簡介：該課題所研究的新分子RAB7B是在對人樹突狀細胞DENDRITICCELLDC的CDNA文庫隨機大規(guī)模測序中發(fā)現的我們通過5RACE獲得了全長基因的編碼序列然后利用DC的反轉錄產物模板克隆了RAB7B的全長CDNA已經在GENBANK登錄基因登錄號為AF094596RAB7BCDNA全長1571BP開放閱讀框600BP編碼199個氨基酸預計分子量為225KDA蛋白序列比較發(fā)現此蛋白和另一個定位于晚期內吞體的人源RAB7蛋白有很高的一致性因此我們把它命名為RAB7B通過同源性搜索在核酸水平上與人BC017092和鼠BC019395克隆分別有99％和85％的同源性蛋白水平上與人RAB7分別有超過50％的一致性和65％的相似性同時我們也發(fā)現一個鼠源的和人源RAB7B有92％相似程度的蛋白可能是鼠源的RAB7B同源性蛋白總之我們發(fā)現和克隆了一個新的RABGTPASE在基因和蛋白水平上與人RAB7有較高的的同源性命名為RAB7B初步的生物學功能研究提示定位在溶酶體可能參與胞內囊泡運輸的晚期階段在髓系細胞的單核細胞分化階段表達增加目前RAB7B的具體功能及作用機制還不明確還需大量精細的工作除了以上的工作外我們已構建了RAB7B不同功能域的定點突變體以準備進一步的研究

簡介：點擊查看更多阿爾茨海默病大鼠模型的磁共振、行為學、電生理、形態(tài)學和分子生物學研究.pdf精彩內容。

簡介：本文主要從以下幾個部分展開論述第一部分眼咽肌病綜合癥患者的臨床特點分析本研究選取19952013年間于山東大學齊魯醫(yī)院和北京大學第一醫(yī)院神經內科就診的18個眼咽肌病綜合癥家系。所有先證者均行肌肉組織冰凍病理檢查及PABPN1基因篩查。根據PABPN1基因篩查結果，明確13個家系共34例患者為OPMD，5個家系共21例患者經基因篩查未發(fā)現PABPN1突變，診斷為OPDM。OPMD組患者平均起病年齡為472±112歲（2767歲）。最常見的首發(fā)癥狀為吞咽困難，占53％1834，平均起病年齡為448±107歲其次為眼瞼下垂，占26％934，平均起病年齡為578±77歲。以吞咽困難為首發(fā)癥狀的患者較以眼瞼下垂首發(fā)的患者起病早P00036。截止到最后一次隨訪，入組患者平均病程為155±126年（153年），79％2734的患者出現眼瞼下垂，由此導致的視野受損成為本組患者中最大的困擾88％3034出現吞咽困難53％1834出現眼外肌麻痹41％1434出現肢體無力，皆以近端為主。同一家系內部在首發(fā)癥狀及受累肌肉分布特點方面有高度的一致性。OPDM組患者平均起病年齡為264±587歲（2239歲）。本組患者中，最常見的首發(fā)癥狀是四肢肌無力，占38％821。截止到最后一次隨訪，入組患者平均病程為156±899年（134年），95％2021的患者出現眼瞼下垂和眼外肌麻痹52％1121出現吞咽困難，4例患者后期僅能進食半流質57％1221出現肢體無力，皆首先累及肢體遠端，其中5例患者在起病12～15年后喪失獨立行走能力，需依賴輪椅。以四肢肌無力首發(fā)的家系普遍進展較快，2例患者在起病后17年（40歲）由于OPDM相關的吸入性肺炎及營養(yǎng)不良死亡。同一家系內部在起病年齡、首發(fā)癥狀及進展速度上具有一致性。第二部分眼咽肌病綜合癥患者的肌肉病理特點分析18個家系的先證者均行肌肉組織冰凍病理檢查。肌肉標本常規(guī)行組織學、酶組織化學和免疫組織化學染色，包括蘇木素伊紅HE、改良GOMI三色MGT、高碘酸SCHIFF反應PAS、油紅“O”脂肪染色O、還原型輔酶Ⅰ四氮唑還原酶NADHTR、琥珀酸脫氫酶SDH、細胞色素C氧化酶COX、三磷酸腺苷酶ATPASE（PH43，46，104和106）、DYSTROPHIN蛋白（C端，N端，ROD）、DYSFERLIN蛋白、（Α，Β，Γ，Δ）SARCOGLYCAN蛋白和CAVEOLIN3蛋白染色。其中部分先證者（7例OPMD患者及3例OPDM患者）接受電鏡檢查。本研究對照皆取自因肌無力而行肌肉活檢且病理結果為正常的肌肉標本。OPMD及OPDM肌肉標本在光鏡下病理改變相似，都表現為慢性肌源性改變伴肌纖維內鑲邊空泡形成。OPMD中鑲邊空泡出現頻率平均為11±09％OPDM中平均為42±21％，較OPMD更為常見（P00159）。此外，OPDM肌肉損害較OPMD顯著，部分標本可見呈小群分布的萎縮纖維，壞死伴吞噬，肌內膜及間質明顯增生。免疫組化染色未見異常。7例OPMD肌肉標本行電鏡檢查，其中5例肌細胞核內可見直徑約為85NM的管狀細絲樣包涵體。3例OPDM肌肉標本電鏡下未發(fā)現肌核或肌漿內管絲樣包涵體。第三部分眼咽型肌營養(yǎng)不良的分子生物學特點分析13個OPMD家系均經PABPN1基因突變分析確診，先證者的DNA自活檢肌肉組織標本中提取，家系成員DNA自外周血提取。本研究人群中共發(fā)現7種基因型，其中10個家系為單純GCG異常擴增，另3個家系伴有GCA的插入。最常見的基因型為GCG9GCA3GCG1，占46％613。家系1中先證者為復合雜合突變GCG6GCA1GCA3GCG1GCG6GCA1GCG1GCA3GCG1其姐攜帶1個正常等位基因，另一等位基因為GCG6GCA1GCG1GCA3GCG1其弟無臨床癥狀，但攜帶GCG6GCA1GCA3GCG1多態(tài)，該多態(tài)以往未見報告。結合表型，單純GCG異常擴增與伴有GCA插入的家系在臨床表現上無明顯差異。起病年齡及表型嚴重程度與GCN擴增次數無明顯相關。家系1中，先證者發(fā)病早期即出現眼、咽及肢體肌肉的全面受累，而其姐僅有吞咽困難，提示GCG6GCA1GCA3GCG1多態(tài)對表型可能具有調控作用。第四部分眼咽型遠端肌病致病基因的探索外顯子序列雖然僅占基因組序列的1％，但卻包含了編碼和調控蛋白質合成的主要信息。在符合孟德爾遺傳模型的疾病中，85％以上的突變位點都位于外顯子區(qū)域。目前，利用全外顯子組測序技術WHOLEEXOMESEQUENCING，WES已成功定位了超過100種先前未知的疾病致病基因，包括罕見疾病、復雜疾病、腫瘤等。OPDM的致病基因至今不明且相關研究甚少，缺乏較大家系且報道寥寥是其重要限制因素。而WES較全基因組測序及家系連鎖分析的突出優(yōu)勢則在于，其可利用小家系，甚至散發(fā)病例完成致病基因的定位工作。故本研究擬利用WES探索OPDM的致病基因。本研究選取家系2中2例患者Ⅲ7，Ⅲ9及1例正常人（Ⅲ9之父），自外周血提取全基因組DNA行WES。按照顯性遺傳模型（不完全外顯）進行數據分析。家系2中其他成員及家系4用來驗證可能的候選基因。3例送檢者平均檢出105641個基因變異位點，包括非同義突變、剪切位點變異，插入及缺失突變。經數據分析及功能預測后的篩選，得到52個非同義突變及3個缺失突變。然而經SANGER測序驗證，未得到與疾病表型共分離的基因變異位點。結論1OPMD和OPDM為兩種獨立的疾病實體。吞咽困難是我國OPMD患者常見的首發(fā)癥狀，以吞咽困難為首發(fā)癥狀的患者較以眼瞼下垂首發(fā)的患者起病早（P00036）。OPDM患者中以肢體無力首發(fā)或可提示預后不良。在兩種疾病中，同一家系內部的臨床表型都具有家族一致性，提示除致病基因外的其他遺傳背景可能參與調控OPMD及OPDM的表型。2我國OPDM患者光鏡下鑲邊空泡較OPMD更為常見P00159。3我國OPMD患者可見PABPN1基因單純GCG異常擴增，亦可有GCA插入突變，同時存在GCN11多態(tài)。13個家系檢測到7種PABPN1基因突變類型，提示中國人群中OPMD患者并非來自共同祖先。GCG6GCA1GCA3GCG1為我們首次報道，該多態(tài)可能參與調控疾病表型。4本研究利用WES探索OPDM致病基因，未能得到與疾病表型共分離的基因突變。WES存在漏檢可能，另推測OPDM致病基因或可位于非編碼序列亦可能為短串聯重復序列及拷貝數變異。

簡介：獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內容以外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名石扦／LL≯0年蟈’歸學位論文版權使用授權書江蘇大學、中國科學技術信息研究所、國家圖書館、中國學術期刊光盤版電子雜志社有權保留本人所送交學位論文的復印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。本人電子文檔的內容和紙質論文的內容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時授權中國科學技術信息研究所將本論文編入中國學位論文全文數據庫并向社會提供查詢，授權中國學術期刊光盤版電子雜志社將本論文編入中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數據庫并向社會提供查詢。論文的公布包括刊登授權江蘇大學研究生院辦理。本學位論文屬于不保密妙／學位論文作者簽名J彳鐘沙心年。加6J白指導教師簽名尖鑰H夢移手

簡介：目的兒童感染性心內膜炎INFECTIVEENDOCARDITISIE死亡率高，早期診斷和合理治療是改善預后的關鍵。本研究分兩部分1分析兒童IE臨床特點的變化，探討兒童IE的早期診斷和治療方法。2探討聚合酶鏈反應PCR檢測經手術治療的IE患者的心內膜組織標本中病原菌的方法，提高IE病原檢出率，探討分子生物學方法在感染性心內膜炎病原學診斷中的臨床應用價值。方法1回顧性總結近10年1999年1月至2008年12月在本院住院的76例IE患兒的臨床資料，就超聲、血培養(yǎng)、治療及影響預后的因素等做一分析。2搜集12例臨床確診為IE患者的血標本及心內膜標本，分別進行培養(yǎng)和脫氧核糖核酸抽提、PCR擴增及測序，12例IE心內膜標本的PCR結果與血培養(yǎng)結果對照。結果1IE患兒76例占同期住院患兒總數的086‰。，其中71例合并先天性心臟病，IE臨床表現中最常見的仍然是發(fā)熱908％。心臟多譜勒超聲發(fā)現贅生物48例，檢出率632％，2004年后贅生物檢出率較2003年前贅生物檢出率明顯提高P005。血培養(yǎng)陽性38例，陽性率50％，血培養(yǎng)陽性率2006年后較2005年前增高P005。IE中位居前3位的病原是草綠色鏈球菌579％、凝固酶陰性葡萄球菌184％、金黃色葡萄球菌132％。76例患兒治愈51例，12例單純接受抗生素治療獲痊愈，39例經抗生素聯合外科手術治療獲痊愈，病死7例，血培養(yǎng)陽性者的預后顯著優(yōu)于血培養(yǎng)陰性者P005。2手術治療IE中12例患者的贅生物經分子生物學檢測病原，其中11例IE患者心內膜標本的分子生物學結果為陽性，與相對應的8例陽性血培養(yǎng)結果比較，7例PCR結果與血培養(yǎng)結果一致。結論1先天性心臟病是兒童IE最主要的易患因素，心臟贅生物檢出率與血培養(yǎng)陽性率逐年增高，兒童IE的病原菌仍以草綠色鏈球菌最常見，但先心術后罹患IE者與術前罹患IE者的致病菌譜發(fā)生了變化，提高血培養(yǎng)的陽性率可以改善IE的預后。2PCR方法是一種快速、靈敏、可靠的診斷病原菌的方法，適用于血培養(yǎng)陰性、生長緩慢或鑒別困難的細菌感染的、符合手術指征IE的病原學診斷，有利于指導手術后抗菌藥物的應用及提高IE的最終治愈率。

簡介：學位論文原創(chuàng)性聲明學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重說明所呈交的學術論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。文中依法引用他人的成果、對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中作出明確標注或得到許可。論文內容未包含法律意義上已屬于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他學位申請的論文或成果。本人如違反上述聲明，愿意承擔以下責任和后果1交回學校授予的學位證書；2學?？稍谙嚓P媒體上對作者本人的行為進行通報；3本人按照學校規(guī)定的方式，對因不當取得學位給學校造成的名譽損害，進行公開道歉。4本人負責因論文成果不實產生的法律糾紛。論文作者簽名日期年月日學位論文知識產權權屬聲明學位論文知識產權權屬聲明本人在導師指導下所完成的論文及相關的職務作品，知識產權歸屬廣州醫(yī)學院及附屬單位。廣州醫(yī)學院及附屬單位享有任何方式發(fā)表、復制、公開閱覽、借閱以及申請專利等權利。本人離校后發(fā)表或使用學位論文直接相關的學術論文或成果時，署名單位仍然為廣州醫(yī)學院及附屬單位。任何其他收存和保管本論文的單位和個人，未經本論文作者、導師授權，不得將本論文轉借他人、復制、抄錄或其他任何方式傳播，否則，引起有礙作者的著作權益問題，將會追究相應的法律責任。論文作者簽名日期年月日導師簽名日期年月日關于學位論文使用授權的說明關于學位論文使用授權的說明1、學?？梢员Ａ舯緦W位論文的原件及復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復印手段保存、匯編學位論文；2、本人授權學校向國家有關部門或機構送交學位論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。送交學位論文時間選擇（請在下面相應欄內打“√”）①答辯后即可送是□否□②延遲一年后送□③延遲二年后送□④延遲三年后送□論文作者簽名日期年月日導師簽名日期年月日目錄縮略語表I中文摘要1英文摘要5第1章前言9第2章材料與方法12第3章結果17第4章討論29第5章結論37附圖38參考文獻48綜述52參考文獻57附錄一60致謝62

簡介：背景關節(jié)軟骨損傷在臨床中極為普遍常見的原因為關節(jié)創(chuàng)傷、退行性變兩類既往研究主要集中于退行性軟骨損傷及隨后發(fā)生的軟骨下骨的修復機制而對于急性損傷后軟骨下骨的組織、形態(tài)研究甚是少見本研究旨在觀察關節(jié)軟骨急性損傷后軟骨下骨的早期變化探討其可能的發(fā)生機制為治療軟骨損傷提供依據。目的探討軟骨急性損傷后軟骨下骨的早期組織形態(tài)學、分子生物、生物力學的變化。材料和方法1健康成年新西蘭兔24只隨機分為對照組和實驗組建立股骨頭軟骨缺損模型2分別收集術后即刻、4天、7天、14天標本大體觀察造模后的軟骨形態(tài)變化免疫印跡測定軟骨缺損區(qū)周圍軟骨蛋白聚糖、番紅固綠染色觀察軟骨下骨微觀形態(tài)變化、免疫組化法測定骨轉換標志物OPGRANKL的表達3MICROCT掃描分析軟骨下骨超微結構改變、力學檢測法評估軟骨下骨機械強度變化。結果可見股骨頭缺損模型于術后7天出現軟骨缺損面積明顯擴大深度增加缺損區(qū)周圍軟骨蛋白聚糖含量明顯降低呈退變表現利用染色法觀測進一步證實了7天起軟骨下骨骨小梁吸收連續(xù)性中斷。利用免疫組化及免疫熒光發(fā)現術后714天軟骨下骨中OPG表達明顯減少RANKL表達量顯著增加OPGRANKL比值降低提示骨轉換減弱甚至逆轉。采用MICROCT分析發(fā)現術后7天及術后14天軟骨下骨的骨小梁數量減少骨小梁厚度及間距增大?？箟毫W試驗分析抗壓強度和彈性模量未見明顯統計學差異。結論軟骨損傷后軟骨下骨可在早期7天后即發(fā)生顯著組織形態(tài)變化和骨轉換能力的下調從而導致軟骨進一步破壞術后2周內未見軟骨下骨從在明顯力學改變基于此的修復手段可為軟骨損傷修復提供治療靶點。

簡介：第一部分目的分化抑制蛋白（ID）家族在細胞增殖、分化、以及腫瘤發(fā)生進展過程中均有重要作用。本研究對該家族蛋白的N端序列進行保守性結構分析并構建其基因突變體。方法應用CLUSTALX181軟件對ID蛋白家族中三個成員（ID13）的N端序列進行同源性分析；SWISSPDBVIEWER37SP5軟件模擬高同源區(qū)域中關鍵性氨基酸突變前后的三維結構模型；以PCR方法將突變點引入ID序列，通過重疊PCR方法擴增出全長編碼序列；酶切與測序確證突變序列的準確性。結果ID13蛋白的N端存在一個由11個氨基酸形成的高度保守的旋轉螺旋（LOOPHELIX）結構，將其中最保守的絲氨酸與亮氨酸分別突變?yōu)楦拾彼崤c纈氨酸；成功構建包含突變ID基因序列的PGEX原核表達載體。結論本研究在ID13蛋白N端識別了一個保守的LOOPHELIX結構，為深入研究其協同的功能特征提供了結構依據；構建的突變其中的絲氨酸表達載體為研究ID蛋白磷酸化修飾和功能奠定基礎。第二部分目的兒茶素家族化合物作為一種毒副作用小、價格低廉的天然化合物，已顯示出對艾滋病毒的抑制效果，但其抑制機理仍不明確。本研究探討兒茶素家族化合物對于HIV1整合酶的抑制效果，初步闡明該家族化合物對艾滋病毒的抑制機理。方法采用ELISA實驗方法檢測四種帶有沒食子?；膬翰杷貙τ贖IV1整合酶的抑制力。將這四種兒茶素按照等比例混合，檢測它們協同抑制的效果，同時選擇一種無沒食子酰基的兒茶素EC作為對照。采用分子對接的計算機模擬方法研究沒食子酰基的兒茶素對于HIV1整合酶的抑制機理。結果通過ELISA實驗方法，發(fā)現四種含有沒食子?；膬翰杷兀–ATECHINGALLATECG，表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EPIGALLOCATECHINGALLATE，EGCG），GALLOCATECHINGALLATEGCG，和表兒茶素沒食子酸酯（EPICATECHINGALLATEECG）對HIV1整合酶有顯著的抑制效果。通過分子對接的研究發(fā)現，當HIV1整合酶沒有結合病毒DNA的時候，這四種兒茶素會結合在TYR143和GLN148氨基酸上，因此改變了整合酶環(huán)狀結構（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低了整合酶的活性。此外，當整合酶與病毒DNA結合上之后，這四種兒茶素可以結合在整合酶與病毒DNA之間，從而干擾其整合效率。并且，這四種兒茶素具有很高的協同抑制效果，通過ELISA實驗方法測定的四種藥物的混合物對整合酶的半數抑制濃度（IC5001ΜMOLL）優(yōu)于已用于臨床的整合酶抑制劑RALTEGRAVIR。結論發(fā)現四種含沒食子?；鵆G、EGCG、GCG，ECG的兒茶素對HIV1整合酶有顯著的抑制效果其作用機制為兒茶素結合在TYR143和GLN148氨基酸上，改變整合酶環(huán)狀結構（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低整合酶的活性。四種兒茶素具有很高的協同抑制效果，其混合物對整合酶的半數抑制濃度為（IC5001ΜMOLL），表明含沒食子?；膬翰杷赜型蔀橐环N新的HIV1整合酶抑制劑。第二部分目的分化抑制蛋白（ID）家族在細胞增殖、分化、以及腫瘤發(fā)生進展過程中均有重要作用。對該家族蛋白的N端序列進行保守性結構分析并構建其基因突變體。方法應用CLUSTALX181軟件對ID蛋白家族中三個成員（ID13）的N端序列進行同源性分析；SWISSPDBVIEWER37SP5軟件模擬高同源區(qū)域中關鍵性氨基酸突變前后的三維結構模型；先用PCR方法將突變點引入ID序列，再通過重疊PCR方法擴增出全長編碼序列；酶切與測序確證突變序列的準確性。結果ID13蛋白的N端存在一個由11個氨基酸形成的高度保守的旋轉螺旋（LOOPHELIX）結構，將其中最保守的絲氨酸與亮氨酸分別突變?yōu)楦拾彼崤c纈氨酸；將突變后的ID基因序列重組到PGEX原核表達載體中。結論本研究在ID13蛋白N端識別了一個保守的LOOPHELIX結構，為深入研究其協同的功能特征提供了結構依據；突變其中的絲氨酸為研究ID蛋白潛在的磷酸化修飾及相應功能特征的改變奠定了基礎。第三部分目的兒茶素家族化合物作為一種毒副作用小，價格低廉的天然化合物已經體現出了對艾滋病毒的抑制效果，但其抑制機理仍不明確。為此研究了兒茶素家族化合物對于HIV1整合酶的抑制效果，闡述了該家族化合物對艾滋病毒的抑制機理。方法我們采用了ELISA實驗方法檢測四種帶有沒食子?；膬翰杷貙τ贖IV1整合酶的抑制力。并且我們還將這四種兒茶素按照等比例混合，檢測它們協同抑制的效果。此外，我們選擇了一種最主要的不帶沒食子?；膬翰杷谽C，作為對照。我們還采用了分子對接的計算機模擬方法研究了帶有和不帶有沒食子酰基的兒茶素對于HIV1整合酶的抑制機理。結果通過ELISA實驗方法，發(fā)現四種含有沒食子?；膬翰杷?，包括CATECHINGALLATECG，表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EPIGALLOCATECHINGALLATE，EGCG），GALLOCATECHINGALLATEGCG，和表兒茶素沒食子酸酯（EPICATECHINGALLATEECG）對HIV1整合酶有顯著的抑制效果。通過分子對接的研究發(fā)現，當HIV1整合酶沒有結合病毒DNA的時候，這四種兒茶素會結合在TYR143和GLN148氨基酸上，因此改變了整合酶環(huán)狀結構（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低了整合酶的活性。此外，當整合酶與病毒DNA結合上之后，這四種兒茶素可以結合在整合酶與病毒DNA之間，從而干擾其整合效率。并且，這四種兒茶素具有很高的協同抑制效果，通過ELISA實驗方法測定的四種藥物的混合物對整合酶的半數抑制濃度（IC5001ΜMOLL）優(yōu)于已用于臨床的整合酶抑制劑RALTEGRAVIR。結論發(fā)現四種含有沒食子酰基的兒茶素，包括CG、EGCG、GCG，ECG對HIV1整合酶有顯著的抑制效果。其作用機制為四種兒茶素結合在TYR143和GLN148氨基酸，改變了整合酶環(huán)狀結構（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低整合酶的活性。四種兒茶素具有很高的協同抑制效果，其混合物對整合酶的半數抑制濃度為（IC5001ΜMOLL），表明有沒食子?；膬翰杷赜型蔀樾碌囊蛔錒IV1整合酶抑制劑。

簡介：分類號學號D201178354學校代碼10487密級博士學位論文博士學位論文腦腫瘤的分子生物學行為與功能腦腫瘤的分子生物學行為與功能磁共振成像的相關性研究磁共振成像的相關性研究學位申請人人江晶晶江晶晶學科專業(yè)業(yè)影像醫(yī)學與核醫(yī)學影像醫(yī)學與核醫(yī)學指導老師師朱文珍朱文珍教授教授答辯日期期2014年5月獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果的總結。盡我所知，除文中已經標明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本人將承擔本聲明引起的一切法律后果。學位論文作者簽名日期年月日學位論文版權使用授權書學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權華中科技大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后使用本授權書。本論文屬于不保密□。（請在以上方框內打“√”）學位論文作者簽名指導老師簽名日期年月日日期年月

簡介：一青蒿琥酯對人胚肺成纖維細胞FAS、FASLMRNA表達的影響目的探討青蒿琥酯對人胚肺成纖維細胞HFLI凋亡的作用及其與FAS、FASL表達的關系為青蒿琥酯防治肺纖維化提供理論依據。方法采用CCK8法檢測青蒿琥酯對體外培養(yǎng)的HFLI細胞增殖的影響流式細胞術測定細胞凋亡率RTPCR法測定FAS、FASL的MRNA表達水平。結果青蒿琥酯呈濃度依賴性抑制HFLI細胞增殖HFLI細胞經青蒿琥酯作用后凋亡率明顯增加P結論青蒿琥酯具有抗肺纖維化作用可能機制為通過上調FAS、FASL的表達抑制HFLI細胞增殖、促進HFLI細胞凋亡。二青蒿琥酯對人胚肺成纖維細胞CASPASE3MRNA及CASPASE3相關蛋白表達的影響目的研究青蒿琥酯對人胚肺成纖維細胞HELF系HFLI細胞體外生長的影響為青蒿琥酯抗纖維化提供實驗依據。方法采用CCK8法檢測青蒿琥酯對體外培養(yǎng)的HFLI細胞生長的影響用流式細胞術測定細胞凋亡率RTPCR法測定凋亡相關蛋白CASPASE3的MRNA表達水平WESTERNBLOTING法分析CASPASE3蛋白的表達情況。結果青蒿琥酯呈濃度依賴性抑制HFLI細胞增殖HFLI細胞經青蒿琥酯作用后凋亡率明顯增加P結論青蒿琥酯很可能通過上調CASPASE3MRNA及蛋白的表達水平進而抑制HFLI細胞的增殖并促進HFLI細胞的凋亡從而發(fā)揮抗肺纖維化作用。

簡介：點擊查看更多狂犬病病毒CTN不同克隆株的生物學和分子特性研究.pdf精彩內容。

簡介：分類號墅Z壘魚2UDCO重慶醫(yī)科大學密級碩士學位論文論文題目作者姓名轉化生長因子PL在結腸癌細胞中分子生物學行為的實驗研究T日皇J名、指導教師姓名職稱、單位名稱姜政教授重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院消化內科申請學位級別碩士論文答辯年月學科、專業(yè)名稱2010年5月內科學2010年5月目錄符號說明????????????????????????????????．1中文摘要????????????????????????????????2英文摘要???????????????????????????????。4論文正文轉化生長因子PL在結腸癌細胞中分子生物學行為的實驗研究???8前言??????????????????????????????????????????8第一部分TGFBL真核表達載體的構建及其在COS．7細胞中的表達?????LO1材料和方法?????????????????????????．．．??102實驗結果????????????????????????????。203討論????????????????????????????????????21第二部分PSHRNATGFILI表達質粒的構建及其有效序列的篩選??????。231材料和方法????????????????????????????232實驗結果????????????????????????????263討論????????????????????????????????????26第三部分PEGFPNITGFIH與PSHRNATGF．PL重組質粒對結腸癌細胞增殖，周期及侵襲性的不同影響?????????????????????。281材料和方法???????????????????????????282實驗結果????????????????????????????303討論????????????????????????????????????3L全文總結????????????????????????????????33參考文獻????????????????????????????????34附圖???????????????????????????????37文獻綜述?????????????????????????????????．46駕C謝????????????????????????????????????????54攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文?????????????????????????55

簡介：CFTRCYSTICFIBROSISTRANSMEMBRANECONDUCTANCEREGULAT，CFTR即囊性纖維化跨膜電導調節(jié)因子，是一種CAMP依賴的CL通道，廣泛表達于呼吸道、胰腺、胃腸道、睪丸、汗腺和唾液腺等多種分泌型和吸收型上皮，主要參與電解質、液體轉運以及調節(jié)其它膜通道蛋白的功能。其基因突變導致白種人中常見的致死性常染色體隱性遺傳疾病即囊性纖維化病CYSTICFIBROSIS，CF。其中最為常見的突變類型是△F508第508位氨基酸苯丙氨酸缺失，有90％的CF病人其一條染色體都攜有△F508突變。CF疾病的主要特征是反復的肺部感染、結構破壞和纖維修復，最終導致肺功能不可逆性的喪失，這也是CF疾病高發(fā)病率和致死性的主要原因。由于缺少合適的動物模型，CF發(fā)病機理并不清楚。盡管在CFTR基因克隆后，建立了許多CF小鼠轉基因模型，并且這些小鼠也重現了CF病人的腸道病變。但由于小鼠與人在氣道細胞生物學、粘膜下腺表達量以及小鼠氣道可能存在其它的非CFTR介導的氯離子轉運，CF轉基因小鼠模型未能表現作為CF病人主要致死原因的肺部病變。因此，需要尋找其它的動物建立CF模型。豬在解剖學、生理學上和人有極大的相似性，比較適合建立CF動物模型。此外，由于豬具有較長的壽命，使得對于CF肺疾病的發(fā)生、治療手段的長期治療效果以及副作用的研究成為可能?，F在很多研究者致力于構建豬CFTR基因敲除豬和△F508突變豬CF模型。但由于基因敲除豬也可能發(fā)生類似于基因敲除鼠的腸梗阻，在未發(fā)生肺部疾病前過早死亡，使后續(xù)研究難以進行。此外，我們實驗室和美國OSTEDGAAD等的近期研究發(fā)現，豬△F508CFTR在穩(wěn)定轉染細胞模型中能夠正常加工成熟轉運到質膜，提示豬△F508轉基因模型將不會出現預期的表型。用CFTR特異性抑制劑誘導豬CF模型是另一個可行的策略。但現今發(fā)現的人CFTR特異性抑制劑CFTRINH172對豬CFTR的親和力差，抑制效果并不明顯，并且本實驗室前期研究發(fā)現，該藥不能誘導豬CF模型的產生。另一種CFTR抑制劑GLYH101雖然對豬有較好的抑制效果，但其在動物體內分布和代謝情況并不清楚，是否適合用來做藥物誘導豬CF模型也不清楚。因此，需要尋找高親和力、高特異性、在豬體內主要CF病變器官分布較高的豬CFTR抑制劑來誘導豬CF模型。本文的目的是系統研究豬△F508CFTR的細胞生物學和電生理特征，并通過高通量篩選發(fā)現新的豬CFTR特異性、高親和力抑制劑，為建立豬CF藥理模型奠定基礎。首先利用PCR方法我們獲得了豬CFTR基因，并將其連入真核表達載體PCDNA31ZEO。對豬CFTR基因進行點突變，獲得了豬△F508CFTR，也將其連入真核表達載體PCDNA31ZEO。將這兩個構建好的重組質粒與對碘離子敏感的綠色熒光蛋白突變體EYFPH148QI152L穩(wěn)定轉染FRTFISHER大鼠甲狀腺上皮細胞，建立了豬CFTR高通量篩選細胞模型。利用自己制備的針對豬CFTRNBD2結構域的多克隆抗體，對瞬時及穩(wěn)定轉染野生型和△F508PCFTR的COS7細胞及FRT細胞進行免疫印記及免疫熒光分析，發(fā)現△F508PCFTR蛋白大部分778％都具有成熟型糖基化形式，能夠被正常轉運上膜。通過CL電流熒光測定、短路電流分析以及全細胞膜片鉗電流測定，發(fā)現△F508PCFTR具有依賴于CAMP激活的CL轉運功能。較野生型相比，△F508PCFTR對CAMP激動劑FSKOLIN的敏感性降低10倍EC505ΜMVSEC5005ΜM；其FSKOLIN激活的最大電流為野生型的61％；對人CFTR抑制劑CFTRINH172和GLYH101的靈敏性更高，1ΜMCFTRINH172對△F508PCFTR和野生型CFTR的抑制百分率分別為40％和20％。這些結果都表明豬△F508突變是一種“溫和性”突變，突變蛋白能正常轉運到達頂質膜，只是功能較野生型有所降低。以往的研究表明，10％的人△F508CFTR轉運到達頂質膜就可以避免CF癥狀的發(fā)生，因此△F508轉基因豬CF模型不會出現預期表型。此外，對GLYH10L在小鼠體內的分布、代謝情況進行了初步研究，發(fā)現其在小鼠肺內分布并不明顯，并很快被清除干凈。據此我們推斷其在豬體內也具有類似分布代謝情況，提示GLYH101并不適合作為藥物來誘導豬CF模型。因此，需要尋找對豬更有效的特異性抑制劑。利用構建的FRTEYFPH148Q1152LPCFTR穩(wěn)定轉染細胞模型，通過高通量篩選技術對含10萬個結構多樣的小分子組合化學庫進行抑制劑的篩選，發(fā)現了3個新的豬CFTR特異性抑制劑。其中活性最好的PI1，能夠以劑量依賴的方式抑制FRT單層上皮細胞CPTCAMP激活的豬CFTR短路電流，其IC50為1334ΜM，且這種作用具有快速、可逆、無毒的特點。在小鼠體內活性試驗中，可有效抑制霍亂毒素誘導的腸道液體分泌80％。通過以上研究，進一步證實豬△F508突變CFTR的細胞生物學行為與人△F508PCFTR有顯著差異，提示豬△F508轉基因模型將不會出現預期的表型。此外，我們對10萬個小分子組合化學庫篩選，發(fā)現了3個新結構的豬CFTR抑制劑，但其親和力不高，提示我們從小分子組合化學庫獲得豬CFTR高親和力的抑制劑可能性不大。下一步計劃對本實驗室近期從500種常用中草藥建立的一個含40000個組分的小分子庫進行系統篩選，從結構更為復雜多樣的天然產物中尋找豬CFTR的高親和力、特異性抑制劑。

簡介：本研究采用了一種較為簡單的聚合酶鏈反應－限制性酶切片段多態(tài)性POLYMERASECHAINREACTIONRESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMPHISM，PCRRFLP方法對臨床耐藥結核桿菌菌株中的KATG基因最為常見的S315T突變進行了篩選，并對未發(fā)現S315T突變的耐異煙肼結核桿菌的KATG基因直接測序以研究KATG的基因變異。此外，還應用直接測序法對RPOB基因的突變情況作了分析。除對異煙肼與利福平耐藥相關基因譜作分析外，還采用一種新的多位點可變數目串聯重復序列分析法MULTIPLELOCIVARIABLENUMBEROFTEMREPEATSANALYSIS，MLVA方法對結核分枝桿菌的基因指紋作了分析，對該方法在我國的應用情況作了初步探討，并研究基因型與耐藥性之間的關系。在以上工作的基礎上，本研究第二部分建立了基因特異性多重聚合酶鏈反應MULTIPLEXALLELESPECIFICPOLYMERASECHAINREACTION，MASPCR以檢測臨床常見的KATG基因和RPOB基因突變，用于對異煙肼和利福平耐藥菌的快速檢測。

簡介：目的通過對血管內皮功能NO、ET、VEGF、血小板活化功能CD62P、CD63等的檢測和分析，從微觀分子生物學角度探討“血瘀“是老年性骨質疏松的主要病機之一。對30例老年性骨質疏松癥患者（A組）、30例低骨量老年患者（B組），進行骨密度BMD，血清NO、VEGF，血漿ET、CD62P、CD63等檢測。NO檢測采用硝酸還原酶法，ET檢測采用放射免疫法，VEGF采用雙抗夾心ELISA法，CD62P、CD63采用單克隆抗體和流式細胞儀技術檢測，同時檢測30例健康青壯年（C組）作為對照，并將三組的NO、ET、VEGF、CD62P、CD63和骨密度進行相關系數分析。結果1A、B、C三組間的骨密度（T值）差異具有顯著性P2A組NO、ET水平與C組比較差異具有顯著性P3A組VEGF水平與C組比較差異具有顯著性P4A組CD62P、CD63水平與C組比較差異具有顯著性P5A、B、C三組的NO、ET、VEGF、CD62P、CD63與BMD均具有非常顯著性相關P結論1老年性骨質疏松屬中醫(yī)“骨痿”、“骨痹”范疇，是伴隨人體的衰老而發(fā)生的疾病，老年性骨質疏松患者由于其生理病理過程的原因，血瘀在其發(fā)病中起著重要作用。2老年性骨質疏松患者存在血管內皮功能NO、ET、VEGF、血小板活化功能CD62P、CD63等微觀分子生物學變化，其微觀分子生物學的改變可能參與老年性骨質疏松的發(fā)病。3隨著年齡的增加，人體NO、ET、VEGF、CD62P、CD63的變化和骨密度改變有一定的關系。