簡介：碩士學位論文輪狀病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫學研究IMMUNOREACTIVITI，OFROTAVIRUSVP7PITOHIMERICITEINSOTROTAVIRUSVEPLTOPECMERICPROTEINS所院姓名指導教師導師小組學科專業(yè)研究方向完成日期醫(yī)學生物學研究所趙冰心陳元鼎研究員文喻玲副主任技師病原生物學分子病毒學及基因工程疫苗二零一四年五月中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院碩士研究生畢業(yè)論文4．純化蛋白濃度的測定??????????????375．RV感染性滴度的檢測????????????386．免疫動物血清中和抗體檢測?????????????387WESTERNBLOT檢測重組嵌合蛋白的免疫原性????????39討論．?????．．???．．．???．．．．．．．．?．43D、結．．．?45參考文獻??????????????????????46附錄????50一縮略詞????????????????????50二主要溶液配方????????????????52三主要實驗方法????????????????59四TBCHEN株VP6編碼基因核苷酸序列及氨基酸序列?????65五TBCHEN株VP6F載體編碼基因核苷酸序列????????66致謝?67研究生簡歷?????????????????????68獨創(chuàng)性聲明?????????????????OOOO0??69學位論文版權使用授權書????????????????69

簡介：中圖分類號UDC學校代碼10055密級公開蠢蕊犬淫碩士學位論文面向病毒學研究的快速文獻檢索算法及服務平臺AFASTREVIEWALGORITHMANDSERVICEPLATFORMFORVIRUSRESEARCH南開大學研究生院二零一六X牛R五月一令一／＼丑月南開大學學位論文使用授權書本人完全了解南開大學關于研究生學位論文收藏和利用管理辦法關于南開大學簡稱“學?！毖芯可鷮W位論文收藏和利用的管理規(guī)定，同意向南開大學提交本人的學位論文電子版及相應的紙質本，并委托印刷存檔論文。本人了解南開大學擁有在中華人民共和國著作權法規(guī)定范圍內(nèi)的學位論文使用權，同意在以下幾方面向學校授權。即1學校將學位論文編入南開大學博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并作為資料在學校圖書館等場所提供閱覽，在校園網(wǎng)上提供論文目錄檢索、文摘以及論文全文瀏覽、下載等信息服務；2學?？梢圆捎糜坝　⒖s印或其他復制手段保存學位論文；學校根據(jù)規(guī)定向教育部指定的收藏和存檔單位提交學位論文；3非公開學位論文在解密后的使用權同公開論文。4同意學校將本人向有關電子出版單位授權的學位論文含電子版和授權書轉交相關授權單位。本人承諾本人的學位論文是在南開大學學習期間創(chuàng)作完成的作品，并己通過論文答辯；提交的學位論文電子版與紙質本論文的內(nèi)容一致，如因不同造成不良后果由本人自負。本人簽署本授權書一份，交圖書館留存。學位論文作者暨授權人親筆簽字錘絲20J量年』虹月』L日南開大學研究生學位論文作者信息論文題目面向病毒學研究的快速文獻檢索算法及服務平臺姓名任迪學號2120130108答辯日期2016年5月27日論文類別博士口學歷碩士團專業(yè)簿準噘士口同等學力碩士口劃L，陋擇學院單位數(shù)學科學學院學科／專業(yè)專業(yè)學位名稱生物信息學聯(lián)系電話15222895037電子郵箱RENDI鋤MILNANKAIEDUCN通信拋址郵渤南開大學西區(qū)公寓3號樓2單元403郵編300071非公開論文編號備注注本授權書適用我校授予的所有博士、碩士的學位論文。由作者填寫份并簽字后交校圖書館，如已批準為非公開學位論文，須附批準通過的南開大學研究生申請非公開學位論文審批表和“非公開學位論文標注說明”頁。

簡介：SEROLOGICALSURVEYOFCANINEINFLUENZAINSOMEAREASOFGUANGDONGANDⅥRUSISOLATIONANDIDENTIFICATIONGNOHAOSUPERVISORSPROF．LIUYONGJIEPROF．LUOWEIQIANGATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEMASTEROFPROFESSIONALDEGREEINVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINAPRIL，2013COMMENCEMENTINAPRIL，2013目錄目錄目錄????????????????????????????????????????????．I摘要??????????????????????????????????．IABSTRACT????????????????????????????????????????．Ⅲ縮略語及符號??????????????????????????????V第一章文獻綜述????????????????????????????．．11流感病毒的病原學特征???????????????????????11．1流感病毒的結構與理化特性??????????????????．11．2病毒的分類?????????????????????????．11．3增殖特性??????????????????????????．21．4血凝特性??????????????????????????．21．5分子特征??????????????????????????．32犬流感流行病學研究進展??????????????????????52．1H3N8亞型犬流感???????????????????????52．2H5N1亞型犬流感???????????????????????62．3HINL亞型犬流感???????????????????????62．4H3N2亞型犬流感???????????????????????72．5其他亞型犬流感???????????????????????．73犬流感檢測方法研究進展??????????????????????83．1血清學檢測?????????????????????????．83．2病原學檢測?????????????????????????．84犬流感的危害與公共衛(wèi)生意義????????????????????9參考文獻?????????????????????????????．．10第二章H3亞型犬流感的血清流行病學調查?????????????????151材料與方法????????????????????????????151．1犬血清樣本的收集??????????????????????151．2菌株與血清?????????????????????????1613剌『料?????????????????????????????????????161．4血清處理??????????????????????????161．5血凝與血凝抑制試驗?????????????????????162結果????????????????????????????????????????。172．1樣品來源與總陽性率?????????????????????172．2寵物犬、農(nóng)家犬、流浪犬H3亞型抗體陽性率比較????????172．3不同區(qū)域寵物犬H3亞型CIV抗體檢測?????????????．182．4不同區(qū)域農(nóng)家散養(yǎng)犬H3亞型CIV抗體檢測???????????．183討論????????????????????????????????????????。19

簡介：目的探索慢性乙型病毒性肝炎患者治療前及治療中血清趨化因子水平和聚乙二醇干擾素治療后病毒學應答之間的相關性。方法納入基因型為B型的慢性乙肝患者36例，于首次干擾素治療前及治療后3月采血，檢測血清CXCL9、CXCL10、CCL3、CCL5濃度。所有患者均接受聚乙二醇干擾素Α2A180ΜGQW治療，并記錄患者接受治療前和治療后3個月及6個月的臨床資料。結果二元LOGISTIC回歸分析發(fā)現(xiàn)，僅治療前血清CXCL9及AST是早期病毒學應答的獨立預測指標。將患者分為血清CXCL9大于3951NGL和血清CXCL9小于3951NGL兩組，治療3個月時，兩組的早期病毒學應答率分別為7895％1519和2353％417，兩組間差異有顯著性P結論CXCL9表達水平較高且基因型為B型的患者經(jīng)聚乙二醇干擾素治療后病毒學應答率較高，可能有利于指導慢性乙型病毒性肝炎患者的個體化用藥。

簡介：背景人類腸道病毒HUMANENTEROVIRUS，HEV屬于微小核糖核酸病毒科（PICNAVIRDAE）腸道病毒（ENTEROVIRUS）屬，是一類在人類腸道繁殖的常見病毒。HEV通常以無癥狀的隱性感染為主，病人和無癥狀帶毒者為其主要的傳染源，主要通過分泌物或排泄物及其污染的物品而經(jīng)糞口、日常接觸、空氣飛沫等途徑傳播，對易感人群具有高度的感染性，兒童是最敏感的人群，受感染后可獲得免疫力。HEV在人體腸道中增殖，但很少引起腹瀉等消化道癥狀，是以消化道為原發(fā)灶的全身感染，感染過程中形成病毒血癥，在臨床上可引起多種疾病，如急性弛緩性麻痹ACUTEFLACCIDPARALYSIS，AFP、腦膜炎或腦炎、心肌炎、急性出血性結膜炎、手足口病（H，F(xiàn)OOTMOUTHDISEASE，HFMD）、類感冒病癥等。近年來，由HEV引起的各種疾病的發(fā)生率一直呈明顯上升趨勢。傳統(tǒng)上根據(jù)病毒在人或靈長類動物來源細胞上的復制能力，在不同動物種類上的感染性、致病性和抗原差異性，將HEV按血清型分為脊髓灰質類（以下簡稱脊灰）病毒（POLIOVIRUS，PV13型）、柯薩奇病毒COXSACKIEVIRUSA型CVA122和24型、柯薩奇病毒B型（CVB16型）、?？刹《綞CHOVIRUS，ECHO17、9、1127、2933型。隨著分子生物學技術與生物信息學技術的應用，根據(jù)生物學及遺傳特性，HEV被重新劃分為A、B、C、D共4個基因組，其中HEVA包括17個基因型，即CVA28、10、12、14、16、腸道病毒71型EV71、EV76、EV8992。HEV病毒的基因組為單股正鏈RNA，長約75KB，起MRNA作用，整個基因組只含有一個開放閱讀框架（OPENREADINGFRAME，F(xiàn)），編碼多聚蛋白POLYPROTEIN，最后產(chǎn)生4個結構蛋白VP1～VP4和7個非結構蛋白。結構蛋白中的VP1蛋白是最主要的衣殼蛋白，是HEV與宿主細胞上受體進行識別、結合的主要結構，許多重要的血清型特異性中和位點位于其上；它不但與病毒的抗原性有關，而且位于病毒顆粒表面，處于機體免疫壓力下易發(fā)生變異而形成不同的流行株。因此，對VP1蛋白核苷酸序列的研究，既可以確定HEV的基因型別，又可以說明病毒核酸之間的相似程度，提示它們之間同源性的大小，從而明確病毒來源及其傳播鏈。HEVA可以引起AFP、無菌性腦膜炎、HFMD、皰疹性咽峽炎HERPANGINAHA等多種疾病，其中以HFMD最為常見。而引起HFMD最常見的病原體為EV71和CVA16。山東省是HFMD的高發(fā)省份之一，自2007年至今每年都會發(fā)生HFMD的流行。本研究通過對近些年分離到的HEVA山東地方株的基因型進行分析，特別是對HFMD病例標本中分離毒株的VP1蛋白的編碼基因進行分析，從分子流行病學角度探索HEVA與HFMD的關系，為制訂HFMD及其HEV感染所致疾病的防治策略提供科學依據(jù)。目的⑴了解HEVA山東地方株的基因型分布，建立HEVA山東地方株的VP1區(qū)基因核苷酸序列數(shù)據(jù)庫；⑵分析HEVA山東地方株主要型別的遺傳進化特征；⑶探討HEVA主要型別與其所致疾病之間的聯(lián)系，分析遺傳變異對其致病性和流行規(guī)律的影響，為相關疾病的預防控制提供理論依據(jù)。方法①對源于1998～2009年AFP監(jiān)測系統(tǒng)中的病例標本和2007～2010年部分HFMD病例標本，采用細胞培養(yǎng)的方法進行病毒分離，陽性分離物利用HEV組合血清進行中和試驗，確定其血清型。②對病毒分離陽性但中和試驗無法定型的毒株，提取核酸并進行VP1基因擴增和序列測定。③將測得的基因序列進行剪裁、拼接，得到VP1區(qū)基因核苷酸序列。利用NCBI提供的BLAST服務器進行序列比對，確定HEVA山東地方株的基因型別。④將HEVA山東地方株與GENBANK中檢索到的其它國家和地區(qū)分離株，采用BIOEDITSEQUENCEALIGNMENTEDITSOFTWARE509軟件，對其VP1區(qū)核苷酸序列及其推導的氨基酸序列進行同源性比較。⑤采用MEGA31軟件，以相鄰連接方法NEIGHBJOININGMETHOD構建VP1區(qū)系統(tǒng)發(fā)生樹，對HEVA山東地方株進行親緣進化分析。結果⑴山東省目前分離到10個基因型的HEVA，分別為CVA4、CVA5、CVA6、CVA10、CVA12、CVA14、CVA16、EV71、EV76和EV90。⑵CVA4山東地方株與其原型株VP1區(qū)部分基因核苷酸和氨基酸同源性分別為838％～853％和97％～996％，相對于CVA4原型株，主要表現(xiàn)為核苷酸的變異，氨基酸序列存在4個主要變異位點；VP1區(qū)部分基因系統(tǒng)發(fā)生樹顯示，CVA4可以劃分為A～E5個基因簇CLUSTER，山東地方株分別位于CLUSTERC和E。⑶CVA6山東地方株與其原型株VP1區(qū)部分基因核苷酸和氨基酸同源性分別為813％～815％和944％～950％VP1區(qū)部分基因系統(tǒng)發(fā)生樹顯示，CVA6可以劃分為A～C3個CLUSTER，山東地方株位于CLUSTERC，并來自同一傳播鏈LINEAGE。⑷CVA10山東地方株與其原型株VP1區(qū)部分基因核苷酸和氨基酸同源性分別為756％～768％和902％～932％VP1區(qū)部分基因系統(tǒng)發(fā)生樹顯示，CVA10可以劃分為A～G共7個CLUSTER，山東地方株分別位于CLUSTERF和G。⑸CVA16山東地方株與其原型株VP1區(qū)核苷酸和氨基酸同源性分別為755％～771％和915％～922％；VP1區(qū)全基因系統(tǒng)發(fā)生樹顯示，CVA16可以劃分為A、B2個基因型，山東地方株存在B1A和B1B2個傳播鏈LINEAGE的共循環(huán)。⑹EV71山東地方株與其原型株VP1區(qū)核苷酸和氨基酸同源性分別為820％～829％和942％～952％，與C4亞型核苷酸同源性最高，為918％～937％VP1區(qū)全基因系統(tǒng)發(fā)生樹顯示，EV71可以劃分為A、B、C3個基因型；山東地方株均屬于其中的C4亞型，所有C4亞型毒株在第249位氨基酸上表現(xiàn)為與C1～C3亞型不同的氨基酸變異I→V。⑺2007年臨沂市HFMD暴發(fā)主要病原為EV71，且位于C4亞型的C4A進化分支；2008～2010年山東省HFMD流行的主要病原體為EV71和CVA16，兼有CVA4、CVA6、CVA10等其它HEVA的參與。結論①EV71和CVA16是山東省HEVA的優(yōu)勢型別，其它基因型HEVA也有分布，并在HFMD等疾病的暴發(fā)與流行中占有一定的比例。②HEVA山東地方株的遺傳進化存在一定的方向性和穩(wěn)定性。相比CVA16，EV71有較快的進化速率，目前分離到的EV71山東地方株均屬于同一進化來源C4A，CVA16山東地方株存在2個傳播鏈的共循環(huán)。③部分基因型HEVA山東地方株的遺傳進化存在著一定的地域分布特征。HEVA各基因型在長期共同進化的過程中可能發(fā)生型內(nèi)或型間重組。④EV71是中國大陸近些年發(fā)生HFMD的暴發(fā)和流行的主要病原，其結構蛋白VP1區(qū)遺傳進化較穩(wěn)定，未發(fā)現(xiàn)基因重組。自1998年以來C4A是中國大陸唯一流行的EV71的基因亞型，推測其非結構蛋白編碼區(qū)發(fā)生重組是造成其持續(xù)流行的原因之一。

簡介：THESTUDIESOFTHEBIOLOGICALPROPERTIESOFJAPANESEENCEPHALITISVACCINEMUTANTANDTHEGENOMECHARACTERIZATIONOFAPREVALENTSTRAINOFDUCKTEMBUSUVIRUSBVJINGMANWANGSUPERVISORPROF．PUYANCHENATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORTHEPHILOSOPHYDEGREEOFAGRONOMY目錄目錄摘要??????????????????????????????????????．IABSTRACT???????????????????????????????????????????????．V縮略語?????????????????????????????????????．．XI第一篇文獻綜述?????????????????????????????????1第一章日本腦炎病毒及其與宿主相互作用概述????????????????????．11日本腦炎的流行特征?????????????????????????????12日本腦炎的病原特征?????????????????????????????32．1病毒粒子的性質?????????????????．???????????32．2JEV的基因結構????????????????????????????一42．3JEV結構蛋白特征???????????????????????????．．72．4JEV非結構蛋白特征???????????????????????????92．5JEV毒力基礎?????????????????????????????133厄V的傳播特征???????????????????????????????144厄V的致病機制???????????????????????????????L55JEV疫苗的研究進展?????????????????????????????165．1鼠腦組織的滅活疫苗??????????????????????????175．2細胞培養(yǎng)的弱毒疫苗??????????????????????????175．3細胞培養(yǎng)的滅活疫苗??????????????????????????185．4基因工程嵌合弱毒活疫苗????????????????????????185．5其他疫苗???????????????????????????????186宿主針對JEV免疫防御???????????????????????????．196．1先天性免疫防御????????????????????????????196．2適應性免疫防御????????????????????????????197日本腦炎病毒對宿主的免疫逃逸???????????????????????一207．1JEV抑制干擾素通路??????????????????????????．207．2JEV抑制NK細胞的免疫監(jiān)測和細胞毒性作用???????????????．217．3JEV活化自噬進行免疫逃逸???????????????????????．21參考文獻??????????????????????????????????一23第二部分實驗研究???????????????????????????????一39第二章日本腦炎病毒E279對其蝕斑形態(tài)和致病力的作用研究．．．????????????．39

簡介：目的通過對重慶地區(qū)兒童急性病毒性腹瀉的檢測，了解其分子分型、基因重組、基因變異等特征，從而為病毒性腹瀉的預防和控制策略的制訂提供基礎數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。方法采集重慶地區(qū)2012年1月至12月384份疑似病毒性腹瀉患兒的腹瀉標本，并記錄其臨床資料。A組輪狀病毒的檢測采用膠體金法，諾如病毒、扎如病毒和星狀病毒采用分型引物進行RTPCR核酸檢測，腺病毒用PCR進行核酸檢測，陽性結果要進行序列確認和分型，并計算遺傳距離和構建進化樹另外諾如病毒還需作重組鑒定。結果384份腹瀉標本（男248例，女136例）均來自重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院門診，病毒檢測陽性患兒283例，占7370％283384，男186例，陽性率7500％186248，女97例，陽性率7132％97136，卡方檢驗結果顯示，男女罹患病毒性腹瀉風險沒有顯著性差異X20612，P＞005腹瀉病病毒陽性率依次為RV4427％170384、NV2188％84384、HADV1016％39384、ASV781％30384、SLV677％26384混合感染占1615％62384，4例感染了三種病毒，余58例均感染兩種病毒測序結果示GⅡ47738％6584、GⅠ8846％2326、ASV16333％1930、AD419487％3739分別為重慶地區(qū)NV、SLV、ASV、HADV四種病毒的優(yōu)勢流行株此次研究共檢測到5種GⅡ型的組內(nèi)重組類型，分別是GⅡEGⅡ4SYDNEY2012型27株、GⅡ7GⅡ6型1株、GⅡ22GⅡ5型1株、GⅡ12GⅡ3型12株和GⅡ16GⅡ13型3株。結論1本研究結果顯示，RV、NV、SLV、HADV、ASV是重慶地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的重要病原，占病毒性腹瀉的7370％，其中RV仍是首要病原，NV占第2位。2本地NV優(yōu)勢株為GⅡ4型病毒株，HADV優(yōu)勢株為AD41型病毒株，ASV優(yōu)勢株為ASV1型病毒株，SLV優(yōu)勢株為GⅠ1型病毒株不同病原的混合感染率為1615％，以RV與其他病毒混合感染為主。3NV感染主要由GⅡ型引起，而GⅡ4基因型又占有絕對優(yōu)勢，八月份時重慶地區(qū)首次出現(xiàn)了1例GⅡ4SYDNEY2012新變異株。4重慶地區(qū)NV重組現(xiàn)象明顯2012年8月份后，重慶地區(qū)NV優(yōu)勢株逐漸由GⅡ42006B變成GⅡEGⅡ4SYDNEY2012的重組株，并檢測到GⅡ22GⅡ5和GⅡ16GⅡ13兩種新型重組株。

簡介：SEROSURVEYOFFOURBOVINEVIRALDISEASEINSHANGHAIDAIRYHERDSANDEXPRESSION，PURIFICATIONOFRECOMBINANTBOVINEINTERFERONA，7BYZHANGXIANSUPERVISEDBYASSOCIATEPROF．ZHANGKECHUNPRO￡HUANGKEHEATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFTHEAGRONOMYVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINAPIRL2015COMMENCEMENTINMAY20152原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。一7I，一_1學位論文作者需親筆簽名張5厶加心年J月31日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權南京農(nóng)業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編學位論文。保密口，在年解密后適用本授權書。本學位論文屬于不保請在以上方框內(nèi)打“√”學位論文作者需親筆簽名§長弓厶乙OIS年玉月3LEL剔¨蒜鋤擻一知RⅢ戶

簡介：CLASSIFIEDINDEXUDCDISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREEINAGRICULTURECONSTRUCTIONOFRECOMBINANT五注C廠OB且C幾五以夕C月漢盯EXPRESSIONVP6OOFRABBITHEMORRHAGICDISEASEVIRUSANDIMMUNOGENICITYANALYSISCANDIDATEZHANGYISUPERVISPROFLI腸一INGAEADEMICDEGREEAPPLIEDFORMASTEROFAGRICULTURESPEEIALITYPREVENTIVEVETERINARYMEDICINEDATEOFORALEXAMINATIONMAY，2010UNIVERSITYNTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITY東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學碩士學位論文224重組干酪乳桿菌的構建24225重組干酪乳桿菌的誘導及表達蛋白的鑒定，26226口服重組干酪乳桿菌免疫學指標的測定，28227免疫兔攻RHDV保護性試驗293實驗結果，3031RHDV的鑒定30311敏感兔接種試驗30312HA和HL試驗，，3032病毒VP6O基因的RYPCR3033VP60基因的序列測定及生物信息學分析3034重組質粒PMD18一TVP60的鑒定結果3135重組乳酸菌表達載體的鑒定，引3，51表面表達型重組載體PPG一1一VP60的鑒定結果31352分泌表達型重組載體PPG一2一VP60的鑒定結果3536重組干酪乳桿菌的誘導及表達蛋白的鑒定35361細胞表面表達型重組干酪乳桿菌的誘導表達鑒定結果二_、35362分泌表達型重組干酪乳桿菌的誘導表達鑒定結果3737重組乳酸菌口服免疫兔免疫學指標的測定39371EUSA方法檢測免疫兔血清中抗RHDVVP60特異性抗體IGG測定39372應用血凝抑制試驗檢測免疫兔的血清效價，40373家兔糞便中抗明DVVP60特異性SLGA檢測結果，40374家兔鼻洗液中抗朋DVVP60特異性SLGA檢測結果40375免疫兔攻RHDV保護性試驗404討論，4441兔病毒性出血癥病毒09一SD株衣殼蛋白的遺傳變異分析4442口服重組干酪乳桿菌誘導的體液免疫應答，4543口服重組干酪乳桿菌誘導的免疫保護作用4644表面表達和分泌表達誘導免疫應答的差異分析475結論，49致謝50參考文獻，，51附錄，58攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文，59

簡介：手足口病是由腸道病毒引起的一種急性傳染病。近年來國內(nèi)報告的手足口病發(fā)病例數(shù)和死亡例數(shù)均大幅度上升。在導致手足口病的20多種病毒中由腸道病毒71型作為主要病原引起的手足口病發(fā)病病例數(shù)在總病例數(shù)中的比例在不斷上升。腸道病毒71型感染人體除了引起手足口病外還可導致腦膜炎、腦炎、局部麻痹和急性遲緩性麻痹等神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及皰疹性咽峽炎等非神經(jīng)系統(tǒng)疾病嚴重者能導致患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥或肺水腫等致死性的臨床后果。目前關于腸道病毒71型病毒的研究主要集中在病原學、流行病學方面其對人體的致病機理尚不是十分清楚。隨著腸道病毒71型引起的手足口病發(fā)病態(tài)勢不斷擴大而臨床上尚無公認的特效治療藥物因此研制一種安全有效的疫苗成為防治腸道病毒71型所致手足口病的最有效的預治措施。本研究采用初步研制成功的腸道病毒71型滅活疫苗利用恒河猴嬰猴這一經(jīng)典動物模型進行了該疫苗的保護性實驗。用疫苗免疫動物后攻毒疫苗免疫組恒河猴嬰猴神經(jīng)系統(tǒng)的各個部分均未檢出超過可信限的病毒HNA陽性結果而感染對照組動物各部位均檢測到明顯的病毒HNA陽性結果。滅活疫苗能夠誘導免疫后的恒河猴嬰猴產(chǎn)生中和抗體免疫后病毒攻擊后第7天恒河猴嬰猴血清中和抗體水平達1512能夠形成有效的抗病毒免疫保護效應。免疫組化結果顯示免疫動物所誘導產(chǎn)生的免疫保護效應能夠抑制病毒在體內(nèi)器官及組織中的增殖。結合攻毒后動物相應靶器官組織切片病理觀察血清中和抗體檢測和免疫組化結果分析表明腸道病毒71型滅活疫苗免疫恒河猴嬰猴后繼而以病毒攻擊將不會引起導致機體組織器官受損的病理學反應疫苗具有保護性。此外取上述研究對象中免疫后攻毒和未免疫攻毒的恒河猴嬰猴中樞神經(jīng)系統(tǒng)的丘腦組織進行了蛋白質組學研究。運用蛋白質組學相關技術蛋白質雙向電泳分離蛋白和專業(yè)軟件IMAGEMASTER70進行圖像分析定量研究在病毒感染組及疫苗保護組中表達量有所差異的蛋白質點通過基質輔助激光解析電離飛行時間質譜和蛋白信息數(shù)據(jù)庫建立差異蛋白質譜。本研究共發(fā)現(xiàn)48個表達量變化的蛋白按功能分為7類①、細胞骨架相關蛋白8個其中CFL2表達量變化結合功能分析提示該蛋白是研究EV71感染所致肌張力變化、心肌原纖維退化、心肌細胞凋亡潛在的靶點。結合各組PFN1、PFN2表達量變化與PROFILINS功能分析提示在感染過程中PFN1、PFN2與細胞膜完整性或細胞內(nèi)吞作用相關疫苗的保護性降低了感染對細胞形態(tài)完整性的影響。②、小熱休克蛋白1個CRYAB結合該蛋白在感染高峰期表達上調而與其它組不同的表現(xiàn)及其在生理或者神經(jīng)變性疾病的壓力下能夠抑制中間纖維的聚集的能力提示這種小熱休克蛋白與感染壓力下的細胞骨架穩(wěn)定性維持相關；③、生物大分子合成相關蛋白4個其中CYPA作為一種具有調控免疫相關的因子可能通過某種未知的信號傳導途徑激活T細胞活化所需的細胞因子而促進T細胞的增殖從而顯示感染高峰CYPA表達量與其它組的差異。NUTF2作為一種入核轉運因子其表達量變化提示其是感染狀態(tài)下宿主實現(xiàn)關閉或下調相關因子以抵抗病毒感染的可能途徑之一。④、代謝相關蛋白13個這些蛋白含量變化提示感染狀態(tài)下的神經(jīng)細胞增殖周期的改變、神經(jīng)元發(fā)育的阻滯、突觸后神經(jīng)元的保護性抑制狀態(tài)改變等與EV71感染致病機理密切相關對疫苗組這些蛋白表達量的分析進一步映證了疫苗的保護效應。⑤、能量代謝與生物氧化相關蛋白11個提示病理狀態(tài)下和疫苗保護效應下機體能量代謝系統(tǒng)和生物氧化途徑發(fā)生了改變。⑥、泛素蛋白酶體途徑相關蛋白2個UCHL1和UBE2N在病毒感染組和疫苗保護組中的表達量差異及功能分析也支持了滅活疫苗所誘導的免疫保護的有效性。⑦、信號傳導相關蛋白9個PARK7表達變化提示中樞神經(jīng)系統(tǒng)對感染的具有保護性且可能通過PARK7實現(xiàn)。蛋白質組學實驗中共結合差異譜中表達量發(fā)生改變的蛋白的功能與免疫后攻毒和未免疫攻毒恒河猴嬰猴丘腦蛋白表達量變化分析進一步驗證了滅活疫苗具有保護效應發(fā)現(xiàn)了一些在感染中有重要意義的分子靶標并為探討腸道病毒71型感染在疫苗免疫和非疫苗免疫機體中的宿主反應的分子生物學特征以及從這一水平上認識腸道病毒71型感染的致病機理和疫苗的免疫保護機理而提供資料。由于本研究對象為獼猴屬的恒河猴現(xiàn)有蛋白質數(shù)據(jù)庫中關于獼猴屬蛋白的數(shù)據(jù)還不全面結合直系同源序列聚類分析COG以及蛋白數(shù)據(jù)庫中現(xiàn)有靈長目其它物種的蛋白信息初步證實了13個尚未在氨基酸或蛋白水平報道的靈長目某已知蛋白在恒河猴中的同源蛋白。

簡介：研究背景丙型肝炎是一種主要通過血液或體液的接觸而傳播的傳染性疾病。丙型肝炎病毒HCV的感染非常容易慢性化并且呈隱匿性發(fā)展容易發(fā)展為肝硬化甚至發(fā)展成為肝細胞肝癌HCC對患者的健康危害非常之大丙肝現(xiàn)在已成為世界性的公共衛(wèi)生問題。丙肝病人分布于全球各地目前是歐美以及日本等國家和地區(qū)晚期肝病最主要的原因之一。世界衛(wèi)生組織WHO的統(tǒng)計結果顯示感染丙肝病毒HCV的人數(shù)約占全球總人數(shù)的3％曾感染過HCV約有18億人每年約310萬病人被新查出來患有丙型肝炎。丙型肝炎慢性化率可高達50～80。丙肝是一種隱匿性疾病如患者不進行體檢不容易被發(fā)現(xiàn)。使用干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療能夠消滅或最大限度地持續(xù)抑制體內(nèi)的HCVRNA降低病毒對肝細胞的損害防止病人發(fā)展為肝硬化并最大限度地提高患者的生存質量延長患者生命。利巴韋林最為重要的副作用為溶血性貧血和導致胎兒畸形因此禁用于孕婦和腎功能減退的患者。在慢性丙型肝炎的治療中利巴韋林引起的溶血性貧血的副作用始終困擾臨床醫(yī)生。此外利巴韋林尚可以引起嚴重的消化道癥狀因此在臨床治療過程中很多患者不能堅持服用利巴韋林這樣將會大大影響抗病毒的療效。利巴韋林的主要的副作用是由于紅細胞內(nèi)缺乏脫磷酸化的酶因此利巴韋林磷酸鹽在紅細胞無法被清除導致其大量堆積抑制部分依賴ATP的物質利用影響細胞的氧化呼吸導致紅細胞壽命縮短通過血管外溶血造成可逆性的溶血性貧血所以當患者停藥后患者血紅蛋白可以很快恢復正常。目前對于利巴韋林加大劑量治療快速病毒學應答不佳的慢丙肝患者報道較少為明確大劑量利巴韋林聯(lián)合干擾素對快速病毒學應答不佳患者療效的影響經(jīng)行了此項研究。研究目的研究干擾素聯(lián)合大劑量利巴韋林對1B型慢性丙型肝炎簡稱慢丙肝快速病毒學應答不佳患者抗病毒治療不同時期病毒學應答率的影響用來參考并調整治療過程中利巴韋林的用量以期獲得較高的持續(xù)病毒學應答率SVR。研究方法1采用歷史隊列研究方法回顧20092011年鄭州大學第一附屬醫(yī)院收治的123名快速病毒學應答不佳的患者干擾素聯(lián)合利巴韋林治療4周后HCVRNA下降小于2個LOG為研究對象。根據(jù)既往治療情況將進入研究的患者分為A、B、C3組A組給予普通干擾素安福隆500萬U聯(lián)合大劑量利巴韋林北京雙鷺1500MG天B組給予普通干擾素安福隆500萬U聯(lián)合利巴韋林北京雙鷺1200MG天C組對照組給予普通干擾素安福隆500萬U聯(lián)合利巴韋林北京雙鷺900MG天。研究截止時間為患者接受干擾素聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療72周并停藥隨訪24周。比較不同利巴韋林使用劑量組抗丙肝病毒各階段應答率的差異。如在治療期間若患者血紅蛋白降至70GL則給以促紅細胞生成素EPO、葉酸片、維生素B12等如患者血紅蛋白量繼續(xù)下降至低于60GL則予輸注紅細胞并減少利巴韋林用量直至暫停使用利巴韋林待患者貧血恢復后繼續(xù)加用初始劑量。2觀察患者EVR早期病毒學應答、ETVR治療結束時病毒學應答、SVR持續(xù)病毒學應答結果1A組中5人出現(xiàn)紅細胞、血紅蛋白下降達60GL給以輸注紅細胞、并給以利巴韋林暫時停藥恢復后繼續(xù)給予利巴韋林1500MG并同時給予復方阿膠提升患者紅細胞及血紅蛋白仍有3名患者不能堅持給予利巴韋林減量退出實驗觀察組其他2名患者繼續(xù)原方案治療。B組中有一例使用干擾素后出現(xiàn)血小板降低至20109L減量后仍不能繼續(xù)使用干擾素后經(jīng)調整改用干擾素Α1B賽諾金200萬UQOD治療遂退出觀察組另外有一人使用利巴韋林后出現(xiàn)不能進食頑固性嘔吐改為單用干擾素抗病毒治療也退出觀察組。C組中有一例男性患者達到ETVR后行CT發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌并行肝癌切除術。2A組中有21例患者達到EVREVR率為512例達到ETVRETVR率為684例患者達到SVRSVR率為631。B組中有14例患者達到EVREVR率為311例達到ETVRETVR率為62例患者達到SVRSVR率為50。C組中有9例患者達到EVREVR率為219例達到ETVRETVR率為415例患者達到SVRSVR率為439。比較A、B、C3組間EVRX27741P0021ETVRX26558P0038、及SVRX27346P0025均小于005差異具有統(tǒng)計學意義。其中A組與C組比較EVRX27569P0006ETVRX25778P0016SVRX26649P0013P均小于005差異具有統(tǒng)計學意義。3在A組21名獲得EVR的患者中有20名都獲得了ETVR其ETVR率為952名都獲得了SVRSVR率也同樣為952；對于B組的14名獲得EVR患者中12名患者獲得ETVRETVR率為857名患者獲得SVRSVR率為786；C組對于獲得EVR的9名患者中有5名患者獲得ETVRETVR率為5564名患者獲得SVRSVR率為444。比較A、B、C3組間ETVRX27456P0024、SVRX210002P0007P均小于005差異具有統(tǒng)計學意義。其中A組與C組比較ETVRX27143P0019SVRX210159P0005P均小于005差異具有統(tǒng)計學意義。4在A組17名未獲得EVR患者中6名獲得了ETVRETVR率為3534名獲得了SVRSVR率為235；對于B組的26名未獲得EVR患者中13名患者獲得ETVRETVR率為509名患者獲得SVRSVR率為346；C組中對于未獲得EVR的32名患者中有12名患者獲得ETVRETVR率為375名患者獲得SVRSVR率為312。比較A、B、C3組間ETVRX21225P0534、SVRX20603P0740P值大于005差異無統(tǒng)計學意義。結論1增加利巴韋林劑量可以提高快速病毒學應答不佳的1B型慢性丙型肝炎患者的EVR率及SVR率；2對于增加利巴韋林劑量后仍未獲得EVR的患者繼續(xù)使用大劑量的利巴韋林并不能增加患者ETVR及SVR率；3增加利巴韋林的劑量后如果能獲得EVR則繼續(xù)使用大劑量利巴韋林可以提高患者的ETVR率以及SVR率。

簡介：ZHEJIANGSCITECHUNIVERSITYMASTERDISSERTATIONSTUDYONDOUBLESTRANDEDRNAVIRUSESINFECTINGRADISHTISSUECULTURE，CELLANDMOLECULARBIOLOGYOFVIRALINFECTEDSEEDLINGSQIANZHUOMAODIRECTEDBYDRCHENJISHUANG，PROFESSORDRHONGJIAN，PROFESSORHANGZHOU，CHINA課題來源國家自然基金項目116152A4A09631資助

簡介：【目的】觀察腺病毒介導TGFΒ1基因轉染對自體HAMSTRING腱重建兔ACL術后腱骨愈合組織形態(tài)學的影響。【方法】術前構建攜帶TGFΒ1基因的重組腺病毒載體ADTGFΒ1，取新西蘭兔48只，體重20±04KG，平均18月齡，隨機分為A、B、C三組，每組16只動物，以兔后肢右膝關節(jié)作為研究對象，自身HAMSTRING腱作為ACL替代物。A組采用ADTGFΒ1轉染的自體同側HAMSTRING腱重建ACL，即ADTGFΒ1轉染組實驗組；B組采用腺病毒空載體ADGFP轉染的自體同側HAMSTRING腱重建ACL，即ADGFP轉染組空載體對照組；C組采用未經(jīng)處理的自體同側HAMSTRING腱重建ACL，即DMEM處理組空白對照組。每組均在2、4、8、12周四個時間點處死4只實驗動物，初步進行形態(tài)學大體觀察。之后均以石蠟制作成切片行HE、MASSON染色進行觀察，并在界面區(qū)行成纖維細胞計數(shù)及對腱骨愈合情況做半定量BUARK評分。【結果】1形態(tài)學大體形態(tài)三組新西蘭兔分別在術后2周、4周、8周、12周各處死4只并取膝關節(jié)觀察，膝關節(jié)周圍無發(fā)熱、紅腫，切口無感染、無裂開跡象，打開關節(jié)腔見滑膜明顯增生，半月板完好，未見明顯磨損及破裂，移植肌腱張力良好，固定牢固，2周時移植腱與股骨、脛骨隧道間仍可見間隙，4周時可見部分瘢痕組織填充于骨隧道內(nèi)口，8周時骨隧道內(nèi)口可見大量瘢痕組織填充，外口見部分骨樣組織生長，12周時骨樣組織生長較8周明顯增多，移植肌腱與骨隧道壁緊密粘連。2HE、MASSON染色①A組術后2周腱骨愈合界面區(qū)見少量成纖維細胞增生及無序排列的膠原纖維；術后4周界面區(qū)可見軟骨組織形成，部分成纖維細胞和類軟骨細胞參與其中，界面部分粘連；術后8周界面區(qū)組織連接較前緊密已有軟骨移行帶出現(xiàn)，類軟骨細胞排列規(guī)整，SHARPEY纖維初步形成；術后12周界面區(qū)見到規(guī)整的SHARPEY纖維，有致密結締組織及鈣化軟骨形成，部分區(qū)域組織有直接愈合傾向。②B、C組術后2周移植肌腱與骨隧道間可見少量成纖維細胞增生，界面區(qū)間隙明顯；術后4周界面區(qū)可見炎性細胞和成纖維細胞結合較疏松，且有明顯的孔隙，無腱骨連接；術后8周腱骨界面區(qū)結合較疏松，但好于4周時未見明顯SHARPEY纖維生成；術后12周界面區(qū)少量SHARPEY纖維排列紊亂，見鈣化軟骨形成，腱骨組織之間連接相對緊密，組織未見直接愈合傾向。3成纖維細胞計算分別于2、4、8、12周四個時間點對三組HE染色切片采用IPP（IMAGE－PROPLUS）顯微鏡圖像分析軟件進行成纖維細胞計數(shù)，并行單向方差分析及SNK法檢驗，結果表明A組分別與B組、C組在各個時間點比較，A組成纖維細胞數(shù)量均高于B、C組，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜005），而B組與C組在各時間點比較，差異均無統(tǒng)計學意義。4組織形態(tài)學BUARK半定量分級分別于2、4、8、12周四個時間點對三組HE染色切片觀察，依據(jù)腱骨愈合界面中纖維血管組織量行腱骨愈合BUARK半定量分級，通過KRUSKALWALLISH檢驗進行統(tǒng)計學分析，結果表明12周內(nèi)A組結果均優(yōu)于B、C組，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜001）?！窘Y論】腺病毒介導TGFΒ1基因轉染對自體HAMSTRING腱重建兔ACL術后腱骨愈合有促進作用。

簡介：目的采用同位素標記相對和絕對定量ISOBARICTAGSFRELATIVEABSOLUTEQUANTITATION，ITRAQ聯(lián)合液相色譜串聯(lián)質譜1IQUIDCHROMATOGRAPHYTEMMASSSPECTROMETER，LCMSMS技術對慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證、脾胃濕熱證患者與健康志愿者的血清樣本進行蛋白相對定量檢測以分析、鑒定兩證型之間的差異性表達蛋白并對其進行生物學分析，以便從分子生物學層面探討兩證的內(nèi)在聯(lián)系與區(qū)別、發(fā)現(xiàn)兩證之間可能的生物標志物，為中醫(yī)證候本質的現(xiàn)代化研究提供依據(jù)。方法選取四川大學華西醫(yī)院門診及住院部符合西醫(yī)、中醫(yī)診斷標準及排除標準的慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證和脾胃濕熱證患者及來自成都市的健康志愿者作為研究對象。抽取患者及健康志愿者的血液，對血液進行離心并制備血清后對樣品進行同位素標記相對和絕對定量ISOBARICTAGSFRELATIVEABSOLUTEQUANTITATION，ITRAQ聯(lián)合液相色譜串聯(lián)質譜1IQUIDCHROMATOGRAPHYTEMMASSSPECTROMETER，LCMSMS檢測，篩選證候間差異表達蛋白并對其進行生物學分析。結果（1）肝郁脾虛組和脾胃濕熱組差異表達蛋白共61個，其中上調表達的16個，下調表達的45個。（2）肝郁脾虛組和脾胃濕熱組間差異性蛋白的GO顯著性分析共得到生物進程條目35個，細胞成分條目16個，分子功能條目26個。（3）證候間差異蛋白PATHWAY顯著性富集分析顯示兩證之間差異蛋白涉及脂肪酸代謝、視黃醇代謝、精脯氨酸代謝、丙谷天冬氨酸代謝、氧化磷酸化代謝與肝酶P450相關的毒物和共棲代謝通路。（4）經(jīng)過STRING分析YWHAH、RHOC、RHOA、ATP5A1、ATP5B、CDH1蛋白處于差異蛋白功能網(wǎng)絡交叉點。結論1、發(fā)現(xiàn)了肝郁脾虛與脾胃濕熱證候間差異表達蛋白譜。2、處于差異蛋白蛋白功能網(wǎng)圖中交點位置的YWHAH、RHOA、RHOC、ATP5A1、ATP5B、CDH1蛋白可能是證候間差異的生物學基礎。

簡介：分類號密級華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文豬新型細小病毒PHOV和PBOV診斷方法的建立、分子流行病學調查及基因組序列分析STUDYONESTABLISHINGOFDIAGNOSTICMETHODS，MOLECULAREPIDEMIOLOGYINVESTIGATIONANDGENOMESEQUENCINGOFNOVELPORCINEPARVOVIRUSOFPHOVANDPBOV研究生曾松林指導教師肖少波教授指導小組肖少波教授方六榮教授江云波副教授專業(yè)預防獸醫(yī)學研究方向動物病毒學獲得學位名稱農(nóng)學碩士獲得學位時間2011年6月華中農(nóng)業(yè)大學動物科學動物醫(yī)學院二。一一年六月專Y2004265JLLLJIRLIIIITLLLLLLLIFLLLLLLJLLLLLLLLLJILLLLUJ～華中農(nóng)業(yè)大學學位論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權書●，學位論文昂如需保密，解密時間年月日是否保密他，獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，指導教師對此進行了審定與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意叛塌嘭’吵帆岫1年名月8日秈二讎糾男裼怖雌名御≯簽名日期力們1年名月8日簽名日期沖LL／年幺月G日