簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)（北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院）博士學(xué)位論文慢病毒介導(dǎo)NT3基因轉(zhuǎn)導(dǎo)神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)生物學(xué)特性研究姓名李立君申請學(xué)位級別博士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王任直20080601中文摘要研究背景和目的神經(jīng)干細胞NEURALSTEMCELLS，NSCS移植和基因治療，是治療缺血性腦血管疾病的兩個重要的研究途徑。近年來，神經(jīng)干細胞已經(jīng)被用作基因治療的載體，可將治療基因攜帶到病灶，通過治療基因在缺血性損傷局部表達而發(fā)揮作用，有望為中風(fēng)的治療帶來新的希望。本研究的目的以慢病毒LCNTIVIMS，LV介導(dǎo)，將HNR3基因轉(zhuǎn)入NSCS，并進行體外培養(yǎng)，探討NSCSHNT3在體外分化以及表達NT3時間上的特點，為體內(nèi)移植NSCSHNT3的研究和臨床應(yīng)用提供必要的體外實驗依據(jù)。方法實驗共分二部分。第一部分從孕14天SPRAGUCDAWLEYSD大鼠胚胎的腦組織分離出神經(jīng)干細胞，采用無血清培養(yǎng)法，進行體外培養(yǎng)、擴增，并通過免疫熒光化學(xué)染色巢蛋白進行鑒定。取傳至第5～6代神經(jīng)干細胞，以L105CELLS／5001D／孔接種于24孔板，分別按復(fù)感染指數(shù)MULTIPLICITIESOFINFECTIONMOIS值為0、L、5、10、15、20加入攜帶報告基因GFP的慢病毒載體1ENTIVIRALVEETORGFP，【MGFP稀釋液，每一滴度加六孔，共六組。2“3天后于倒置熒光顯微鏡下觀察各組GFP的表達效率，并在3天后進行神經(jīng)干細胞球進行計數(shù)，觀察LV／GFP對NSCS增殖的影響。并行流式細胞儀檢測，得出各組NSCS的GFP陽性轉(zhuǎn)染率。第二部分構(gòu)建表達HNT3基因的慢病毒載體1ENTIVIRALVE髟TORHNT3，LV／HNT3，實驗組根據(jù)最佳MOI用LV／心爪3轉(zhuǎn)染NSCS，對照組NSCS不轉(zhuǎn)染病毒。兩組細胞繼續(xù)無血清培養(yǎng)，48H“96H后，應(yīng)用ELISA和免疫熒光染色方法對兩組NSCS在體外的分化和NT3的表達進行檢測。結(jié)果第一部分NSCS以懸浮細胞球方式生長，NESTIN染色陽性。轉(zhuǎn)染GFP基因后，除M01值為0的對照組外，23天后各孔均有GFP表達。MOI值從0增至10，細胞的陽性表達率逐漸提高P85％的轉(zhuǎn)染率。但MOI值從10增至20，形成的神經(jīng)干細胞球數(shù)目卻逐漸減少。第二部分NT3修飾的神經(jīng)干細胞早期跟親代無形態(tài)學(xué)區(qū)別，34天后，實驗組中神經(jīng)干細胞分化比例比對照組明顯要高，已分化的細胞在形態(tài)上與對照組比較細胞突起長而且數(shù)

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文上海地區(qū)兒童腹瀉輪狀病毒感染的臨床流行病學(xué)研究姓名曾玫申請學(xué)位級別博士專業(yè)臨床技能訓(xùn)練與研究指導(dǎo)教師朱啟镕20030330將PAGE檢測輪狀病毒陽性的糞便標本重新用TRIZOL抽提，328份含有足量RNA的標本進一步行RTPCR擴增VP7全基因，共有254份標本774％獲得陽性產(chǎn)物CDNAS，將CDNAS與G1G4型特異探針進行雜交分型試驗，結(jié)果顯示G1血清型占第一位141例555％，G3血清型占第二位70例276％。G2血清型占第三位24例94％，混合感染血清型占第四位16例63％，G4很少見僅發(fā)現(xiàn)L例O4％，未分型2例O8％，G1G3占分型株的988％。所有G2型均為電泳短型，而GL、G3、G4均為電泳長型。輪狀病毒的發(fā)病年齡與臨床癥狀的嚴重程度與不同G血清型無關(guān)。三輪狀病毒合并人類杯狀病毒感染的研究493份輪狀病毒陽性的標本用TRIZOL抽提后，采用RTPCR法檢測杯狀病毒，有9份標本同時合并感染杯狀病毒，混合感染率為18％。9例混合感染者散發(fā)在2000年12月至2001年10月，5例來自社區(qū)感染，4例來自院內(nèi)感染，患兒年齡最小僅15月，最大11個月，其中4例有發(fā)熱，持續(xù)15天，發(fā)熱高峰3823950C，9例均有腹瀉，持續(xù)215天，24小時腹瀉最多次數(shù)220次，2例有嘔吐，持續(xù)I5天，2例發(fā)生輕度脫水，分別發(fā)生在10月齡與11月齡患兒。兒童腹瀉病病原的復(fù)雜性不容忽視，杯狀病毒作為兒童社區(qū)及院內(nèi)感染腹瀉病的病因應(yīng)給予重視。四用于檢測糞便標本中A組輪狀病毒的兩種方法的比較1023份標本中有893份標本13天內(nèi)采集后用ELISA法檢測A組輪狀病毒，其中ELISA法檢出陽性標本454份，陽性率為508％，再行PAGE法檢測，陽性標本446份，陽性率為499％，二者陽性率相近，無顯著性差異。兩種方法檢測標本均陽性者為356份，均陰性者為349份，與PAGE法相比，ELISA法的準確率為789％，敏感度為798％，特異度為781％。PAGE法顯示RNA條帶的深淺在ELISA法陽性組與陰性組之間的構(gòu)成比有統(tǒng)計學(xué)差異，ELISA法用于檢測輪狀病毒含量少的糞便標本不夠敏感，易出現(xiàn)假陰性反應(yīng)，而且該法也可出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，對其診斷輪狀病毒的準確性有一定影響。ELISA法與PAGE法的不一致率在各年齡組比較無顯著差異，二者一致與否與年齡無關(guān)。ELISA法具有簡便、快速、敏感的優(yōu)點，尤其適用于臨床大量標本的檢測，PAGE法雖然較繁鎖，但病毒RNA有其特殊的十一條條帶，更加直觀準確，甚為可靠。I關(guān)鍵詞J輪狀病毒腹瀉病流行病學(xué)兒童上海地區(qū)中圖分類號R7251／5125

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簡介：貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文我國人博卡病毒的分子流行病學(xué)及衣殼蛋白獨有區(qū)表達純化的研究姓名漆正宇申請學(xué)位級別碩士專業(yè)生物化學(xué)和分子生物學(xué)指導(dǎo)教師郁建平段招軍20070501貴州大學(xué)2007屆碩士畢業(yè)論文我國人博卡病毒的分子流行病學(xué)及衣殼蛋白獨有區(qū)表達純化的研究人博卡病毒的分子流行病學(xué)研究及衣殼蛋白獨有區(qū)蛋白表達純化摘要在兒童和少年中，90％以上的上呼吸道感染是由病毒引起的。引起感冒的病毒種類很多，至少涉及7個病毒科的10多類共200多個型別的病毒。HEIKKINENT’JARVINENA2003認為引起呼吸道感染的病毒還有約1／4尚未被發(fā)現(xiàn)。近年來，呼吸道病毒頻繁爆發(fā)或局部流行，舊的病毒不斷變異，新的病毒不斷產(chǎn)生。2001年，荷蘭學(xué)者首次發(fā)現(xiàn)一種新的呼吸道病毒一人偏肺病毒；2003年SRAS爆發(fā)繼SARS爆發(fā)后，又有兩種新的冠狀病毒分別被發(fā)現(xiàn)荷蘭學(xué)者報道的人冠狀病毒NL63CORONAVIRUSNI63及香港首次發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒HKULCORONAVIRUSHKUI；2005年瑞典學(xué)者報道一種新的細小病毒一人博卡病毒HUMANBOCAVIRUS，HBOV，同樣與兒童呼吸道感染有關(guān)，已受到廣泛關(guān)注。目前世界各國對HBOV的研究主要集中于檢測方法的建立和HBOV感染的流行病學(xué)調(diào)查。本課題主要研究我國人博卡病毒HUMANBOCAVIRUS，HBOV的分子流行病學(xué)，在實驗室初步建古_LIIBOV的分子生物學(xué)檢測方法和血清學(xué)診斷方法。主要目標是希望從分子水平來闡明我國HBOV病毒的流行、分布、變異及與疾病的相關(guān)性，并通過抗原蛋白的表達純化，為建立血清學(xué)診斷方法研究奠定基礎(chǔ)，并可為進一步研究病毒蛋白的功能和病毒相關(guān)疾病的治療提供參考，為HBOV可能的病原檢測監(jiān)測提供科學(xué)依據(jù)。一、HBOV分子流行病學(xué)L、HBOV的分子檢測1從因呼吸道感染而住院的兒童的鼻咽抽吸物樣本中提取總核酸，逆轉(zhuǎn)錄后，PCR擴增目標病毒基因保守區(qū)，如凝膠電泳顯示該片段并測序證實，則可確定為目標病毒陽性。2從因呼吸道感染而住院的兒童的鼻咽抽吸物樣本中提取總核酸，逆轉(zhuǎn)錄。選擇人博卡病毒的NSL基因作為目標基因設(shè)計熒光定量PCR引物和檢測探針，以重組2

簡介：學(xué)拉代碼I毒是大季碩士學(xué)位論文肝癌組織、疤旁組織病毒抗原襲達與L瞄床及組織學(xué)的相關(guān)性研究指導(dǎo)敏坤學(xué)科專業(yè)葦群LII韭鞋桎Q利培吏囂辯日期譽辯喜A套主席刊，IB微牲STUDYOFTHECORRELATIONBETWEENHBSAGHCVEXPRESSMNINHCCANDPERICAREINMNATOUSTISSUESANDCLINIC，HISTOLOGYWITHIMMUNOHISTOCHEMISTRYABSTRACTOBJECTIVE’ROSTUDYTHECORRELATIONBETWEENHBSAG，HCVINHCC，PERICARCINOMATOUSTISSUESANDCLINIC，HISTOLOGYMETHODSTHEPATTERNSOFHBSAGANDHCVINL00CASESOFHEPATOCELLULARCARCINOMAHCCANDTHEIRSURROUNDINGLIVERTISSUESWERESTUDIEDONPARAFFINEMBEDEDSECTIONSWITHIMMUNOHJSTOCHEMISTRYTECHNIQUE，PERICARCINOMATOUSTISSUESWERESTAGED；AFP，HYALURONICACIDHA，PROCOLLAGENIIIPIIIP，TYPEIVCOLLAGENC1V，LAMININLNWEREDETECTEDBYRADIOIMMUNOASSAY；THEACTIVITIESOFTLYMPHOCYTESUBSETANDNKCELLWEREEXAMINED；THECORRELATIONWERESTUDIEDRESULTSTHELEVELSOFAFPHA，PIIIPCIV，LNINHBVANDHCVCOINFECTIONISTHEHIGHESTINTHEFOURGROUPSTHELEVELSOFAFPHA，PLOPCIV，LNINTHEGROUPWHICHISNOTINFECTEDBYHBVHCVISTHELOWESTINTHEFOURGROUPSHBV，HCVEXPRESSIONWEREPOSITIVELYCORRELATEDWITHAFPHALNANDCIVTHEIMMUNOLOGICDERANGEMENTINHCCWERECONCERNEDWITHHBVHCVINFECTIONCONCLUSIONSTHEBACKGROUNDOFHBVHCVVIRUSINFECTIONHADADIRECTINFLUENCEONTHELEVELSOFAFRHA，PIERC一Ⅳ，LN，THEFIBMTICSTAGINGONTHEONEHAND，VIRUSINFECTIONISONEOFTHEREASONSWHICHCAUSETHELIVERCANCER；ONTHEOTHERHAND，PERENNIALVIRUSEMIAWILLAGGRAVATEPATHOLOGICALCHANGESOFLIVERTISSUETHEANTIVIRUSINTERVENINGTREATMENTOFHEPATITISISSIGNIFICANTFORTHEPROGNOSISOFLIVERCANCELPOSTGRADUATESTUDENTYONGNINGXININTERNALMEDICINEDIRECTEDBYPROFSHIYINGXUANKEYWORDSHEPATITISBVIRUSSURFACEANTIGEN；HEPATITISCVIRUSANTIGEN；IMMUNOHISTOCHEMISTRY；HEPATOEELLULARCARCINOMA；HEPATICFIBROTICSTAGING

簡介：輪狀病毒ROTAVIRUSRV屬呼腸病毒科REOVIRIDAE輪狀病毒屬ROTAVIRUS，是引起人類和哺乳動物嚴重病毒性胃腸炎的重要病原體。RV結(jié)構(gòu)蛋白VP6位于病毒三層衣殼結(jié)構(gòu)的中間層，在病毒粒子的形成過程中起重要的作用。其直接與內(nèi)層和外層蛋白衣殼接觸，這樣它就在病毒的2個不同生物學(xué)功能進入細胞和基因組包裝之間起到一個物理受體的作用。本課題從臨床樣品中分離的人輪狀病毒TBCHEN株VP6基因，通過RTPCR得到擴增產(chǎn)物。以PET作為表達載體，將VP6蛋白編碼基因序列插入到質(zhì)粒PET中成功構(gòu)建原核表達質(zhì)粒PETVP6。實驗表明，帶有PETVP6質(zhì)粒的大腸桿菌BL21DE3可以高效表達目的蛋白VP6，重組表達產(chǎn)物VP6占菌體總蛋白的274％，其分子量約為449KDA，并且能被豚鼠抗SA11血清抗體識別WESTERNBLOT。這一結(jié)果為進一步研究VP6的結(jié)構(gòu)和功能奠定了重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。對VP6蛋白進一步純化和復(fù)性之后，通過肌肉注射給予豚鼠制備抗VP6抗血清。在體外MA104細胞上對免疫豚鼠血清中和抗體活性測定結(jié)果顯示，抗VP6抗血清具有保護SA11和WA病毒株所導(dǎo)致的細胞病變。這個結(jié)果表明，抗重組VP6血清抗體具有中和病毒感染活性。VP6蛋白在開發(fā)RV疫苗中的價值有待進一步研究評價。

簡介：為了了解福建省H3N2亞型流感病毒基因進化過程，從分子生物水平上認識其變異特征和規(guī)律，并分析疫苗對福建省人群保護的效果，本次研究對1996～2011年福建省流感監(jiān)測情況進行了描述，同時選用了64株分布于1996～2011年間的福建省H3N2亞型流感毒株來進行分子流行病學(xué)特征研究。首先通過MDCK細胞和雞胚分離的方法來擴容病毒量少的病毒株，采用紅細胞凝集（HA）和紅細胞凝集抑制（HI）試驗來對病毒株進行鑒定和分型，其次通過PCR和測序方法獲得64株H3N2亞型流感病毒HA1區(qū)序列，最后運用生物信息學(xué)和統(tǒng)計學(xué)軟件來分析獲得的序列資料，在此基礎(chǔ)上進行分子流行病學(xué)研究，結(jié)合監(jiān)測數(shù)據(jù)來揭示H3N2亞型流感在福建省的流行規(guī)律和特征。結(jié)果顯示，福建省流感流行存在冬春季和夏季兩個高峰，ILI的異常增加在一定程度上可以提示流感流行的風(fēng)險。1996～2011年期間，福建省流感流行優(yōu)勢株存在H1N1、H3N2和B型流感之間交替的規(guī)律。福建省1996年以來的H3N2亞型流感病毒基因進化可以分為兩個譜系，1996～2000年譜系和2002～2011年譜系，其進化規(guī)律都是沿著樹枝主干隨著時間推移向上延伸，序列的差異和年代成正比，初步判斷2000～2002年福建省H3N2亞型流感病毒抗原性發(fā)生較大轉(zhuǎn)變。1996年以來福建省H3N2亞型流感病毒HA1區(qū)共計在91個位點出現(xiàn)過變異，其中有25個氨基酸位點變異發(fā)生5個抗原決定簇上；7個變異位點發(fā)生在受體結(jié)合位點（RBS）及其附近；59個變異位點發(fā)生在抗原決定簇和RBS以外的位點，其中13個位點變異涉及年代間流感毒株的轉(zhuǎn)換，值得高度關(guān)注。與WHO推薦疫苗株比較，1996～1999年和2005～2009年疫苗對福建省H3N2亞型流感的保護效果較好，而2000～2004年疫苗保護效果不佳，存在滯后現(xiàn)象。從HA1蛋白結(jié)構(gòu)上分析，1996～2011年潛在糖基化位點有增多的趨勢，而5個二硫鍵位點氨基酸密碼子仍然保守，這均為維持HA蛋白的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定起到重要作用。本次研究較詳細地對1996～2011年福建省H3N2亞型流感病毒進行分子流行病學(xué)分析，闡明了HA1基因的特征和進化情況，結(jié)合福建省流感日常監(jiān)測可為我省流感流行的預(yù)測、傳染源追蹤、疫苗篩選和流感防控提供科學(xué)依據(jù)，同時為今后進一步開展流感分子生物學(xué)研究奠定重要基礎(chǔ)。

簡介：目的電子起搏器的局限性促使人們在緩慢性心律失常的治療中尋找新的途徑和方法，體外重新構(gòu)建具有竇房結(jié)功能的細胞便是嘗試之一。目前主要以HCN4基因轉(zhuǎn)染干細胞，其雖能分化成心肌樣細胞，但由于缺乏竇房結(jié)標記基因，功能上與竇房結(jié)細胞仍有差距。TBX3基因在胚胎發(fā)育成熟晚期存在于竇房結(jié)前體細胞中使之保留起搏功能并抑制竇房結(jié)前體細胞向心房肌細胞分化。同時TBX3與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)乳腺癌、膀胱癌、肝癌等惡性腫瘤都存在TBX3基因的過表達。本研究擬構(gòu)建同時攜帶有人。HCN4基因、TBX3基因及增強型綠色熒光蛋白基因EGFP的慢病毒顆粒，并研究HCN4和TBX3對小鼠胚胎干細胞EMBRYONICSTEMCELL，ES細胞生物學(xué)活性的影響，為進一步通過HCN4、TBX3共表達重建竇房結(jié)細胞功能奠定基礎(chǔ)。方法1、慢病毒包裝及滴度測定用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000分別包裹攜帶有目的基因的HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP四種目的質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染293FT細胞，分別產(chǎn)生含有表達HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP基因的四種慢病毒顆粒，計數(shù)熒光克隆數(shù)目，并計算病毒滴度。2、干細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和篩選將獲得的四種慢病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染小鼠ES細胞，48小時后于熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果。將轉(zhuǎn)染成功的細胞進行傳代擴增并進行挑克隆純化，RTPCR進一步檢測目的基因表達情況。3、ES細胞生物學(xué)活性的評價觀察獲得的四種轉(zhuǎn)基因小鼠ES細胞的形態(tài)、熒光表達強度。MTT法測定各組ES細胞OD值，流式細胞儀分析細胞凋亡率。結(jié)果1、HHCN4HTBX3慢病毒顆粒的構(gòu)建四質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293FT細胞后，根據(jù)熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明成功構(gòu)建HHCN4HTBX3EGFP、HHCN4EGFP、HTBX3EGFP、EGFP四種慢病毒顆粒。病毒滴度測定結(jié)果分別為47107TUML、52107TUML、45107TUML、67107TUML。2、轉(zhuǎn)基因ES細胞相關(guān)基因的表達檢測四種慢病毒轉(zhuǎn)染后的ES細胞挑克隆純化后熒光表達正常，RTPCR示目的基因表達良好。3、ES細胞形態(tài)、凋亡等變化四種轉(zhuǎn)染小鼠ES細胞中，含HHCN4EGFP及EGFP細胞形態(tài)良好，熒光率較高，含HTBX3EGFP和HHCN4HTBX3EGFP細胞狀態(tài)相對差，熒光雖然明顯，但表達不強，培養(yǎng)上清可見漂浮的死細胞。進一步的MTT和流式細胞儀ANNEXINVPE檢測示HTBX3EGFP、HHCN4HTBX3兩組細胞生長速度明顯減慢，凋亡率顯著增高P結(jié)論1成功構(gòu)建出HCN4TBX3基因的慢病毒顆粒。2HCN4及TBX3基因成功在干細胞中過表達。3TBX3對干細胞增殖無促進作用。

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簡介：分類號R7；密級Y972366單FTF℃碼10422③厶菇辦享、J。12；OTF口|審碩士學(xué)位論文SHANDONGUNIVE，SITYMASTER’STHESIS論文題目人牽紛鋤秀鯽一一戶G勰象爹J艇戶；急F百南，‘務(wù)司匆存缸者姓礦一，年J月礦日各業(yè)名務(wù)姓職■一術(shù)敦技B可業(yè)作專指專山求久學(xué)岫I肇也論℃符號說明HHV8HUMANHERPESVIRUS8KSHVKAPOSI’S∞RCOLLLAASSOCIATEDHERPESVIRUS￡LISAENZYMELINKEDIMRAUNOSABENTASSAYKSKAPOSISSARCORILAPBSHRPMCDPEL巧ASDSPAGEIPTGAPS人皰疹病毒8型卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒酶聯(lián)免疫吸嫩試驗卡波氏肉瘤磷酸鹽緩沖液辣艱過氧化物酶多中心性卡斯特萊曼病原發(fā)滲出性淋巴病免疫熒光分析聚丙烯酰胺凝膠電泳異丙基硫代BD_半乳糖苷過硫酸跤

簡介：鷺南大學(xué)周頁士學(xué)位論文題名中英對照廣州地區(qū)兒童病毒性腦炎病原學(xué)研究’作者姓名陳煥輝指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱張玲敏，江振友碩士，副教授學(xué)科、專業(yè)名稱病原生物學(xué)論文提交日期一論文答辯日期答辯委員會主席論文評閱人學(xué)位授予單位和日期暨南大學(xué)年月日廣州地區(qū)兒童病毒性腦炎病原學(xué)研究縮略詞表，，曰一物一叮帥腺病毒巨細胞病毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦脊液病毒酶聯(lián)免疫吸附法熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)印叩腸道病毒單純疤疹病毒流感病毒乙腦病毒麻疹病毒反向被動血凝抑制試驗八乙公一轉(zhuǎn)分呼吸道合胞病毒病毒性腦炎甘，口“恤盯丫小從’

簡介：一、研究目的探索中藥對SARS相關(guān)病毒學(xué)及免疫學(xué)的機理，以雞傳染性支氣管炎模型進行SARS相關(guān)病毒學(xué)研究，以ARDS模型進行SARS相關(guān)免疫學(xué)研究。1、探討雞傳染性支氣管炎病毒IBV的增毒傳代及幾種檢測方法，在體內(nèi)觀察加味升降散的抗病毒作用。2、體外細胞培養(yǎng)觀察加味升降散的抗病毒、抑制病毒作用，以病毒蝕斑定量測定法揭示其可能的抗病毒機理。3、建立小鼠ARDS模型及探討加味升降散改善ARDS模型小鼠血氣的作用。4、探討加味升降散對ARDS模型小鼠氧自由基及炎性介質(zhì)的影響，并揭示其可能的抗氧化機理及細胞免疫調(diào)節(jié)機制。5、探討加味升降散對ARDS模型小鼠T淋巴細胞亞群的作用，并揭示其可能的免疫調(diào)節(jié)機理。二、實驗步驟1、IBV的傳代并檢測2、加味升降散對雞傳染性支氣管炎體內(nèi)模型的影響3、IBV蝕斑減數(shù)實驗4、正常NIH小鼠動脈血氣分析、肺系數(shù)及百草枯LD50的測定5、小鼠ARDS模型的建立、加味升降散的急性毒性實驗及加味升降散對ARDS模型小鼠血氣的影響6、加味升降散對MDA、SOD、NO的影響7、加味升降散對IL1Β、IL2、IL6、IL8及TNFΑ的影響8、加味升降散對小鼠T淋巴細胞亞群的影響三、實驗方法1、按動物病毒學(xué)的方法接種傳代IBV，NDV干擾法及侏儒胚實驗均按動物病毒學(xué)的方法。RTPCR檢測方法按RTPCR試劑盒說明書操作，最終產(chǎn)物做瓊脂糖凝膠電泳，電泳產(chǎn)物進行紫外檢測并用MINIVISIONARYTM凝膠成像系統(tǒng)記錄試驗結(jié)果。2、IBV尿囊液，凍溶后緩慢滴入雛雞雙鼻、雙眼，然后隨機分為正常組，模型組，陽性對照組，中藥大、中、小劑量，攻毒后10小時予以藥物治療，中藥大劑量組21、中劑量組11、小劑量組12濃縮，每只小鼠每天灌胃06ML，分兩次灌胃。陽性藥物組予更昔絡(luò)韋10MGKG，用蒸餾水配制后灌胃06ML只，正常組及模型組灌等體積蒸餾水。共觀察9天，期間主要觀察雛雞的癥狀、大小便、死亡等指標。I3、雞胚成纖維細胞培養(yǎng)按文獻方法進行，培養(yǎng)一天后顯微鏡下觀察，細胞貼壁，滿視野見到致密的細胞單層即可以用于實驗。雛雞肺和氣管等組織研缽好后倒入生理鹽水，并離心取上清，每管加雙抗終濃度為1萬單位ML后稀釋為101～1099個稀釋度。將稀釋好的病毒接種于成纖維細胞上，放37℃、5％CO2的孵育箱中感作45～60分鐘。最后倒入配好的瓊脂糖，待凝固后將培養(yǎng)板倒過來，放在孵育箱中培養(yǎng)24～48小時。到時間觀察蝕斑形成情況并計蝕斑數(shù)。4、左手提取固定小鼠，右手持肝素鈉濕潤的注射器盲穿小鼠心臟，抽動脈血500UL左右，針頭迅速刺入橡皮塞，迅速送血氣分析儀分析，小鼠尸體開胸取肺，電子天平稱重，濕肺重除以體重乘以100得肺系數(shù)。百草枯LD50的測定按汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院謝仰民教授等的方法，將實驗小鼠分為4864MGKG、6144MGKG、768MGKG、96MGKG、120MGKG、150MGKG5個劑量組，一次性灌胃處理。共觀察14天，每日計死亡小鼠數(shù)，24小時內(nèi)死亡不計入統(tǒng)計范圍內(nèi)。實驗數(shù)據(jù)以寇氏法計算。5、1ARDS模型的建立將實驗動物分為5組，即正常組、攻毒后1天、2天、3天、4天組，每組小鼠一次性灌百草枯018ML造模。攻毒后每天采血檢測血氣。各組血氣結(jié)果進行比較分析。2加味升降散的急性毒性實驗將實驗動物分為空白對照組，中藥大、中、小劑量組，實驗前小鼠禁食不禁水12H后一次性灌不同濃縮度中藥03ML，空白對照組灌等體積蒸餾水。每天上、下午各觀察一次，連續(xù)觀察1周，觀察記錄受試小鼠活動、行為及死亡等情況，死亡小鼠及時進行尸檢。3加味升降散對血氣的影響將實驗動物分為正常對照組、模型組、中藥大、中、小劑量組，除正常對照組外一次性灌百草枯018ML造模，10小時后給藥治療，3天后抽動脈血測血氣。實驗結(jié)束時取肺臟用10％福爾馬林固定，進行切片、HE染色，結(jié)果用光鏡觀察并拍照。6、將實驗動物隨機分為5組，即正常對照組、中藥大、中、小劑量組，造模及治療方法同前。SOD、MDA、NO測定均按其試劑盒說明書進行，最后按公式計算。7、實驗動物分組及造模、用藥方法同前。IL1Β、IL2、IL6、IL8及TNFΑ檢測按試劑盒說明書進行，最后按公式計算。8、實驗動物分組及造模、用藥方法同前。實驗結(jié)束時摘除小鼠眼球取靜脈全血約05ML左右抗凝，取30UL全血于上樣管中，按T淋巴細胞亞群試劑盒說明書加CD3、CD4、CD83種熒光抗體，避光孵育15～30分鐘，加1ML已配制好的1溶血素，震蕩混勻后孵育10～15分鐘，澄清之后1000RPM離心5分鐘，去上清，加500ΜLPBS重懸，混勻后上機檢測。四、實驗結(jié)果1、盲傳3代IBV，經(jīng)NDV干擾法測定其滴度IBV的毒力在105～106之間。NDV的效價為11024。侏儒胚實驗其EID50為02毫升10566，這與NDV干擾試驗結(jié)果相符。RTPCR法檢測IBV病毒，證實病毒RNA擴增的大小約為1404BP，與預(yù)期值一致，說明擴增出的病毒為IBV病毒。2、攻毒第1天未見明顯異常，第2天出現(xiàn)輕微的癥狀，如精神不振，呆立等，第3天開始癥狀明顯，出現(xiàn)精神不振、咳嗽、甩鼻、抓鼻、引頸樣呼吸、打噴嚏、呆立、羽毛松亂、進食減少、少數(shù)有氣管羅音，嚴重者出現(xiàn)呼吸困難。攻毒3～7天癥狀明顯，第8天開始癥狀減輕，雛雞開始活躍。攻毒第3天下午開始雛雞死亡，3～5天為死亡高峰期，第6天開始死亡減少，第8天始幾乎無死亡。3、成纖維細胞培養(yǎng)所用的方法是半胚法，細胞貼壁好、生長良好，培養(yǎng)時間短，可以提高效率。培養(yǎng)時間一般為24～48小時，本實驗采用培養(yǎng)1天后進行下一步實驗，細胞生長旺盛、形態(tài)良好。病毒接種于成纖維細胞后成功形成了蝕斑，我們把病毒稀釋了9個濃度，101～109，101～106稀釋度，模型組和藥物組比較差異顯著，用藥組蝕斑明顯減少。當(dāng)稀釋到107時藥物組蝕斑很少，故未進行統(tǒng)計。4、正常NIH小鼠動脈血PAO2KPA范圍為1077～14831207±127PACO2KPA范圍為305～626458±102；肺系數(shù)范圍％為041～076058±0099PQ經(jīng)口染毒LD50為87096MGKG。5、攻毒后第2天開始PAO2、PAO2FIO2等指標均明顯下降，PACO2均顯著增高，與正常組比較，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P＜001。6、SOD造模后指標明顯下降，和正常組比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)，P＜001，用藥后指標呈不同程度升高，和模型組比較，統(tǒng)計學(xué)差異明顯；MDA造模后指標明顯升高，模型組與正常組比較，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，治療后指標明顯下降，各中藥組與模型組比較，統(tǒng)計學(xué)差異非常顯著，P＜001；NO模型組指標和正常組比較，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P＜001，用藥后指標不同程度下降，和模型組比較，有非常顯著統(tǒng)計學(xué)意義，P＜001。7、IL1Β模型組指標顯著高于正常組，P＜001，大劑量組和中劑量組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；IL2模型組指標顯著低于正常組，P＜001，大劑量組、中劑量組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，大、中劑量組與模型組比較，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P＜001，小劑量組與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異；IL6模型組和各中藥組與正常組相比，指標均升高，P＜001，大、中、小劑量組與模型組比較，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P＜001；IL8造模后指標明顯上升，和正常對照組比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，經(jīng)治療后指標不同程度下降，和模型組比較，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，說明治療后指標明顯下降；TNFΑ模型組的指標比正常組明顯升高，P＜001，各中藥組與模型組比較，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，P均＜001，大、中、小劑量比較，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，P＞005。8、CD3、CD4、CD8各指標造模后明顯下降，與正常對照組比較，統(tǒng)計學(xué)差異均顯著，P＜001或P＜005。五、結(jié)論1、我們通過NDV干擾法、侏儒胚實驗、RTPCR法檢測盲傳3代的IBV病毒，明確了所傳病毒確為IBV病毒，其EID50為10566。2、加味升降散能抑制病毒，提高雛雞抵抗力，增強抗病毒能力，能較好地改善癥狀，減少死亡率，中藥有一定死亡保護作用。3、加味升降散能減少病毒蝕斑的形成，有較好的抑制病毒、抗病毒能力。4、受試藥物在設(shè)計的劑量范圍內(nèi)是安全的，對實驗動物無毒性；加味升降散能明顯改善模型小鼠血氣，有升高PAO2降低PACO2作用，并能減輕ARDS模型小鼠癥狀，改善模型小鼠病理損害。5、加味升降散有抗氧化作用，從而改善病理損害。6、加味升降散能夠增強巨噬細胞吞噬功能，抑制巨噬細胞體外分泌IL1、TNFΑ，并能抑制IL6、IL8的分泌，減少炎癥介質(zhì)等對機體的損害，減輕肺水腫，并促進IL2的分泌。本方有免疫調(diào)節(jié)作用。7、加味升降散可以糾正T細胞亞群紊亂狀態(tài)，促進T淋巴細胞增殖，刺激小鼠脾細胞分泌IL2，增強細胞免疫功能。

簡介：溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文臺州地區(qū)兒童?？刹《?0型感染血清流行病學(xué)調(diào)查姓名阮仙利申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科（感染）指導(dǎo)教師朱堅勝20071101溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文均發(fā)生了病毒性腦炎的較大規(guī)模流行，經(jīng)初步研究，主要病原為?？刹《?0型。2004年4月1日開始，浙江省臨海市發(fā)生了病毒性腦炎的暴發(fā)流行，短期內(nèi)病例數(shù)急劇上升，5個月病例數(shù)即達400余例，疫情波及面之廣，發(fā)展之快引起了高度關(guān)注。為了加快病毒性腦炎疫情的控制，更好地保障人民群眾的健康，并為今后病毒性腦炎的疫情控制打下基礎(chǔ)，為此我們建立埃可病毒30型感染的ELISA檢測方法，對臺州地區(qū)的常住人口的兒童作?？刹《?0型血清流行病學(xué)調(diào)查。一、對象與方法L、對象選擇臺州地區(qū)常住入口為研究對象，9個縣、市、區(qū)各選擇兒童50例，總共450例，其中男285例、女165例，年齡15歲141例、6～I0歲179例，1I～15歲130例。抽取血液3ML，分離血清作?？刹《?0型特異性抗體一IGM測定，對兒童?？刹《?0型感染進行血清流行病學(xué)調(diào)查。2、方法通過腦脊液標本收集后進行病毒分離到?？刹《?0型病毒，后克隆、表達?？刹《?0型VP抗原、純化，建立ELISA檢測方法，然后對研究對象的血清作?？刹《?0型特異性抗體測定。二、結(jié)果450例兒童血清?？刹《?0型特異性抗體一IGM陽性共162例，陽性率為36％，不同年齡的陽性率分別為1～5歲陽性率為43％60／141、6“10歲的陽性率為38％68／179、1L“15歲的陽性率為26％34／130，其中低年齡兒童卜10歲的陽性率為40％，高年齡兒童IL～15歲的陽性率為26％，經(jīng)卡方檢驗X29。57，有顯著性差異PO05。9個縣市區(qū)兒童血清?？刹《?0型特異性抗體一IGM陽性率有一定的差別，

簡介：CONSTRUCTIONOFTREESHREWINFECTIONMODELOFHERPESSIMPLEXKERATITISANDTHEPHARM隊CODYNAMICOF14DECARBOXYLASE1112TWODEHYDROGENATIONANDROGRAPHOLIDEPOTASSIUMANDSODIUMSALTSOFSUCCINICACIDHALFESTERINTHEMODELBYXUXUEJIANSUPERVISEDBYPROFLAIRENIIIIIIIIIIIIIIIIIIIILY2974971ATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILMENTOFTHEREQUIREMENTFORMASTERDEGREENANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYNANJING，210095，ERCHINACOMPLETEDINMAY，2014COMMENCEMENTINJUN，2014目錄目錄摘要IABSTRACTIII第一章文獻綜述11疹病毒角膜炎HSK研究進展111HSV1病毒基因與復(fù)制一112HSK的發(fā)病機理313HSK臨床表現(xiàn)72穿心蓮研究進展821穿心蓮的主要成分。822穿心蓮藥理作用一833實驗設(shè)計與實驗?zāi)康摹?0第二章樹韻單純皰疹病毒HSV117角膜炎模型的建立及穿心蓮提取物對其治療效果研究111材料和方法1111實驗動物和材料1L12研究方法122實驗結(jié)果與分析一1521單純皰疹病毒17誘導(dǎo)樹嗣角膜炎模型的構(gòu)建1522穿心蓮提取物對HSV117誘導(dǎo)的樹嗣角膜炎的治療效果研究結(jié)果163討論一224本章小結(jié)22第三章樹購單純皰疹病毒HSV1MCKREA角膜炎模型的建立及穿心蓮提取物對其治療效果研究251材料和方法2511實驗動物和材料2512研究方法，I252實驗結(jié)果與分析2621單純皰疹病毒HSV1MCKREA誘導(dǎo)樹晌角膜炎模型的構(gòu)建2622穿心蓮提取物對HSV1MCKREA誘導(dǎo)的樹晌角膜炎的治療效果研究結(jié)果293討侖373本章小結(jié)37

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文重慶地區(qū)兒童呼吸道合胞病毒和偏肺病毒分子流行病學(xué)研究姓名杜麗娜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師趙曉東20100501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文結(jié)論2008“2009年RSV仍是重慶地區(qū)兒童急性呼吸道感染的主要病原，與既往兩年A亞型優(yōu)勢流行不同，2008．2009年度B亞型毒株流行占優(yōu)；近年新發(fā)現(xiàn)的BA株可能已成為本地區(qū)優(yōu)勢流行株，BA株G基因變異是否導(dǎo)致G蛋白功能增強，進而促進其優(yōu)勢流行尚有待研究?；彡P(guān)鍵詞呼吸道合胞病毒，急性呼吸道感染，G蛋白，核苷酸，氨第二部分重慶地區(qū)急性呼吸道感染患兒人偏肺病毒流行特征目的了解重慶地區(qū)2008．2009年度急性呼吸道感染ARTIS住院患兒人偏肺病毒的流行隋況，并對HMPV的G基因序列進行比較分析。方法收集2008年4月．2009年3月全年于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院因急性呼吸道感染住院的508例患兒鼻咽深部分泌物，用實時熒光定量PCR方法檢測HMPV，再隨機選取12例HMPV陽性標本，用RTPCR的方法擴增全長G蛋白基因并測序，最后通過DNASTAR軟件對基因序列進行分析。結(jié)果在508份標本中，HMPV檢測陽性例數(shù)為60例，陽性率為11．8％。2008年4月至2009年3月間幾乎每個月份除2008年8月和9月均有HMPV感染的陽性標本被檢出，2008年4月至2008年6月為流行高峰，且2008年4月為最高峰，陽性率為31．9％。60例HMPV3