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1、目的:應(yīng)用磁珠分選法(MACS)分離人食管腫瘤細(xì)胞(ECCs)中p75NTR陽性細(xì)胞,并研究其生物學(xué)特性。方法:從人原發(fā)食管癌組織中培養(yǎng)出可連續(xù)傳代的腫瘤細(xì)胞系;應(yīng)用 FACS檢測ECCs中p75NTR陽性細(xì)胞,并應(yīng)用MACS分離ECCs中p75NTR陽性細(xì)胞;觀察p75NTR陽性細(xì)胞生長特點、軟瓊脂克隆形成能力、在無血清培養(yǎng)基(SFM)中形成細(xì)胞球的能力,及其在裸鼠體內(nèi)成瘤能力;檢測在SFM中ECCs所形成細(xì)胞球中p75NTR陽性細(xì)胞
2、的比例及生長特點;檢測ECCs在化療藥物作用不同時間檢測其中p75NTR陽性細(xì)胞比例的變化,及p75NTR陽性細(xì)胞與陰性細(xì)胞在不同濃度化療藥物作用48小時后存活比例的比較。結(jié)果:應(yīng)用Ⅱ型膠原酶消化法從人原發(fā)食管腫瘤組織中培養(yǎng)出6個可連續(xù)傳代的EC細(xì)胞系;應(yīng)用FCM檢測ECCs中p75NTR陽性細(xì)胞為0~3.35%,MACS分選出ECCs中p75NTR陽性細(xì)胞,同收率為20%,純度為90%以上;p75NTR陽性細(xì)胞在軟瓊脂中具有較強的克隆
3、形成能力,并能在SFM中懸浮生長、形成細(xì)胞球,具有較強的致瘤能力,只需2×10<'3>個細(xì)胞即可在裸鼠體內(nèi)形成新的腫瘤;ECCs在SFM中可懸浮生長并形成細(xì)胞球,在所形成的細(xì)胞球中p75NTR陽性細(xì)胞的比例升高;ECCs在經(jīng)化療藥物作用后p75NTR陽性細(xì)胞的比例明顯增高(P<0.01),在不同濃度化療藥物作用48h后p75NTR陽性細(xì)胞存活比例較陰性細(xì)胞相比明顯增高(P<0.05)。結(jié)論:應(yīng)用 MACS 從ECCs中分離出的p75NT
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