學與病理生理學研究方向白血病防治的分子機制2014年05月本研究基金資助項目本研究基金資助項目1、國家自然科學基金2、湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金8110037511K057

簡介：人類胚胎干細胞HUMANEMBROYNICSTEMCELLS，HESCS及人類誘導性多能干細胞INDUCEDHUMANPLURIPOTENTSTEMCELLS，HIPSCS具有無限增殖及多向分化潛能，這不僅為再生醫(yī)學研究提供了潛在的細胞來源，而且為建立疾病特異性疾病模型開展研究，以及最終的個體化治療提供了良好的物質基礎。由HESCS分化而來的造血干細胞已經(jīng)被成功地誘導分化為具有功能的紅細胞、中性粒細胞、血小板、巨核細胞、單核細胞、樹突狀細胞DC、自然殺傷細胞NK和功能未確定的T、B淋巴細胞，而從HESCS分化誘導嗜堿性粒細胞的相關工作至今尚無報道。嗜堿性粒細胞BASOPHILS是起源于骨髓多能造血干細胞，在骨髓內分化成熟后進入外周血的一類細胞群。其表型及其部分特性和嗜酸性粒細胞以及肥大細胞相似。嗜堿性粒細胞在介導過敏反應與發(fā)揮免疫調節(jié)作用中具有重要的功能，并且在增強免疫應答記憶等方面發(fā)揮作用。鑒此，探討嗜堿性粒細胞分化發(fā)育途徑涉及調控機制具有重要的理論和研究價值。嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和肥大細胞均具有相似的細胞表型和功能。這三種細胞的早期發(fā)育至今都存在著爭議。有研究表明，嗜堿性粒細胞早期與嗜酸性粒細胞一起發(fā)育，也有研究認為嗜堿性粒細胞與肥大細胞的早起發(fā)育是一條途徑。因此從HESCSHIPSCS向嗜堿性粒細胞分化發(fā)育的研究將有助于解決這一科學問題的價值。鑒此，本研究探索性建立由HESCSHIPSCS來源的、誘導分化成熟的嗜堿性粒細胞的培養(yǎng)方法，在此基礎上對其生物學功能進行初步探討。第一部分HESCSHIPSCS向早期造血干細胞分化及其生物學特性目的建立HESCSHIPSCS向早期造血干細胞分化的方法，并對HESCSHIPSCS誘導分化的造血干細胞生物學特性進行比較。方法①從小鼠胚胎中分離培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維母細胞（MOUSEEMBRYNICFIBROBLAST，MEF）細胞，體外擴增，并作為滋養(yǎng)層與人類胚胎干細胞系H1，人類誘導性多能干細胞G1、G4、B6、B7共培養(yǎng)保持其生長和未分化能力。②用未分化的HESCSHIPSCS分別與小鼠主動脈性腺中腎區(qū)AGM成纖維細胞共培養(yǎng)，誘導分化成早期造血干細胞。③經(jīng)流式細胞儀檢測分析這幾組誘導分化后的早期造血干細胞表面標志物特征。④經(jīng)PTPCR檢測HESCS誘導的早期造血干細胞的基因表達。結果①經(jīng)體外分離、消化、傳代培養(yǎng)出大量的MEF細胞，作為HESCSHIPSCS的滋養(yǎng)層細胞，促使其快速生長繁殖而不分化。②經(jīng)未分化的HESCSHIPSCS與小鼠AGM成纖維細胞共培養(yǎng)誘導14D后，可以成功誘導出大量的早期造血干祖細胞。③通過流式檢測分析，發(fā)現(xiàn)經(jīng)本實驗誘導培養(yǎng)的早期造血干祖細胞具有向紅系、內皮系、髓系等細胞分化的能力，進一步證實了本實驗所采用培養(yǎng)方法能大量有效誘導出早期二次造血干祖細胞。④經(jīng)過RTPCR的檢測發(fā)現(xiàn)本實驗的誘導培養(yǎng)方法早在共培養(yǎng)階段就可以檢測到早期造血調控所必須的基因CD34、CKIT、GATA1的表達，進一步證實了本方法誘導培養(yǎng)出早期造血干祖細胞的有效性。結論通過HESCSHIPSCS與小鼠AGM成纖維細胞共培養(yǎng)方法可以大量、有效地誘導出早期的二次造血干細胞。第二部分HESCSHIPSCS向成熟嗜堿性粒細胞誘導分化及生物學特性目的建立人類胚胎干細胞誘導性多潛能干細胞向嗜堿性粒細胞分化的方法，并鑒定其極其生物學特性。探討由人類胚胎干細胞經(jīng)分化得到的嗜堿性粒細胞的趨化能力及釋放組胺功能。方法①經(jīng)過不同細胞因子的三階段的誘導法得到一定量的含有堿性顆粒的粒細胞。②通過光學顯微鏡觀察，對細胞的增殖進行計算統(tǒng)計利用MAYGIEMASA、TOLUIDINEBLUE染色對細胞大體形態(tài)染色觀察免疫熒光染色對其細胞顆粒進行特異性的染色，并且將其與嗜酸性粒細胞作比較，證實所誘導的細胞為嗜堿性粒細胞。③通過FACS和半定量RTPCR對培養(yǎng)的細胞進行表型和基因檢測，同時用嗜酸性粒細胞作為對照進行比較性研究。④用不同濃度的N甲?；琢蝓Ａ涟滨１奖滨０稦MLP，嗜酸性粒細胞趨化因子EOTAXIN，F(xiàn)CΕRICRA1置于TRANSWELL板下室，觀察細胞嗜堿性粒細胞的趨化能力，并且與嗜酸性粒細胞進行比較研究。⑤用不同濃度的FMLP，EOTAXIN、FCΕRICRA1置于TRANSWELL板下室，觀察嗜堿性粒細胞的趨化能力，并且與嗜酸性粒細胞進行比較研究。⑥用不同濃度的FCΕRICRA1在液體培養(yǎng)第14天與第21天刺激嗜堿性粒細胞，收集上清，并裂解細胞，收集細胞內含有的因子。用ELISA檢測試劑盒檢測胞內和分泌組胺量，并算出組胺釋放率。結果①經(jīng)過誘導培養(yǎng)3天后開始大量增殖，7天開始增殖速度明顯加快，一般在兩周達到細胞增殖的高峰，兩周后鏡下觀察，細胞呈不規(guī)則且顆粒粗大。②MAYGIEMASA染色可見大約214％的細胞呈現(xiàn)胞體不規(guī)則形，胞漿胞內可見粗大的藍紫色顆粒，胞核為單核或者分葉兩葉核約419％的細胞胞內含有紫紅色的異染顆粒免疫熒光染色可見此類細胞，胞內顆粒表達2D7但不表達EPO，高表達PROMBP而低表達MBP。③HIPSCS來源細胞向嗜堿性粒細胞誘導后，2D7EPO的細胞比例遠高于HESCSH1來源的細胞PROMBP陽性率高于HESCS，而MBP陽性率卻比HESCS低。④通過FACS分析，發(fā)現(xiàn)細胞表面有嗜堿性粒細胞特異性標志的表達，并且RTPCR的檢測也證實這些細胞不含有嗜酸性粒細胞的基因。⑤趨化實驗發(fā)現(xiàn)，嗜堿性粒細胞比嗜酸性粒細胞的趨化功能更強。⑥嗜堿性粒細胞能有效地釋放組胺，而且在液體培養(yǎng)第21天的釋放量比第14天多。結論通過細胞因子的三步誘導方法可以從HESCS成功有效地誘導得到一定比例的成熟的嗜堿性粒細胞，并且在HIPSCS的誘導實驗中也得到了驗證。此嗜堿性粒細胞具有其特有的趨化功能，并且經(jīng)FCΕRⅠ刺激能釋放組胺。本研究證實了該誘導方法可靠，這對嗜堿性粒細胞相關疾病研究和藥物開發(fā)建立了特異性疾病模型，具有重要的理論價值。

簡介：獨創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得注；如沒查其他盂要掛別直明數(shù)奎攔互窒或其他教育機構的學位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名宿琴Z變、簽字日期鐘么月，日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解桂林醫(yī)學院有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權桂林醫(yī)學院可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同時授權中國學術期刊光盤版電子雜志社、中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。保密的學位論文在解密后適用本授權書學位論文作者簽名旃查＼導師簽字乏歌簽字日期晰‘月歹日簽字日期杖。腳年6月√日NFKB沉默對鼻咽癌58F細胞的生物學作用研究中文摘要目的構建人NFKB基因小干擾RNASIRNA重組質粒表達載體，沉默人鼻咽癌58F細胞中NFKBP65基因的表達，探明NFKB在鼻咽癌中的生物學作用，為鼻咽癌防治提供實驗依據(jù)。方法1根據(jù)GENBANK中人NFKBP65的表達序列，設計、合成NFKB特異性干擾序列SINFKB，同時合成陰性序列HK，合成的干擾序列的正義鏈和反義鏈退火合成雙鏈DNA干擾片段，將干擾DNA片段亞克隆到PGENESI卜I2質粒表達載體上，構建重組NFKBP65特異性抑制的質粒表達載體PGENESIL一12一NFKB和重組陰性表達質粒載體PGENESIL一12一HK。2將構建的重組質粒表達載體PGENESIL一12一NFKB、PGENESIL一12HK分別轉入JML09菌株進行擴增培養(yǎng)，提取質粒并純化。3應用脂質體將重組質粒表達載體PGENESIL一12一NFKB、PGENESIL一12HK分別轉染人鼻咽癌58F細胞，顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)，分析轉染效率。4實驗設空白對照組未轉染載體的58F細胞、陰性對照組轉入PGENESIL一12一HK質粒表達載體的58F細胞，實驗組轉入PGENESIL一12一NFKB質粒表達載體的58F細胞。轉染48H后采用WESTERNBLOTTING方法檢測鼻咽癌細胞中NFKBP65基因的蛋白表達水平。采用MTT及流式細胞儀分析NFKB沉默對鼻咽癌58F細胞的增殖抑制作用以及對細胞周期的影響。結果1成功構建PGENESI卜12一NFKB重組質粒表達載體。2與對照組和陰性對照組比較，轉入PGENESIII2一NFKB重組質粒表達載體的58F細胞，NFKBP65蛋白表達明顯下降，對照組與陰性對照組比較，58F細胞NFKBP65蛋白表達無明顯差異。說明NFKBP65SIRNA能抑N58F

簡介：第三軍醫(yī)大學博士學位論文RUNX3基因對胃癌細胞生物學行為的影響及其機制姓名王國安申請學位級別博士專業(yè)內科學（消化系病）指導教師房殿春20080501第二軍醫(yī)大學L尊十學位論文度明顯減慢。PADEASY一卜RUNX3A、PADEASY一1一RUNX3B組PI值分別明顯低于MKN28、PADEASY一1組。PADEASY一卜RUNX3A和PADEASY一卜RUNX3B組細胞穿膜細胞數(shù)較MKN28細胞和PADEASY一1組顯著降低83．1±9．7，87．6±10．4VS192．8±9．7，193．6±9．3，P0．05。6RUNX3可導致胃癌細胞VEGFCMRNA表達水平明顯下降，ENDOSTATINMRNA表達水平明顯上調。7RUNX3可導致胃癌細胞ECADHERIN、TIMP一1MRNA表達水平明顯上調，MMP7MRNA表達水平明顯下降。8RUNX3可導致胃癌細胞突變型P53和MRPLMRNA表達水平明顯下降。結論1RUNX3可能導致VEGFC表達下降、ENDOSTAIN表達增加、血管生成減少。2RUNX3可能導致ECAD、TIMP一1表達增加、MMP一7表達減少。胃癌細胞侵襲能力減弱。3RUNX3可能導致突變型P53和MPRL表達減少，導致胃癌細胞增殖減慢、凋亡加速，耐藥性減弱。4RUNX3會導致胃癌細胞增殖減慢，凋亡增加，侵襲和轉移能力減弱。關鍵詞胃癌；RUNX3；VEGFC；ENDOSTATIRL；CD34；ECAD；MMP一7；TIMP一1；MTP53；MRPL；PADEASY一17

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文食管腫瘤干細胞分離及生物學性狀的初步研究姓名孫志剛申請學位級別博士專業(yè)外科學（胸心外科）指導教師張寶仁徐志云20070501

簡介：分類號密級UDC學號南昌大學專業(yè)學位研究生學位論文紫外線輻射誘導紫外線輻射誘導DNA損傷時損傷時ROCK2磷酸化位點的鑒定及對肝癌細胞生物學活性影響的研究磷酸化位點的鑒定及對肝癌細胞生物學活性影響的研究THERESEARCHONTHEIDENTIFICATIONOFROCK2PHOSPHYLATIONSITESITSEFFECTONTHEBIOLOGICALACTIVITYOFHEPATOMACELLSINUVRADIATIONINDUCEDDNADAMAGE黃子曦黃子曦培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學第二附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱邵江華教授申請學位的學科門類醫(yī)學學科專業(yè)名稱外科學（普通外科）論文答辯日期2014年6月6日答辯委員會主席評閱人2014年6月摘要II摘要目的目的通過鑒定ROCK2磷酸化位點來研究其對肝癌細胞生物學活性的影響，并明確ROCK2在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法方法1通過磷酸化位點預測軟件以及生物信息學分析ROCK2結構，并設計可能發(fā)生磷酸化位點的磷酸化多肽。2分別對HEPG2細胞和MHCC97H細胞進行UV照射，通過WESTERNBLOT分析ROCK2可能發(fā)生磷酸化的位點。3應用平板克隆形成實驗和細胞凋亡實驗，觀察UV輻射誘導DNA損傷時，ROCK2磷酸化位點對肝癌細胞生物學活性的影響。結果結果1ROCK2可能發(fā)生磷酸化的位點有1S4422S7713T814。2UV照射后，ROCK2的T814位點發(fā)生磷酸化。3UV照射后，MTROCK2組的克隆形成率比WTROCK2組低。4UV照射后，MTROCK2組的細胞凋亡率比WTROCK2組高。結論結論1UV輻射誘導DNA損傷時，ROCK2的T814位點發(fā)生磷酸化。2ROCK2的T814位點磷酸化對UV造成的DNA損傷具有修復作用。關鍵詞關鍵詞原發(fā)性肝細胞癌；ROCK2；DNA損傷；磷酸化；UV

簡介：背景作為最常見的神經(jīng)上皮性腫瘤，星形細胞瘤通常具有無限增殖和侵襲性生長的特點，盡管目前已有多種治療手段，但該病的整體預后仍欠佳，因而仍有必要深入研究其腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制以尋找新的有效治療靶點。P38Γ是P38MAPK（絲裂原活化蛋白激酶）的四個亞型之一，正常情況下僅表達于骨骼肌組織。近年來的一些研究發(fā)現(xiàn)P38?？赡軈⑴c一些潛在的細胞惡性轉化的調節(jié)過程，表明其在腫瘤的發(fā)生和進展過程中潛在的致瘤性，但具體作用機制仍然不明。目前國內外尚未有研究揭示P38Γ在人腦星形細胞瘤組織中的表達情況及其對腫瘤生物學行為的影響。目的探討P38Γ在人腦星形細胞瘤組織中的表達情況及與各項臨床病理指標的關系。構建沉默人P38?；虮磉_的SIRNA序列并篩選出有效SIRNA序列，為后續(xù)體外實驗研究P38Γ的生物學功能提供基礎。探討P38Γ對膠質瘤細胞增殖、凋亡、遷移、侵襲等多種生物學特性的影響及相關的作用機制。方法標準化采集61例人星形細胞瘤和5例非腫瘤性腦組織標本，分別用WESTERNBLOT及免疫組化法檢測前述標本中P38Γ和HTERT蛋白的表達差異，分析P38Γ表達水平與星形細胞瘤患者各項臨床病理指標的關系。設計針對P38Γ的SIRNA片段（3對），借助LIPOFECTAMINETM2000轉染入人膠質瘤U251細胞，使用熒光定量REALTIMEPCR及WESTERNBLOT評價沉默效率，篩選出最有效的干擾序列用于后續(xù)實驗。運用CCK8、流式細胞術、TRANSWELL實驗等技術觀察SIRNA沉默P38Γ后U251細胞增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的變化。同時為研究前述變化的具體作用機制，檢測HTERT、MMP2及MMP9蛋白含量WESTERNBLOT，端粒酶活性（TRAPPCR銀染法），CASPASE39酶活性（分光光度法）及細胞骨架形態(tài)（免疫熒光染色）。結果1與非腫瘤性腦組織相比，星形細胞瘤中P38Γ蛋白的表達明顯升高，且在高級別星形細胞瘤中表達量高于低級別星形細胞瘤P＜005。HTERT蛋白的表達規(guī)律亦如此，且與P38Γ蛋白的表達水平呈正相關P＜001。但P38Γ表達水平與患者年齡、性別及腫瘤直徑不相關P＞005。2REALTIMEPCR和WESTERNBLOT分析顯示，三組P38ΓSIRNA干擾序列轉染U251細胞后，P38ΓMRNA和蛋白表達均受到抑制P＜005。其中SIRNA3片段（針對1168位點）沉默效率最高，與空白及陰性干預對照組相比，其P38ΓMRNA抑制率達（927±112）％，P38Γ蛋白表達下降達（622±129）％P＜001。3U251細胞轉染P38ΓSIRNA后，其細胞增殖率為（470±23）％凋亡率為（1197±041）％，與空白及陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義P＜001。SIRNA沉默P38?；虻腢251細胞中HTERT蛋白表達受到明顯抑制，端粒酶活性顯著下降，CASPASE39酶活性顯著上升，與另外兩組相比，差異有統(tǒng)計學意義P＜001。4U251細胞轉染P38ΓSIRNA后，遷移穿膜細胞數(shù)為440±10，侵襲穿膜細胞數(shù)為306±09，與空白及陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義P＜001。免疫熒光顯微鏡下可見，抑制P38Γ表達的U251細胞中肌動蛋白細胞骨架明顯紊亂，稀疏，成束性結構減少。侵襲相關蛋白MMP2和MMP9蛋白的表達相比另外兩組均下降P＜001。結論1P38Γ蛋白在人腦星形細胞瘤中異常高表達，且其表達水平與腫瘤惡性程度呈正相關。2U251細胞中的P38Γ因SIRNA干擾而下調后，可能經(jīng)由抑制HTERT表達進而降低端粒酶活性，從而起到抑制U251細胞增殖，促進其凋亡的作用。3U251細胞中的P38Γ被SIRNA沉默后，可能通過紊亂肌動蛋白細胞骨架結構，下調侵襲相關蛋白MMP2和MMP9的表達來降低U251細胞的遷移侵襲能力。4P38Γ在人腦星形細胞瘤中扮演瘤基因的角色，可能是潛在的膠質瘤診斷和治療靶點。

簡介：目的通過研究不同代次人髓核細胞的形態(tài)、增殖活性和表型表達變化，篩選出組織工程椎間盤研究適宜的種子細胞，并研究轉化生長因子Β1TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1，TGFΒ1和胰島素樣生長因子1INSULINLIKEGROWTHFACT1，IGF1對髓核細胞增殖和表型表達的影響，探討TGFΒ1和IGF1在組織工程椎間盤研究中的應用價值，通過制備聚乳酸羥基乙酸PLGA三維框架，將種子細胞與框架結合，體外構建組織工程椎間盤。方法1從人正常和退變髓核組織分離培養(yǎng)髓核細胞，分別取不同代次細胞作為研究對象，通過光鏡和電鏡下觀察細胞形態(tài)，對生長曲線、MTT攝取等進行測定，RTPCR方法測定細胞的聚集蛋白聚糖AGGRECAN、Ⅰ型和Ⅱ型膠原蛋白MRNA的表達，來確定組織工程椎間盤的種子細胞。2將人正常傳2代髓核細胞作為研究對象，采用MTT二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽法和RTPCR技術，探索TGFΒ1和IGF1對細胞的形態(tài)、增殖以及Ⅱ型膠原和AGGRECAN的調節(jié)作用，及其時效與量效的關系。3將人正常髓核細胞種植于聚乳酸羥基乙酸PLGA三維多孔框架，構建了組織工程椎間盤，通過MTT攝取、激光共聚焦熒光顯微鏡及掃描電鏡的方法進行體外觀察。結果1體外培養(yǎng)條件下，可見退變髓核細胞排列較紊亂，粗面內織網(wǎng)輕度擴張。在接種相同的細胞密度和相同的培養(yǎng)條件下，成人正常和退變髓核細胞的生長曲線存在差異；二者的MTT攝取在傳1代時差異均無顯著性P＞005，傳3、5代時差異具有統(tǒng)計學意義P＜005。不同代次正常髓核細胞比較，傳3代之前細胞形態(tài)良好，從傳4代起，部分細胞向長梭形演化，粗面內質網(wǎng)擴張。生長曲線和MTT試驗提示傳3代之前的細胞增殖能力強。RTPCR實驗提示，正常髓核細胞前3代表達Ⅱ型膠原和AGGRECAN旺盛，從傳4代起開始減少，其中AGGRECAN減少更明顯；退變髓核細胞不僅表達Ⅱ型膠原和AGGRECAN，而且表達少量Ⅰ型膠原。2在1％血清條件下，TGFΒ1具有促增殖作用。在10％血清條件下，TGFΒ1和IGF1均能提高細胞的增殖活性，并且在各自一定的濃度范圍內呈劑量效應關系。二者聯(lián)合應用作用效果更顯著。10UGL、100UGLTGFΒ1組和100UGLIGF1在促進AGGRECAN和Ⅱ型膠原基因表達方面也作用顯著，其中，10UGL組TGFΒ1作用最明顯。3細胞種植于PLGA框架后，行MTT攝取實驗提示細胞框架復合體呈深藍著色，縱行剖開，可見藍色晶體均勻分布于整個材料支架內部。激光共聚焦熒光顯微鏡觀察可見大量紅色熒光著色的細胞貼附于支架結構內，掃描電鏡可見大量細胞貼附于支架內，并可見少量細胞外基質分泌。結論1本研究提示成人正常髓核細胞傳代后前3代細胞形態(tài)良好，增殖能力強，AGGRECAN和Ⅱ型膠原MRNA表達良好，適合作為組織工程椎間盤的種子細胞，而退變髓核細胞由于細胞活性較低，表型表達發(fā)生改變，不宜作為種子細胞。2TGFΒ1和IGF1對人正常髓核細胞具有維持形態(tài)、促進增殖和正常表型表達的作用，其中10UGLTGFΒ1和100UGLIGF1作用最顯著。3以人正常髓核細胞作為種子細胞，以PLGA作為三維框架，二者復合后細胞能夠在支架材料內貼附、生長，為進一步體內修復研究奠定良好的基礎。