簡介：密級論文題目通直省櫻型I釜鴨圣型旺筮疸壹旦H旦Y2僉王速塹痘堂迥查叢曼巡拉旦叢旦Y佳囪達驗盟宜英文題目MOLECULAREPIDEMIOLOGICALANALYSISOFDUCKHEPATITISB，VIRUSINCHERRY_VALLEYDUCKINHENANPROVINCEANDANTIDUCKHEPATITISBVIRUSACTIVITIESOFFNCINVIVO學位申請人姓名導師姓名學科研究專業(yè)方向論文提交日期學位授予日期河南農(nóng)業(yè)大學學位論文獨創(chuàng)性聲明、使用授權及知識產(chǎn)權歸屬承諾書學位論文題目河南省櫻桃谷鴨乙型肝炎病毒DHBV分子流行病學調(diào)查及FNC抗DHBV體內(nèi)試驗研究差魯I碩士研究生級別J’、一“一學生姓名學位論文是否保密劉揚科L霉翌L預防獸醫(yī)學導師姓名陳陸王川慶否I如需保密，解密時間年月日獨創(chuàng)性聲明本人呈交論文是在導師指導下進行的研究工作及取得研究成果，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得河南農(nóng)業(yè)大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，指導教師對此進行了審定。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。特此聲明。研究生簽名讖奶昂峙日期70116月日導師簽名睜P虧日期形年擁C7ET學位論文使用授權及知識產(chǎn)權歸屬承諾本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學關于保存、使用學位論文的規(guī)定，即學生必須按照學校要求提交學位論文的印刷本和電子版本；學校有權保存提交論文的印刷本和電子版本，并提供目錄檢索和閱覽服務，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。本人同意河南農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學知識產(chǎn)權保護辦法的有關規(guī)定，在畢業(yè)離開河南農(nóng)業(yè)大學后，就在校期間從事的科研工作發(fā)表的所有論文，第一署名單位為河南農(nóng)業(yè)大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權均歸河南農(nóng)業(yè)大學所有，否則，承擔相應的法律責任。注保密學位論文在解密后適用于本授權書。研究生簽名鍘蝻耐導師簽名侈礫眵學院領導簽名圈日期≯F1年6月1同同期沙C年侈FLLQ日期年月日

簡介：目的研究猿腺病毒6型及7型血清中和抗體在中國健康人群、慢性乙型病毒性肝炎及原發(fā)性肝癌中的流行率。方法通過轉染將已構建好的重組缺陷猿腺病毒轉入人胚腎臟293細胞中生產(chǎn)出大量腺病毒，通過改良氯化銫梯度離心法純化獲得高滴度腺病毒，用PBS稀釋得到濃度為51012VPML的腺病毒，放入80。C冰箱中儲存。收集中國5個地區(qū)健康自愿者血清樣本998份，慢性乙肝患者血清樣本196份，原發(fā)性肝細胞癌患者血清樣本193份。最后進行中和滴定實驗。結果在健康志愿者中猿腺病毒6型及7型中和抗體的血清流行率分別是1222％12299895％可信區(qū)間CI，10341440％和1313％13199895％CI，11171536％。在乙肝病人中猿腺病毒6型及7型中和抗體的血清流行率分別是2143％4219695％CI，16262769％和2551％5019695％CI，19923204％。在原發(fā)性肝癌患者中猿腺病毒6型及7型中和抗體的血清流行率分別是2746％5319395％CI21653415％和3109％6019395％CI24983793％。結論猿腺病毒抗體血清流行率在人群中較低，且與年齡及性別無關。本研究將為猿腺病毒載體用于疫苗和基因治療提供依據(jù)。

簡介：華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文犬細小病毒的分離鑒定與生物學特性研究姓名周云朵申請學位級別碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師劉正飛201106華中農(nóng)業(yè)大學2011屆碩士研究生學位論文ABSTACTCANINEPARVOVIRUSCEVEMERGEDIN1978ANDSPREADEDALLOVERTHEWORDSINCETHENTHISDISEASEBECOMESENDEMICWORDWIDETHISSTUDYAIMSTOOBTAINCPVSTRAINSINTHEMIDDLEOFCHINAANDSTUDYTHEIRGENOTYPES，EPIDEMIOLOGYBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDPATHOGENICITY42FECESSWABSTHATWEREPOSITIVEINCOLLOIDALGOLDTESTWERECOLLECTEDFROMPETCLINICSINWUHANTHENTHEYWEREPASSAGEDINFELINEKIDNEY81F81ANDOBSERVATIONBYTRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPIC2PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDACCORDINGTOCONSERVATIVECAPSIDPROTEIN2VP2ANDTHEOTHERPAIRWERESYNTHESIZEDACCORDINGTEFERENCEANOTHER4PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDTOCLONETHEORFOFCPVTHESTRAINSWEREPURIFIEDBYPLAQUEASSAYANDTHENONESTEPGROWTHCURVESWEREOBTAINEDSUBSEQUENTLYTENSECTIONSWEREMADEATTHEENDANIMALEXPERIMENTWASCARRIEDOUT28CPVSTRAINSWEREISOLATED390BP，583BPAND1755BPNUCLEOTIDESEQUENCESWEREACQUIREDAFTERSEQUENCINGANDANALYZINGTHEGENEFRAGMENTS，THERESULTSHOWSTHATALLTHEISOLATESWERECPVWHILE25WERECPV2AAND3WERECPV2BTHESYSTEMPHYLOGENETICANALYSISEXPLORESTHEISOLATES5AND10WERECLOSETOTHECHINESEISOLATES，F(xiàn)ARTHERFROMTHEISOLATESINEUROPEANDTHEAMERICAS，F(xiàn)ARTHESTFROMTHEEARLIESTISOLATETHECURVESSHOWTHEGROWTHOFCPVATDIFFERENTSTAGESAFTERINFECTIONTHEREPRODUCTIVEACTIVITYCOULDREACHORBEYOND105一PFU／M1THERESULTALSOSHOWSTHATTHETWOCURVESWERESLIGHTLYDIFFERENTATTHEBEGINNINGTHECURVEACCORDINGTOTHEEXPERIMENTTHATTHECELLSWEREINFECTEDWHENTHECELLHADPASSAGED8HOURSSHOWEDDESCENDINGATTHEBEGINNINGHOWERE，ANOTHERCURVEWASRISINGALLTHEISOLATESCOULDAGGLUTINATEREDBLOODCELLSOFSWINEUNDERCERTAINCONDITIONSANDTHEAGGLUTINATIONCANBEINHIBITEDTHEPHOTOGRAPHSOFTENSHOWTHATMITOCHONDRIAARESWELLINGTHEORFSOFTHE2ISOLATESWEREOBTAINEDFINALLYANIMALEXPERIMENTSHOWSTHATEVERYDOGHADCLINICALSYMPTOMSINDIFFERENTDEGREES，SUCHASVOMITINGANDBLOODYEXCREMENTAFTERWETESTEDTHEANUSSWABSCOLLECTEDATDIFFERENTTIME，WEFOUNDTHATTHEDOGSHADDISCHARGEVIRUSANDTHEHIGHESTQUANTITYCANREACH102一TCID50THERESULTSOFDISSECTIONREFLECTTHATTHEREARENECROSISINTHESMALLINTESTINEANDTHEMYOCARDIUMBECOMESTHINNERAFTERPATHOLOGICALSECTIONSWEREMADE，OBSERVATIONWERETAKENUPANDTHERESULTSHOWSTHATMYOCARDIALCELLSAREMETAMORPHICANDNECROTICTHISSTUDYPROVIDESGROUNDWORKFORFURTHERSTUDYOFMOLECULARBIOLOGYANDPATHOPOIESIAOFCPVKEYWORDSCANINEPARVOVIRUS；ISOLATION；TEN；ANIMALASSAYⅡ

簡介：浙江大學碩士學位論文邱小伙2012分類號密級洳≥J、涪單位代碼Q335學號21QQ魚3碩士學位論文⑧豬圓環(huán)病毒2型感染的流行病學檢測技術研究STUDIESONDIAGNOSTICTECHNIQUEOFEPIDEMIOLOGICALSURVEYOFPORCINECIRCOVIRUSTYPE2INFECTION姓名邱小伙指導教師周繼勇教授學科、專業(yè)預防獸醫(yī)學所在學院動物科學學院提交日期二零一三年一月中國杭州浙江大學碩士學位論文邱小伙2012STUDIESONDIAGNOSTICTECHNIQUEOFEPIDEMIOLOGICALSURVEYOFPORCINECIRCOVIRUSTYPE2INFECTIONBYXIAOHUOQIUSUPERVISORPROFESSORJIYONGZHOUADISSERTATIONFORMASTERDEGREEPREVENTIVEVETERINARYMEDICINECOLLEGEOFANIMALSCIENCEZHEJIANGUNIVERSITYHANGZHOU，PR。CHINAJANUARY2013

簡介：中山大學博士學位論文家蠶質(zhì)多角體病毒入侵、復制機理的電子顯微學研究姓名譚玉蓉申請學位級別博士專業(yè)生物物理學指導教師張景強20050420中山人學博士學位論文ABSTRACTCYPOVIRUSESCPVSARENONENVELOPEDDOUBLESTRANDEDRNA陽SRNAVIRUSESANDBELONGTOTHEGENUSCYPOV打USINTHEFAMILYREOVIRIDAECPVSINFECTMIDGUTEPITHELIALCELLSOFAWIDERANGEOFINSECTSATPRESENT，THEMODEOFCPVENTRYISNOTFINALLYRESOLVEDACCORDINGTOKOBAYASHI1971，BOMBYXMORICYPOVIRUS1BMCPV1VIRIONSINJECTTHEVIRALCOREMATERIAL，THROUGHTHEVIRALSPIKE，INTOTHECYTOPLASMOFMIDGUTCELLSINPRIMARYCULTURE，WITHTHEINTACTCAPSIDSHELLREMAININGOUTSIDETHECELLSURFACEMORERECENFLY’BELLONCIKETA11986PROPOSEDTHATEUXOASCANDENSCPVESCPVVIRIONSENTEREUXOASCANDENSCELLLINEBYENDOCYTOSISUNTILNOWNO／NVIVOSTUDYONCPVENTRYHASBEENREPORTEDHEREWEREPORTEDAN／NVIVOELECTRONMICROSCOPICSTUDYOFTHEENTRYOFBMCPV1INTOMIDGUTCELLSOFSILKWORMBOMBYXMORIOURRESULTSSHOWEDINTACTBMCPV1VKIONSENTEREDMIDGUTCELLSINVIVOBYDIRECTPENETRATIONOLTHEPLASMAMEMBRANE，WHICHISREPORTEDFORTHEFIRSTTIMECPVREPLICATIONHASNOTBEENWELLDOCUMENTEDEARLYSTUDYUSINGAUTORADIOGRAPHYATTHELIGHTMICROSOPICLEVELSHOWEDTHATCPVRNAISPRODUCEDINTHENUCLEUS，ANDTHENTRANSMITTEDINTOTHECYTOPLASMWHERETHECOMPLETEVIRUSISFORMEDWITHITSPROTEINCOATHOWEVERTHISFINDINGISCONFLICTINGWITHTHATOFOTHERREOVIRIDAEMEMBERS，WHOSEWHOLEREPLICATIONPROCESSHASBEENFULFILLEDINTHECYTOPLASMOFHOSTCELLSTOCLARIFYANDLOCALIZETHESYNTHESISSITEOFCPVRNAELECTRONMICROSCOPIC／NSITUHYBRIDIZATIONTECHNIQUEWASUSEDINTHISSTUDYULTRASTRUCTURALLOCALIZATIONOFBMCPV1NUCLEICACID，WITHVIRUSSPECIFICDIGOXYGENINLABELLEDOLIGODEOXYNUCLEOTIDEPROBE，SHOWEDTHATVIRALPLUSSTRANDEDRNASREPLICATIVEINTERMEDIATEWEREPRODUCEDINTHENUCLEOLUSOFMIDGUTCOLUMNARCELLSANDTHESYNTHESISOFVIRALDOUBLESTRANDEDRNAGENOMEOCCURREDINTHECYTOPLASMICVILOGENICSTROMAVSINORDERTOUNDELSTANDTHEPATHWAYOFSYNTHESIS，TRANSPORTANDASSEMBLYOFVIRALPROTEINS，BMCPV1SPECIFICANTIBODYWASEMPLOYEDTODETECTANDLOCALIZEVIRALPROTEINWITHINHOSTCELLSUSINGIMMUNOELECTRONMICROSCOPYTHERESULTSSHOWEDTHATVIRALPROTEINSWERESYNTHESIZEDBYRIBOSOMEANDTRANSPORTEDINTONEARBYVSFORACCUMULATIONACCORDINGTHERESULTSOFULTRASTRUCTURALLOCALIZATIONOFINTRACELLULARVIRALNUCLEICACIDANDVIRALPROTEINS，WEPROPOSEDTHEHYPOTHESISFORASSEMBLYOFBMCPV1，THATIS，WITHINTHEVS，VIRALPROTEINSASSOCIATEDWITH10SEGMENTSOFPLUSSTRANDEDRNASFORMPRECURSORVIRIONTHENSYNTHESIZEVIRALDOUBLESTRANDEDRNAINTHEPRECURSORVIFION，F(xiàn)INALLYMATURETOINTACTVIRIONKEYWORDSBOMBYXMORIEYPOVIRUS1，ENTRYREPLICATION，IMMNNOELECTRONMICROSCOPYELECTRONMICROSCOPICINSITUHI，BRIDIZATIONIL

簡介：目的本課題采用同位素相對標記與絕對定量技術（ISOBARICTAGSFRELATIVEABSOLUTEQUANTITATION，ITRAQ），探索慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證、脾胃濕熱證與健康正常人之間的差異表達蛋白質(zhì)，尋找慢性乙型肝炎肝郁脾虛證、脾胃濕熱證的差異蛋白表達譜，初步篩選出肝郁脾虛證、脾胃濕熱證的潛在生物學標志物，為慢性乙型病毒性肝炎中醫(yī)證候的本質(zhì)提供現(xiàn)代化依據(jù)，推動該病中醫(yī)證候診斷客觀化的研究。方法運用蛋白質(zhì)組學ITRAQ技術對臨床單位采集的慢性乙型肝炎肝郁脾虛證、脾胃濕熱證患者及健康正常人進行蛋白質(zhì)檢測，采用SPSS190系統(tǒng)、MOT鑒定軟件進行數(shù)據(jù)分析，篩選出兩種證型可能的差異表達蛋白質(zhì)。結果1肝郁脾虛證組和健康對照組比較，共篩選出157個差異表達蛋白（P＜005），其中112個蛋白上調(diào)，45個蛋白下調(diào)；脾胃濕熱證組和健康對照組比較，共篩選出163個差異表達蛋白（P＜005），其中128個蛋白上調(diào)，35個蛋白下調(diào)。2肝郁脾虛證組和脾胃濕熱證組比較，肝郁脾虛組共篩選出30個差異表達蛋白（P＜005），22個蛋白上調(diào)，8個蛋白下調(diào)。其中，發(fā)現(xiàn)表達差異倍數(shù)在兩倍以上的蛋白1個TUBA1A上調(diào)表達；脾胃濕熱證組和肝郁脾虛證組比較，脾胃濕熱組共篩選出24個差異表達蛋白（P＜005），22個蛋白上調(diào)，2個蛋白下調(diào)。其中，發(fā)現(xiàn)表達差異倍數(shù)在兩倍以上的蛋白6個ACTA2、ACTG2、ZNF628、DEFA1、DEFA3、CAM均上調(diào)表達。3差異蛋白與課題組前期兩證型MICRNA分析均表明酶活性調(diào)節(jié)、代謝過程、細胞發(fā)育、細胞凋亡、炎癥應答、免疫反應等功能為慢性乙型肝炎肝郁脾虛證相關；免疫系統(tǒng)、細胞殺傷、細胞凋亡、刺激反應、肌動蛋白等功能可能與慢性乙型肝炎脾胃濕熱證相關。結論1慢性乙型肝炎肝郁脾虛和脾胃濕熱證組與健康對照組存在差異蛋白表達。2TUBA1A可能是慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證的潛在生物學標志物；ACTA2、ACTG2、ZNF628、DEFA1、DEFA3、CAM可能是慢性乙型病毒性肝炎脾胃濕熱證的潛在生物學標志物。3肝郁脾虛證和脾胃濕熱證組中，差異蛋白和課題前期研究MICRNA間存在共同的功能。4本研究探索性的應用蛋白組學ITRAQ技術，進一步證明了此技術在慢性乙型肝炎中的科學性與創(chuàng)新性，可為今后慢性乙肝的研究提供參考依據(jù)。

簡介：、●’●，E1羊分類號密級華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學調(diào)查及NSP2、ORF5基因的遺傳變異分析PATHOGENICPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYVIRUSMOLECULAREPIDEMIOLOGY；GENETICVARIATIONOFNSP2ANDORF5研究生郭雪亮指導教師方六榮教授指導小組肖少波教授專業(yè)預防獸醫(yī)學江云波副教授羅銳講師研究方向動物病毒學獲得學位名稱農(nóng)學碩士獲得學位時間2011年6月華中農(nóng)業(yè)大學動物科學動物醫(yī)學院二。一一年六月IL■■R、N善氅，、華中農(nóng)業(yè)大學學位論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權書學位論文否如需保密，解密時間年月日是否保密獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，指導教師對此進行了審定與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。黜張蠶嘞帆刎件∥月它日學位論文使用授權書本人完全了解“華中農(nóng)業(yè)大學關于保存、使用學位論文的規(guī)定“，即學生必須按照學校要求提交學位論文的印刷本和電子版本；學校有權保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文本人同意華中農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。注保密學位論文在解密后適用于本授權書學位論文作者簽名南而勃導師簽名云，蒸’簽名日期力，『年占月2日簽名日期乙一DIF年6月E日

簡介：浙江理工大學碩士學位論文一株苜?；ㄈ~病毒的全基因組序列及其寄主生物學研究姓名金磊磊申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師陳集雙201103浙江理工大學碩士論文本研究還構建了AMVHZ與CMVFNY間的人工假重組體FLF2A3，體外轉錄實驗證實此重組體沒有侵染活性。關鍵詞苜?；ㄈ~病毒，雙鏈心A，單引物擴增技術，序列分析，寄主生物學II

簡介：禽流感病毒宿主范圍廣泛，不僅可以感染各種禽類，對家禽養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟損失，偶爾也可感染人類，因其感染后引起的高死亡率而嚴重危害著人類的生命健康。流感病毒的生存嚴格依賴于宿主細胞，病毒的感染、復制、致病以及逃避宿主免疫離不開與宿主各種蛋白發(fā)生相互作用。非結構蛋白NS1是流感病毒的一個重要的毒力因子，它能夠通過多種策略逃避宿主免疫反應而調(diào)節(jié)病毒的復制。NS1蛋白的81113位氨基酸能夠招募宿主蛋白真核翻譯起始因子4GIEIF4GI到病毒MRNA5端未翻譯區(qū)，優(yōu)先翻譯病毒MRNA，促進病毒復制。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)NS1片段缺失EIF4GI結合區(qū)的重組H5N1禽流感病毒RNS1SD30相對于野生病毒RNS1WT，在體內(nèi)和體外實驗中其毒力和致病性都顯著地降低，并且在MDCK細胞上抑制干擾素的能力也受到損傷。然而重組缺失毒RNS1SD30感染引起的宿主蛋白變化，以及有那些宿主因子參與了毒力及其致病的降低的作用機制還不清楚。不均一核糖核蛋白（HNRNPS）家族蛋白的功能繁多，主要參與細胞中MRNA的剪接、轉錄、穩(wěn)定、翻譯和轉運等的調(diào)節(jié)功能，一些蛋白還參與了宿主的免疫調(diào)節(jié)。近年來有關HNRNPS調(diào)控病毒復制的研究越來越多，通過調(diào)節(jié)病毒MRNA的剪接以及與病毒蛋白互作調(diào)節(jié)病毒復制，而HNRNPK參與了多個病毒的復制過程。HNRNPK直接與甲型流感病毒的M1MRNA結合促進M1MRNA剪接產(chǎn)生M2MRNA，導致編碼產(chǎn)生的M2蛋白增多，進而促進流感病毒的復制。然而HNRNPK與流感病毒蛋白的相互作用以及是否參與了宿主的天然免疫調(diào)節(jié)還不清楚。本研究采用比較蛋白質(zhì)組學的方法研究了RNS1WT及RNS1SD30病毒感染雞胚成纖維CEF細胞后蛋白質(zhì)的差異表達情況，研究了差異表達蛋白ANXA7對病毒增值以及禽天然免疫調(diào)節(jié)的作用，還研究了人源HNRNPK與流感病毒的相互作用以及調(diào)控IFN產(chǎn)生的作用機制。本研究主要研究內(nèi)容和結果如下1RNS1WT及RNS1SD30病毒感染CEF的蛋白質(zhì)組學研究RNS1WT及RNS1SD30病毒感染CEF12H，24H和36H后運用蛋白質(zhì)組學鑒定到81個差異表達宿主蛋白，對鑒定到的蛋白進行功能分類分析，發(fā)現(xiàn)這些差異蛋白主要參與了細胞骨架的形成、凋亡和應激反應、轉錄調(diào)節(jié)、MRNA加工剪切、運輸和代謝以及信號轉導等進程。進而克隆表達部分基因并研究其對病毒復制的影響，發(fā)現(xiàn)ANXA7抑制RNS1SD30在DF1細胞的增殖，而對RNS1WT并沒有影響。2ANXA7通過調(diào)節(jié)MDA5的表達正調(diào)控雞RLR信號通路構建了雞RLR信號通路研究平臺，發(fā)現(xiàn)ANXA7、ALDH7A1及DCTN2等蛋白促進MDA5誘導的IFNΒ產(chǎn)生。進一步研究發(fā)現(xiàn)ANXA7促進RNS1SD30刺激的IFNΒ產(chǎn)生，而并不影響RNS1WT誘導的IFNΒ產(chǎn)生。ANXA7促進POLYI∶C及MDA5介導的IFNΒ產(chǎn)生通過靶向MDA5并調(diào)節(jié)其蛋白表達，同時ANXA7與MDA5存在相互作用，其C端鈣離子磷脂結合區(qū)是促進IFNΒ的關鍵區(qū)域。3人源HNRNPK通過與NS1蛋白互作促進流感病毒增殖流感病毒感染A549細胞下調(diào)HNRNPK的表達，同時過表達HNRNPK顯著促進多個亞型流感病毒的增殖，沉默HNRNPK抑制病毒的增殖。進一步發(fā)現(xiàn)HNRNPK與NS1存在RNA非依賴性的相互作用，NS1的N端RBD以及HNRNPK的RNA結合區(qū)KH2和蛋白蛋白互作區(qū)KI是NS1與HNRNPK發(fā)生相互作用的關鍵區(qū)域。HNRNPK的RNA結合區(qū)KH2和核穿梭區(qū)KNS是促進流感病毒增殖的關鍵區(qū)域。4HNRNPK抑制IFNΒ產(chǎn)生并參與到NS1逃避的天然免疫研究發(fā)現(xiàn)HNRNPK抑制流感病毒和仙臺病毒SEV介導的IFNΒ產(chǎn)生以及IRF3的磷酸化。進一步研究發(fā)現(xiàn)HNRNPK與RIGⅠ信號通路的TRAF3發(fā)生相互作用，HNRNPK的兩個RNA結合區(qū)KH1和KH2以及蛋白互作區(qū)KI和TRAF3的RINGFINGER在TRAF3與HNRNPK的相互作用中起著關鍵作用。此外，研究發(fā)現(xiàn)HNRNPK能夠增強NS1蛋白抑制的流感病毒介導的IRF3磷酸化，并且HNRNPK的存在有利于NS1TRAF3復合物的形成。

簡介：口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種重大動物疫病，我國歷史上發(fā)生和近年來流行的有O、A和ASIA1三個血清型，其中O型口蹄疫對我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的威脅最大。疫苗免疫是防控本病的重要手段，現(xiàn)有的市售口蹄疫疫苗包括常規(guī)滅活疫苗和合成肽疫苗。但是，前者不利于與口蹄疫病毒自然感染動物的鑒別診斷，后者在有新發(fā)外來病毒株入侵時可能會出現(xiàn)免疫失敗。目前，隨著口蹄疫反向疫苗學的發(fā)展，借助基因工程手段缺失或沉默口蹄疫病毒非結構蛋白的免疫優(yōu)勢表位創(chuàng)制的負標記疫苗有效解決了第一個瓶頸問題本研究探索性地在口蹄疫病毒外部衣殼蛋白VP3的GH環(huán)中進行靶向改造，旨在為廣譜、多聯(lián)（價）、正標記疫苗的研發(fā)提供借鑒性思路。首先，為了評估外部衣殼蛋白VP3GH環(huán)展示外源標簽的能力，本研究利用成熟的O型CATHAY拓撲型口蹄疫病毒反向遺傳操作技術平臺POFS→RHN，構建了兩種HA插入型（第31713172位）的基因組全長CDNA。遺憾的是，未能拯救到基因工程毒。遂將HA、FLAG、VSVG替換性引入該區(qū)段，構建了六種外源標簽替換型的基因組全長CDNA。同樣地，也未能獲得基因工程毒，而且，其中一種HA替換型的口蹄疫病毒基因組全長CDNA經(jīng)密碼子優(yōu)化后仍無法獲得基因工程毒。這表明骨架病毒RHN的VP3GH環(huán)中存在著與口蹄疫病毒感染性相關的關鍵性氨基酸。為此，本研究對照一種HA修飾型質(zhì)粒，對骨架病毒的基因組全長感染性CDNA進行定點突變，構建了四種突變型質(zhì)粒，同時，參考C型和SAT2型口蹄疫病毒代表株，構建了三種血清型間嵌合型質(zhì)粒。轉染結果證實，僅有突變型質(zhì)粒POFSV3174Y和血清型間嵌合型質(zhì)粒POFSD3173NV3174EN3179C具有感染性，兩種定點突變體分別命名為RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C。最后，本研究對兩種定點突變體與骨架病毒進行了生物學特性鑒定和免疫血清學比較分析。試驗發(fā)現(xiàn)，①RHND3173NV3174EN3179C定點突變體在BHK21細胞上連續(xù)傳代時容易引發(fā)假回復突變和第二位點突變②RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C細胞傳代毒均獲得了侵染CHO系列細胞的能力（非RGD依賴型受體），③RHN、RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C遺傳穩(wěn)定株在BHK21細胞上的蝕斑表型、復制動力學略有差異，但差異不顯著。④與RHN相比，RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C遺傳穩(wěn)定株的體內(nèi)外致病力均有下降，后者更為明顯⑤與RHN的免疫陽性血清相比，RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C遺傳穩(wěn)定株的免疫陽性血清對我國現(xiàn)已分離的O型MYA98和PANASIA1譜系FMDV的交叉中和能力均有不同程度的改變，且后者的R值均大于05符合OIE規(guī)定標準，R≥03。上述研究結果提示，可通過嘗試性地在空間結構上外露于病毒衣殼表面且靠近口蹄疫病毒抗原位點的莖環(huán)區(qū)進行氨基酸殘基的人為修飾，有望針對性地拓實口蹄疫疫苗候選株的免疫效力。

簡介：LILLIIIIIIILLLITILY3393832密級論文編號中國農(nóng)業(yè)科學院學位論文基因重組對歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒生物學特性的影響THEEFFECTSOFGENERECOMBINATIONONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFEUROPEANAVIANLIKEH1N1SUBTYPESWINEINFLUENZAVIRUS碩．士研究生汪琪指導教師于海研究員申請學位類別農(nóng)學碩士專業(yè)預防獸醫(yī)學研究方向獸醫(yī)微生物及其分子生物學培養(yǎng)單位上海獸醫(yī)研究所研究生院2018年5月SECRECYNO。CHINESEACADEMYOFAGRICULTURALSCIENCESDISSERTATIONTHEEFFECTSOFGENERECOMBINATION．ONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFEUROPEANAVIANLIKEH1N1SUBTYPESWINEINFLUENZAVIRUSM．S．CANDIDATEQIWANGSUPERVISORPROFESSORHAIYUMAJORPREVENTIVEVETERINARYMEDICINESPECIALTYVETERINARYMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGYMAY2018

簡介：目的在桿狀病毒表達系統(tǒng)中表達融合蛋白乙型肝炎病毒前C蛋白小鼠IGGFC蛋白HBVPRECEPROTEINMOUSEIGGFC，HBVPRECFC，擴增桿狀病毒。在SF9細胞中表達，探索表達的最佳條件，純化得到純度高的蛋白，通過免疫BALBC小鼠鑒定其免疫原性。方法目的基因HBVPRECFC連接到PFASTBAC1載體，獲得的PFASTBAC1HBVPRECFC質(zhì)粒轉化DH10BAC感受態(tài)，通過TN7轉座子將目的基因轉座到BAC中，得到BACHBVPRECFC穿梭載體，脂質(zhì)體包被后轉染SF9昆蟲細胞獲得P1代病毒，重復轉染SF9獲得高滴度病毒。為了提高蛋白的產(chǎn)量，確定MOI前提下收獲36，48，60，72，84，96，108，120小時收獲細胞上清，通過WESTERNBLOT方法鑒定并確定最佳的收獲時間再在最佳收獲時間前提下，設置MOI為1，2，4，8，16，32收獲細胞上清，通過WESTERNBLOT方法鑒定并確定最佳的病毒濃度。在最佳時間和最佳病毒濃度下收集細胞上清超濾后通過PROTEING親和層析柱純化得到目的蛋白HBVPRECFC。純化的蛋白大腿內(nèi)側肌肉注射免疫BALBC小鼠并檢測血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗體產(chǎn)生量。結果HBVPRECFC在昆蟲細胞中成功表達，純化后蛋白純度達90％以上，蛋白產(chǎn)量約為303MGL，純化蛋白能有效刺激BALBC小鼠產(chǎn)生特異抗體。結論成功在桿狀病毒表達系統(tǒng)中表達了具有免疫原性的HBVPRECFC蛋白，為生產(chǎn)乙肝治療性疫苗奠定了基礎。

簡介：目的研究乙型肝炎病毒相關性腎炎患者的尿液蛋白質(zhì)譜特點，并與原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者及健康人尿液蛋白質(zhì)譜進行比較，篩選出乙型肝炎病毒相關性腎炎尿液中差異表達的蛋白質(zhì)，探討質(zhì)譜技術對該病的臨床診斷意義。方法留取健康人N3、原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎N3及乙型肝炎病毒相關性腎炎患者N6的空腹清潔中段晨尿標本，避免細菌生長和蛋白酶解于1小時內(nèi)放置于80℃冰箱保存?zhèn)溆?。取?2份標本溶解完全后，用直徑022ΜM的微孔超濾膜過濾除去較大的雜質(zhì)，再用20℃預冷丙酮進行蛋白沉淀，置于20℃冰箱過夜后，經(jīng)4℃4000XG離心20分鐘，棄上清液，留取含尿蛋白的沉淀物，真空干燥濃縮。濃縮干燥的蛋白沉淀物用PBS充分溶解后應用BRADFD法測定蛋白濃度。據(jù)測定的標本蛋白濃度稱取每例樣品含1MG蛋白質(zhì)的混合固體，充分酶解后調(diào)整蛋白濃度為1ΜGΜ1，行HPLCESIMSMS分析，得到的肽序列結果用MOT軟件行數(shù)據(jù)庫檢索，所用的庫為IPIHUMAN，V305。將查得的蛋白序列號在UNIPROT數(shù)據(jù)庫中進行檢索，查詢所表達的蛋白質(zhì)名稱、蛋白的作用及細胞學定位等相關信息。結果健康人3份尿液標本中共鑒定出101種蛋白質(zhì)，通過手工驗證，所有3份標本共同表達了37種蛋白質(zhì)。原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者的3份尿液標本共鑒定出73種蛋白質(zhì)，所有3份標本中共同表達了15種蛋白質(zhì)。乙型肝炎病毒相關性腎炎患者的6份尿液標本共鑒定出206種蛋白質(zhì)，所有6份標本共同表達了19種蛋白質(zhì)。從乙型肝炎病毒相關性腎炎患者共有的19種蛋白質(zhì)中手工剔除檢測出的健康人及原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者尿液中也存在的蛋白質(zhì)，還剩余9種蛋白質(zhì)，它們分別是血漿銅藍蛋白、Α1抗胰凝乳蛋白酶、IGΛ鏈C區(qū)、IGΓ2鏈C區(qū)、IGΑ1鏈C區(qū)、IGΑ2鏈C區(qū)、維生素D結合蛋白、前列腺素D2合酶、未命名蛋白C9JAM6。結論本實驗利用HPLCESIMSMS技術研究了乙型肝炎病毒相關性腎炎患者的尿液蛋白質(zhì)譜特點，得到206種蛋白質(zhì)，并與健康人及原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者尿液蛋白譜進行比較，尿液中有特異性表達的Α1抗胰凝乳蛋白酶、前列腺素D2合酶、血漿銅藍蛋白、維生素D結合蛋白有可能成為乙型肝炎病毒相關性腎炎的生物標志物。

簡介：點擊查看更多人類新型冠狀病毒NL63木瓜樣蛋白酶生物學功能研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：背景目前研究數(shù)據(jù)表明拉米夫定有助于改善乙肝病毒自發(fā)活動引起的慢加急性肝衰竭的肝功能及提高短期生存率，但與長期預后及耐藥有關的數(shù)據(jù)仍有限。本文旨在探索早期病毒應答對乙肝病毒再活動引起的慢加急性肝衰竭96周的預后及耐藥的預測作用。方法回顧性搜集140例于我科住院符合乙型肝炎病毒自發(fā)再活動導致的慢加急性肝衰竭患者的臨床數(shù)據(jù)，其中76例給予拉米夫定支持治療（LAM組），64例僅給予支持治療（非核苷類似物組）。所有病人隨訪至96周或者死亡，主要的觀察終點為96周的生存率以及4周和12周時病毒應答與96周預后及耐藥的關系。結果96周時LAM組累計生存率明顯高于非核苷類似物組43765658％VS9641406P0000。4周時完全病毒應答患者96周隨訪期間其生存率明顯高于部分病毒應答患者27299310VS16453556P0000。完全病毒應答患者MELD評分明顯高于部分病毒應答患者。二元回歸分析表明4周時完全病毒應答及MELD評分是96周預后的獨立預測因子。隨訪結束時有12例出現(xiàn)LAM耐藥，耐藥率為2222，且都來自于4周部分病毒應答患者。結論LAM治療明顯提高乙肝病毒再活動引起的ACLF患者的長期預后，且4周時完全病毒應答對長期的臨床預后及耐藥具有預測價值。