簡介：內(nèi)蒙’I人學(xué)頌上學(xué)位淪文學(xué)校代碼分類號UDC10126學(xué)號墨呈Q璺Q曼密級編號論文題目研究生塑整圖指導(dǎo)教師王圭銦塾拯專業(yè)生物工程研究方向丞筮些生物工程所在學(xué)院生金抖堂堂院2015年4月27日內(nèi)蒙；OI人學(xué)碩上學(xué)僦論文奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)與鑒定摘要為了體外分離培養(yǎng)純度較高的原代奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，本研究用組織塊貼肇法和乳汁分離法分離培養(yǎng)了原代奶牛乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，并用胰酶梯度消化法純化了上述細(xì)胞，接著對原代乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的特異性分子角蛋白8、角蛋白18和D一酪蛋白進(jìn)行RTPCR鑒定、角蛋白7、角蛋白18和P一酪蛋白進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光染色鑒定，還對它們進(jìn)行細(xì)胞染色體組型分析、GIEMSA染色觀察、營養(yǎng)要求分析和生長曲線測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，組織塊貼壁法得到了純度分別為963％和997％乳腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，乳汁分離法得到了純度為989％的乳腺上皮細(xì)胞。進(jìn)一步的鑒定表明，組織塊貼壁法和乳汁分離法得到的乳腺上皮細(xì)胞均轉(zhuǎn)錄角蛋白8基因、角蛋白18基因和B一酪蛋白基因MRNA；表達(dá)角蛋白7、角蛋白18和D一酪蛋白；細(xì)胞染色體核型典型2N60，具有正常的分裂增殖特征組織塊貼壁法得到的乳腺上皮細(xì)胞原代細(xì)胞活力高于8LFT分離法細(xì)胞培養(yǎng)需要在DMEM／F12培養(yǎng)液中添加20％FBS、200U雙抗青霉素和鏈霉素、氫化考的松1LAG／M1、孕酮199／M1、轉(zhuǎn)鐵蛋白599／M1、胰島素5IXG／M1、200MMOLL一谷氨酰胺和10NG／MLEGF。組織塊分離培養(yǎng)得到的奶牛乳腺成纖維細(xì)胞可以表達(dá)波形蛋白，不表達(dá)13酪蛋白，細(xì)胞染色體核型正常2N60，形態(tài)典型；細(xì)胞可以在基本培養(yǎng)基DMEM／F12含10％的FBS上生長旺盛以及具有正常的分裂增殖特征，生長活力明顯高于奶牛乳腺上皮細(xì)胞。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過組織塊貼壁法和乳汁分離法，成功分離到了形態(tài)特征典型、純度較高、分裂增殖能力正常的奶牛乳腺成纖維細(xì)胞和能分泌B一酪蛋白的奶牛乳腺上皮細(xì)胞，為后續(xù)建立泌乳、感染等相關(guān)研究的細(xì)胞模型提供了不可或缺的基礎(chǔ)材料。關(guān)鍵詞奶牛乳腺上皮細(xì)胞，原代培養(yǎng)，成纖維細(xì)胞，鑒定II

簡介：分類號8141UDC5913碩士學(xué)位論文密級公玨GABRP對水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響郝文艷學(xué)科專業(yè)麴塑塑籩直狴皇鏊殖指導(dǎo)教師奎塑注嬰壅旦睦凰蕉嬰塞旦論文答辯日期2Q蘭魚生墨旦2魚目學(xué)位授予日期至Q魚生魚月曼Q目答辯委員會(huì)主席莊立逸煎援論文評閱人直透GABRP對水牛乳腺上皮細(xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響摘要丫氨基丁酸是大腦中抑制性遞質(zhì)的一種重要成分，在神經(jīng)信號傳遞中起著重要作用。除腦組織外，Y氨基丁酸及其受體還存在于多種外周組織中。1，氨基丁酸的受體有A、B、C三種類型，其中A、C屬于門控CL’通道，B型受體是代謝型受體，屬于G蛋白偶聯(lián)家族。71；亞基GABRP是發(fā)現(xiàn)的一種新型的A型受體亞基。目前對GABRP在癌組織中研究較多，發(fā)現(xiàn)它能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移，但有關(guān)其在外周內(nèi)分泌組織中的作用研究較少。在乳腺組織中，GABRP主要與乳腺癌細(xì)胞的遷移有關(guān)，幾乎沒有與乳腺上皮細(xì)胞增殖分化方面的研究。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，GABRP基因是STAT5A下游的一個(gè)靶基因，GABRP基因的表達(dá)在小鼠妊娠后期顯著升高，推測冗亞基在乳腺發(fā)育以及泌乳方面發(fā)揮著重要的作用。本課題通過研究GABRP基因?qū)λＨ橄偕掀ぜ?xì)胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達(dá)的影響，在細(xì)胞水平上初步了解71；亞基的功能，研究結(jié)果為進(jìn)一步了解水牛乳腺細(xì)胞的生長規(guī)律及泌乳機(jī)制奠定基礎(chǔ)。1水牛GABRP基因的克隆及其在乳腺組織中的表達(dá)分析。以GENBANK數(shù)據(jù)庫中牛的GABRPNM0010156181為參考序列設(shè)計(jì)合成特異性擴(kuò)增引物，以水牛乳腺組織總RNA為模板，應(yīng)用RTPCR技術(shù)擴(kuò)增水牛GABRP基因的CDNA序列，結(jié)果顯示，獲得的片段與河流型水T

簡介：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文葛根素對乳腺發(fā)育影響的研究姓名巴雅爾申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師巴音吉日嘎拉20070501

簡介：HISTOPATHOLOGICALCHANGESANDMOLE．CULARBIOLOGICALDIAGNOSIS0FCANINEMAMMARYGLANDTUMORSCASESBYYANGQIANSUPERVISEDBYASSOCIATEPROF．ZHOUZHENLEIA咖SISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEPROFESSIONALMASTER’SDEGREEOFTHEVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINAPRIL，2014COMMENCEMENTINJUNE，2014目錄目錄英文縮略詞????????????????????????????I摘要?????????????????????????????．皿ABSTRACT?????????????????????????????????????????????．V前言?????????????????????????????．VII上篇文獻(xiàn)綜述???????????????????????????．1第一章犬乳腺腫瘤的研究進(jìn)展???????????????????11正常乳腺形態(tài)???????????????????????．12發(fā)病率????????????????????????????????．．23病因??????????????????????????????23．1年齡?????????????????????????????????????????。23．2品種和基因易感性??????????????????????????23．3激素和生長因子???????????????????????????33．4飲1彗??????????????????????????????????????????．．34弓}級????????????????????????????????????????????。35預(yù)防???????????????????????????46診斷????????????????????????????????????????????．．46．1臨床癥狀及診斷???????????????????????????46．2分子生物學(xué)診斷???????????????????????????57D、結(jié)?．???????????????????????????????????????????．6參考文獻(xiàn)???????????????????????????．7第二章TENASCINC、C．MYC、C．FOS在腫瘤診斷中的應(yīng)用????????12LTENASCINC????????????????????????????????????????．132原癌基因CMYC、CJAN、CLOS?????????????????143小結(jié)????????????????????????????????????16參考文獻(xiàn)???????????????????????????17下篇試驗(yàn)研究??????????????????????????????2L第三章犬乳腺腫瘤發(fā)病情況分析??????????????????2L1材料與方法?????????????????????????2L1．1臨床病例?????????????????????????????。211．2方法??????????????????????????????????．．．???????21

簡介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文LACZ基因在奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)姓名田雷申請學(xué)位級別碩士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師李慶章20070620EXPRESSIONOFLACZGENEINGOATMAMMARYEPITHELIALCELLSABS仃ACTMILKANDWHEYWHICHCONTAINEDFARGEAMOUNTSOFIACTOSEBUTTHEREWAS70。／90％OFTHEASIANANDAFRICANINTHEWORLDWHOHADLACTOSEINTOLERANCELACTOSEINTOLERANCELARGELYLIMITEDTHEINTAKEOFMILKANDDAIRYPRODUCTS，ANDITMAYBRINGABOUTASERIESOFADVERSEEFFECTSLACTOSEINTOLERANCECANBERELIEVEDBYPRODUETINGLOWLACTOSEMILKWHICHPRODUCTEDBY13一GALANTOSIDASEHYDROLYSISOFLAETOSEANDALSOTHISREACTIONWOULDIMPROVETHENUTRITIONAIVALUEOFMILKANDDAIRYPRODUCTS，ATTHESAMETIMEITGOTRJDOFTHEINCONVENIENCEOFLAETOSECRYSTALLIZATIONANDSEPARATIONWHENWHEYCONDENSEDINTHEDAIRYPROCESSINGINADDITION，THEHYDROLYSATESPRODUCTIONOFTHISREACTIONCOULDBEUSEDINTHEPRODUCTINGOFWHEYDRINKS，SYRUP，F(xiàn)BODADDITIVESTHISSILLDYWANDESIGNEDTOCONSTROCTETHEEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORBYGENERECOMBINATIONTECHNOLOGYANDEXPRESS3GALAETOSIDASEGENEINTHEGOATMAMMARYEPITHELIALCELLS，THENEXPLOREDTHEEXPRESSIONOFDIFFERENTSTAGESITAIMEDALTHEEXPRESSIONOFGALAETOSIDASEGENEATAHIGHLEVELINTHEMAMMARYANDSOFCOWSFURTHERANDPROVIDINGAVIABLETECHNICALMEANSANDCREDIBLETHEORIESONPRODUCTIONOFTRANSGANICANIMALSANDTRANSGENIEMILKIMPROVEMENTOFMILKQUALITYFORTHEFUTUREINADDITIONTHEEUKARYOFICEXPRESSIONVECTORCONSTRUCTEDINTHISSTUDYCONTAINEDTHEWHOLELACZGENESEQUENCE，ANDITSUPSTREAMREGULATORYSEQUENCEENDEDWITHRESTRICTIONENDONUCLEASESITES，WHICHPROVIDEDACONVENIENTRELIABLEMODELFURTHESTUDYANDRESEARCHONDIFFERENTEUKARYOTICGENEREGULATIONSEQUENCES，INTHISSTUDYTOTAIDNAWASEXTRACTEDFROMTHEMAMMARYTISSUEOFHOLSTEINCOWSANDTHE5’FLANKINGREGULATORYREGIONSOFL195BPOFBOVINEASLCASEINGENEWEREAMPLIFIEDBYPCRFROMOOWMAMMARYDNAANDSEQUENCEDTHEHOMOLOGYRATEIS9975％WHICHCOMPAREDTHESEQUENCESWITHTHECORRESPONDINGSEQUENCESPUBLISHEDINGENBANKBYCOMPUTERSOFTWAREDNAMAN60ITSUCCESSFULLYCONSTRUCTEDTHEEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORGOSIPPSVWHICHGAINEDBYINSERTINGTHE5’FLANKINGSEQUENCEOFBOVINEASICASEINGENEINTOTHEUPSTREAMOFLACZGENEBYTHERECOMBINANTDNATECHNOLOGYTHEN，THEGOATMAMMARYEPITHELIALCELLCOULDBEISOLATEDBYCOLLAGENASEDIGESTIONANDCULTUREDFURTHERITIDENTIFIEDFORSEPARMIONOFCULTUREDGOATMAMMARYEPITHELIALCELLSUSEDIMMUNOHISTOCHEMICALSTAININGMETHODTODETERMINATETHEEXPRESSIONOFKERATIN18OFMAMMARYEPITHELIALCELLAFTERWARDSITWASUSEDCATIONICLIPOSOMEVECTORSTOTRANSFERTHEGOSLPPSVINTOGOATMAMMARYEPITHELIALCELLS，THUSTHEEXPRESSIONOF13一GALACTOSIDASECOULDBEDETECTBYTWOMETHODSONEISSITUSTAININGINTHECELLS，INWHICHTHE13GALAETOSIDNSECOULDCATALYZETHE

簡介：CLASSIFIEDINDEXCODE10224NO110094DISSERTATIONFORTHEDOCTORALDEGREEFUNCTIONOFSREBPLINTHEMILKFATSYNTHESISOFDAIRYCOWMAMMARYGLANDEPITHELIALCELLSCANDIDATELINANSUPERVISORPROFGAOXLJEJUNDEGREECATEGORYDOCTOROFNATURESCIENCECOLLEGECOLLEGEOFLIFESCIENCEFIRSTLEVELDISCIPLINEBIOLOGYSECONDLEVELDISCIPLINEBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYHARBINCHINADECEMBER2014東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)博士學(xué)位論文327乳腺上皮細(xì)胞甘油三酯含量測定一3333奶牛乳腺上皮細(xì)胞SREBPL過表達(dá)分析34331SREBPL基因PCR擴(kuò)增結(jié)果34332重組質(zhì)粒PMDL8TSREBPL的構(gòu)建及PCR驗(yàn)證35333重組質(zhì)粒PGCMV／IRES／EGFP／SREBPL的構(gòu)建及PCR驗(yàn)證36334質(zhì)粒PGCMV／IRES／EGFP／SREBPL轉(zhuǎn)染至奶牛乳腺上皮細(xì)胞37335SREBPI過表達(dá)對乳脂合成相關(guān)基因的影響37336SREBPL過表達(dá)對乳腺上皮細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響38337IF法檢測SREBPL與PMTOR表達(dá)與定位。39338乳腺上皮細(xì)胞脂滴含量測定4L339乳腺上皮細(xì)胞甘油三酯含量測定4234硬脂酸及血清對奶牛乳腺上皮細(xì)胞SREBPI與MTOR合成影響43341硬脂酸及血清對乳脂合成相關(guān)基因的影響一43342硬脂酸及血清對乳腺上皮細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響44343IF法檢測SREBPI與PMTOR表達(dá)與定位45344乳腺上皮細(xì)胞脂滴含量測定47345乳腺上皮細(xì)胞甘油三酯含量測定49ZL‘LST論；41奶牛乳腺上皮細(xì)胞模型的建立5042SREBPL的不同修飾及加工形式與功能的關(guān)系5043SREBPL基因沉寂對奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳脂合成影響5144SREBPI基因過表達(dá)對奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳脂合成影響5245奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳脂合成模型的建立525結(jié)論54致謝51I參考文獻(xiàn)56附錄62攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文。64Ⅱ

簡介：爿DISSERTATIONSUBMITTEDTOSICHUANAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTFORMASTERDEGREEOFSCIENCEEXPRESSIONOFTLR、NODANDRELATEDGENEOFTHESIGNALINGWAYINBOVINEMAMMARYFIBROBLASTSLIAOCHUNYINGSUPERVISEDBYASSOCIATEPROFESSORSUIZHONGCAOYA’AN，SICHUAN，CHINAJUNE2014摘要TOLL樣受體TOLLLIKERECEPTOR，TLR和核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域蛋白NUCLEOTIDEBINDINGOLIGOMERIZATIONDOMAINPROTEIN，NOD是存在于細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)的模式識別受體，能夠識別病原微生物進(jìn)而啟動(dòng)信號通路，使細(xì)胞釋放炎癥因子，參與先天性免疫反應(yīng)。成纖維細(xì)胞通常是一種不活躍的細(xì)胞，在乳腺中主要起到支持乳腺組織結(jié)構(gòu)和修復(fù)損傷的作用。但是近年來研究發(fā)現(xiàn)，炎癥時(shí)成纖維細(xì)胞受到某些刺激變得活躍，活化的成纖維細(xì)胞持續(xù)釋放炎癥因子，使炎癥由急性轉(zhuǎn)為慢性。研究成纖維細(xì)胞免疫的分子作用機(jī)制對乳腺炎的防控可能具有重要意義。本研究檢測奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLR和NOD的表達(dá)情況，并對細(xì)胞中TLR和NOD信號通路進(jìn)行研究，從而初步揭示乳腺成纖維細(xì)胞的在先天性免疫方面的作用，為深入研究奶牛乳腺成纖維細(xì)胞免疫學(xué)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)培養(yǎng)原代奶牛乳腺成纖維細(xì)胞采用組織塊法。根據(jù)成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞對胰酶敏感度不同，差時(shí)消化法連續(xù)純化成纖維細(xì)胞。每天定時(shí)觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長情況，用純化的成纖維細(xì)胞測生長曲線。吉姆薩染色鑒定細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果顯示3～5D開始有成纖維細(xì)胞從組織塊周圍向外游出，7D左右可見上皮細(xì)胞爬出組織塊。2種細(xì)胞不混雜生長，存在著明顯的界限。采用差時(shí)消化法對細(xì)胞進(jìn)行35次純化，可得到較為純凈的奶牛乳腺成纖維細(xì)胞。吉姆薩染色觀測細(xì)胞形態(tài)呈長梭形，邊緣光滑，排列疏松，區(qū)別于上皮細(xì)胞，可確定為奶牛乳腺成纖維細(xì)胞。結(jié)果表明從乳腺組織中成功分離出奶牛乳腺成纖維細(xì)胞。2奶牛乳腺成纖維細(xì)胞TLR訓(xùn)烈A的表達(dá)及半定量分析RTPCR檢測脾臟組織中TLRL一TLRL0MRNA表達(dá)情況，應(yīng)用半定量RTPCR技術(shù)分析TLRL～TLRL0基因MRNA在奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中的表達(dá)水平。結(jié)果顯示TLRL～TLRL0在奶牛脾臟和乳腺成纖維細(xì)胞中均表達(dá)，其中TLRL、TLR3、TLR4和TLR5相對高表達(dá)，而TLR2、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9和TLRL0相對低表達(dá)氏O05。結(jié)果表明奶牛乳腺成纖維細(xì)胞中TLRL～TLRL0均有不同程度表達(dá)。3奶牛乳腺成纖維細(xì)胞NODMRNA的表達(dá)及半定量分析

簡介：農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定YANBIANDAIRYGOATMAMMARYWPITHELIALCELLISOLATION,CULTUREANDIDENTIFICATION梁婉薪養(yǎng)殖延邊大學(xué)學(xué)校代碼10184分類號分類號密級UDC學(xué)號2012050229延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文延邊奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定研究生姓名梁婉薪培養(yǎng)單位延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱李鐘淑教授學(xué)科專業(yè)養(yǎng)殖研究方向動(dòng)物遺傳與生物技術(shù)論文提交日期2014年5月19日

簡介：分類號密級S814單位代碼10364學(xué)號Z2Q魚墾2窟微雉業(yè)大爹學(xué)位論文黃芪多糖對LPS誘導(dǎo)奶牛乳腺上皮細(xì)胞凋亡的體外保護(hù)作用研究THEPROTECTIVEEFFECTSOFASTRAGALUSPOLYSACCHARIDESONBOVINEMAMMARYEPITHELIALCELLSAPOPTOSISINDUCEDBYLPSINVITRO答辯委員會(huì)主席二零一四年五月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名盔蘢簽字日期如，妒年占月／日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文件，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。用本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名盤玄簽字EL期如，埤6月EL學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向工作單位通信地址保密的學(xué)位論文在解密后適指導(dǎo)教師簽名簽字日期力，∞年‘月日電話郵編

簡介：分類號分類號碩士學(xué)位論文題目目髓樣化因子髓樣化因子88MYD88功能區(qū)變異顯著影功能區(qū)變異顯著影響中國中國荷斯坦奶牛臨床型乳腺炎易感性荷斯坦奶牛臨床型乳腺炎易感性TITLEMUTATIONSINMYELOIDDIFFERENTIATIONFACT88MYD88GENECHANGETHESUSCEPTIBILITYTOCLINICALMASTITISINCHINESEHOLSTEIN學(xué)科、專業(yè)業(yè)細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究方向向動(dòng)物分動(dòng)物分子遺傳學(xué)子遺傳學(xué)作者姓名名王兆導(dǎo)師及職導(dǎo)師及職稱稱蔡亞非蔡亞非教授教授論文提交日期論文提交日期2014年5月授予學(xué)位日期授予學(xué)位日期安徽師范大學(xué)學(xué)位評定委員會(huì)辦公室本論文經(jīng)答辯委員會(huì)全體委員審查，確認(rèn)符合安徽師范大學(xué)碩士學(xué)位論文質(zhì)量要求。答辯委員會(huì)簽名主席工作單位、職稱委員導(dǎo)師

簡介：本文采用乳腺炎患牛乳樣中分離的金黃色葡萄球菌建立小鼠乳腺炎模型；并探索中藥單體鹽酸小檗堿對小鼠乳腺局部及相關(guān)炎癥因子的影響，初步探索其作用機(jī)制，為研究開發(fā)中藥防治奶牛乳腺炎提供新的思路和方法。小鼠金黃色葡萄球菌乳腺炎模型的建立泌乳8～10D的BALBC小鼠隨機(jī)分成健康對照組、生理鹽水組和3個(gè)不同劑量的接菌組。健康對照組不做任何處理；50ΜL滅菌生理鹽水、1010CFU50ΜL、50X10CFU50ΜL和1010CFU50ΜL細(xì)菌懸液分別經(jīng)乳頭管注入生理鹽水組和3個(gè)不同劑量接菌組小鼠的第四對乳腺內(nèi)雙側(cè)。接菌后24H處死小鼠，取部分乳腺進(jìn)行組織學(xué)觀察，部分乳腺勻漿測定金黃色葡球菌數(shù)及ELISA測定TNFΑ、IFNΓ含量。1010CFU50ΜL，接菌組乳腺腺泡結(jié)構(gòu)基本完整，局部視野有上皮細(xì)胞脫落，毛細(xì)血管輕度充血。50X10CFU50ΜL接菌組乳腺腺泡局部崩潰嚴(yán)重，少量腺上皮壞死、脫落，小毛細(xì)血管充血、少量出血，間質(zhì)輕度水腫，腺泡內(nèi)、間質(zhì)中有嗜中性粒細(xì)胞浸潤。1010CFU50ΜL，接菌組乳腺病變進(jìn)一步加重。各接菌組母鼠乳腺組織細(xì)菌數(shù)、TNFΑ和INFΓ含量隨接菌劑量的增加而上升PCFU50ΜL，接菌組乳腺組織病理變化較輕，50X10CFU50ΜL接菌組乳腺組織病理變化較明顯，較1010CFU50ΜL接菌組乳腺組織病理變化輕微，易于進(jìn)一步監(jiān)控乳腺的病理變化及藥物的治療作用效果。因此本試驗(yàn)選用50X10CFI50ΜL，作為造模劑量。鹽酸小檗堿的體外抑菌試驗(yàn)按照試管二倍稀釋法測得純度在97％以上的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品對奶牛乳腺炎臨床分離的金黃色葡萄球菌的MIC和MBC分別為024MGML，056MGML。鹽酸小檗堿對小鼠金黃色葡萄球菌乳腺炎的作用及機(jī)制泌乳8～10D的BALBC小鼠隨機(jī)分為4組A生理鹽水組，B模型組，低劑量治療組05MGML和D高劑量治療組10MGML。A組經(jīng)乳頭管注入滅菌生理鹽水50ΜL；B、C、D組分別經(jīng)乳頭管注入50X10CFU50ΜL細(xì)菌懸液各50GL。A、B組于接菌后0H、12H、24H、36H腹腔注入滅菌生理鹽水各02ML；C、D組分別于接菌后0H、12H、24H、36H腹腔注入05MGML、10MGML的鹽酸小檗堿溶液各02ML。各組于接菌或注射生理鹽水后12H、24H、36H、48H，摘眼球采血后處死小鼠。取部分乳腺進(jìn)行組織學(xué)觀察、改良甲苯胺藍(lán)染色觀察乳腺肥大細(xì)胞的變化，部分乳腺勻漿測定金黃色葡球菌數(shù)，ELISA測定乳腺勻漿及血清TNFΑ、IFNΓ含量。結(jié)果表明接菌24H后，與模型組相比，低劑量治療組和高劑量治療組均能減少乳腺內(nèi)嗜中性粒細(xì)胞的浸潤。接菌48H后，模型組乳腺腺泡大部分崩潰，嗜中性粒細(xì)胞逐漸減少；治療組乳腺腺泡病變減輕，PMN浸潤少于模型組。與模型組相比，低劑量治療組、高劑量治療組在接菌后細(xì)菌數(shù)均極顯著低于模型組PCFU50ΜL為宜；鹽酸小檗堿不僅在體外對乳腺炎患牛乳樣中分離的金黃色葡萄球菌具有明顯的抑菌和殺菌作用，而且能明顯抑制金黃色葡萄球菌在小鼠乳腺內(nèi)的增殖；鹽酸小檗堿可明顯減輕小鼠金黃色葡萄球菌乳腺炎的病理反應(yīng)，減輕乳腺局部的炎癥表現(xiàn)；鹽酸小檗堿對小鼠實(shí)驗(yàn)性乳腺炎具有一定的保護(hù)作用，為臨床防治奶牛乳腺炎新藥的篩選提供了一條新的思路和途徑。

簡介：奶牛乳腺炎是奶牛的多發(fā)病和造成損失最為嚴(yán)重的疾病之一，而且還給人類的健康帶來了潛在的危害。目前，引起奶牛乳腺炎的病原菌眾多，且治療時(shí)大量抗生素的使用不但使奶牛對病原菌產(chǎn)生抗性，而且抗生素的殘留問題也日益影響著食品衛(wèi)生安全和人類健康等問題。利用疫苗來預(yù)防和控制奶牛乳腺炎是一種安全、經(jīng)濟(jì)、有效的方法。本課題針對引起奶牛乳腺炎的主要致病菌進(jìn)行了分離鑒定，并制備了三聯(lián)滅活苗，通過不同的試驗(yàn)動(dòng)物從免疫佐劑和免疫途徑的方面進(jìn)行了疫苗的免疫效力評價(jià)。本研究內(nèi)容分為四部分試驗(yàn)一奶牛乳腺炎主要致病菌的分離鑒定與致病性分析本試驗(yàn)對山東省濟(jì)南、泰安和臨沂等地區(qū)5個(gè)奶牛場的160份乳樣進(jìn)行了臨床型乳腺炎和隱性乳腺炎的判定檢測，并結(jié)合常規(guī)生化鑒定與PCR鑒定方法對所采集乳樣的主要致病菌進(jìn)行了分離鑒定。結(jié)果表明，160份乳樣中有127份呈乳腺炎陽性，其中臨床型乳腺炎占3622％，隱性乳腺炎占6318％；從這些乳樣中分離到了主要致病菌金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌，金黃色葡萄球菌依據(jù)溶血型的不同主要有Α溶血、Β溶血、ΑΒ溶血和不溶血這四種；大腸桿菌依據(jù)O抗原診斷血清得出主要有O、O、O和O這四種型；無乳鏈球菌依據(jù)溶血型主要為Β溶血型。并且對主要病原菌進(jìn)行了致病性分析，篩選出典型的致病性較強(qiáng)的菌株。試驗(yàn)二奶牛乳腺炎三聯(lián)滅活苗的制備與實(shí)驗(yàn)室免疫效力評價(jià)本試驗(yàn)從乳腺炎患病奶牛乳樣中分離到典型的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無乳鏈球菌，并研制出這三種菌的奶牛乳腺炎三聯(lián)滅活疫苗。為了初步評估該疫苗的免疫效力，在小白鼠上進(jìn)行了免疫攻毒試驗(yàn)，用間接ELISA法檢測了小白鼠的抗體水平，結(jié)果表明，此疫苗具有較好的免疫性，與對照組相比，顯著提高了小白鼠的抗體效價(jià)P001，提高了小白鼠抵抗多種病原菌侵襲的能力，免疫保護(hù)率平均達(dá)到733％。試驗(yàn)三不同免疫佐劑的三聯(lián)滅活苗的免疫效力評價(jià)本試驗(yàn)旨在通過不同免疫佐劑疫苗的效力比較，篩選出較為實(shí)用、安全、有效的佐劑疫苗。本試驗(yàn)以新西蘭白兔和荷斯坦奶牛為試驗(yàn)動(dòng)物，分別用油乳佐劑苗和鋁膠佐劑苗進(jìn)行了免疫試驗(yàn)，比較兩種佐劑疫苗的免疫效力，結(jié)果表明，油乳佐劑苗和鋁膠佐劑苗都能提高機(jī)體的免疫力，顯著提高P001血清中的抗體水平，但油乳佐劑苗比鋁膠佐劑苗更能顯著提高P001血清中的抗體水平，并且能夠維持較長時(shí)間的高抗體水平，顯著降低奶牛乳汁中的體細(xì)胞數(shù)，而且油乳佐劑苗穩(wěn)定性較好，價(jià)格低廉，易于在生產(chǎn)實(shí)踐中大量應(yīng)用。試驗(yàn)四三聯(lián)滅活苗在不同的免疫途徑下的免疫效力評價(jià)本試驗(yàn)旨在通過對奶牛乳腺炎三聯(lián)滅活苗在后海穴注射免疫與常規(guī)注射免疫的效力比較，尋找更為有效、方便的免疫途徑。本試驗(yàn)以荷斯坦奶牛為試驗(yàn)動(dòng)物，分別在后海穴、臀肌和皮下接種乳腺炎滅活疫苗，比較其免疫效力，結(jié)果表明，后海穴免疫首先能節(jié)省疫苗用量，同時(shí)還可以提前產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)免疫力，顯著提高P001血清中的抗體水平，維持較長時(shí)間的高抗體水平；其次接種疫苗時(shí)因針刺穴位的作用，顯著提高了血液中的白細(xì)胞總數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)，增強(qiáng)了免疫細(xì)胞的功能；‘最后顯著降低P001乳汁中的體細(xì)胞數(shù)。

簡介：ASSOCIATIONOFSINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISMSOFHSFLANDGRP94GENES、ⅥTHPRODUCTIONTRAITSANDMASTITISRESISTANCEINCHINESEHOLSTEINDAIRYCOWSBYLINYUNCAIATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORMASTERDEGREEOFAGRICULTURALEXTENSIONTHECOLLEGEOFANIMALSCIENCEANDTECHNOLOGYNANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYNANJING，210095，PRCHINACOMPLETEDINMAV，2014COMMENCEMENTINMAY2014原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者需親筆簽名琳袁蛸如肜年多月鄉(xiāng)曰學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密區(qū)打“√”學(xué)位論文作者需親筆簽名前K矗砒弦膨年多月鄉(xiāng)日導(dǎo)師需親筆簽名如|’年參竅日

簡介：奶牛乳腺上皮細(xì)胞和奶牛臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)的試驗(yàn)研究摘要為了研究UCMSCS與BMECS共培養(yǎng)的最適濃度比和最佳作用時(shí)間及其作用機(jī)制。本試驗(yàn)將P3代UCMSCS與P3代BMECS按照濃度比例為L1、12、13、14、15、110、150、1100、11000、2L等不同比例隨機(jī)混合培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)立UCMSCS與BMECS單純培養(yǎng)組為對照組，并分別于OH，24H，48H，72H，96H，120H和144H時(shí)觀察各組細(xì)胞的形態(tài)變化，用MTT法檢測細(xì)胞增殖，測定細(xì)胞貼壁率，并檢測EGF、BFGF、TGF13、HGF、N盯一Ⅱ、TNFI瞬IILD的表達(dá)水平，同時(shí)檢測CCOI、HK、LDH并OPK的活性，來探究UCMSCS與BMECS共培養(yǎng)的作用機(jī)制，從而為UCMSCS在畜牧生產(chǎn)上的研究應(yīng)用提供新的思路和理論依據(jù)。結(jié)果顯示體外分離培養(yǎng)的UCMSCS細(xì)胞形態(tài)均一、具有成纖維樣細(xì)胞外觀，排列緊密，有一定方向性；通過堿性磷酸酶染色后可見細(xì)胞呈深棕紅色；能夠被誘導(dǎo)為成脂、成骨細(xì)胞；將UCMSCS和BMECS按照不同濃度比混合共培養(yǎng)后，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，無抑制作用；MTT檢測增殖發(fā)現(xiàn)L2濃度組OD值最高，細(xì)胞增殖最快，明顯高于單純UCMSCS組和單純BMECS組，各組OD值在72H時(shí)均達(dá)到最高，隨后下降；共培養(yǎng)后細(xì)胞貼壁率與時(shí)間成正比，其中12濃度組細(xì)胞貼壁率最高，顯著高于單純BMECS組UCMSCS0BMECS按不同濃度混合共培養(yǎng)后，12濃度組培養(yǎng)液上清中的EGF水平顯著高于11000組、單純UCMSCS組及單純BMECSPO05，且在72H、96H、120H顯著高于0HPO05；12組的TGFO【分泌水平最低，11組、12組和21組顯著低于單純BMECS組P005，1L組、L2組、13組、21組TGFD水平顯著高于11000組及單純BMECS組P005，且72H時(shí)TGFA幣IITGFB分泌水平顯著低于0H和144HP00511組、L2組及21組BFGF分泌水平顯著高于150、L100、11000和單純BMECS組氏005，且48H、72H的分泌量顯著高于0H、24H、144H氏005HGF分泌水平在各組之間差異均不顯著，但12組的分泌量最大，各組HGF分泌量在72H時(shí)最高，顯著高于OH、24H、48HP005；11、12、13、14濃度組HK的活

簡介：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文甘草甜素對人工誘導(dǎo)小鼠乳腺炎的免疫保護(hù)效應(yīng)研究姓名劉萍申請學(xué)位級別碩士專業(yè)臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師郝滿良20070610IMMUNITYPROTECTIONOFG自YCYRRHIZINORMICEMASTIFFSARTIFICIALLYINDUCEDWITHSTAPHYLOCOCCUSANIMUSAUTHORLIUPINGADVISORPROFHAOMANLIANGM旬∞CLINICALVET盱INAFYMEDICINEABSTRACTBOVINEMASTIFFSNOTONLYC羽JSEDSEVEREECONOMICLOSSINDAHYHERDSBUTALSOBROUGHTSERIOUSANDPOTENTIALDAMAGEFORHUMANSHEALTHYBECAUSEANTIBIOTICSWASWIDELYUSEDDURINGTHERAPYINORDERTOFURTHERKNOWIMMUNOPATHOLOGYANDLOOKFORMOREIDEALMETHODTOPROVIDEBASICDA饑TILISSTUDYINVESTIGATEDTHEPATHOGENSFROMFIVECLINICALMASTIFFSFARMSINBAODINGAREA；THEMICEEXPERIMENTALMASTIFFSMODELINDUCEDBYSMPHYLOCOEEUSAUREUSWASESTABLISHEDLOCALANDBODYSYMPTOMS，IMMUNOPATHOLOGYWEREOBSERVED；THEEFFECTOFGLONTHEPATHOLOGICALMECHANISMANDIMNMNEFUNCTIONWASDISEUASEDWHENMICEEXPERIMENTALMASTIFFSTHEPATHOGENSOFFORTYTHREEMILKSAMPLES矗DMCLINICALDAIRYMASTIFFSWGIEISOLATEDANDINDENTIFIEDBYBIOCHEMICALMETHODITSHOWEDTHATTHEREWERENINETYONESⅡ鋤夠，TENSPECIESMOSTOFTHEMWERE蝴YLOCOOC啊AUREUS2198％，STREPTOCOCCUS1978％ANDESEHERICHIACOLI1978％THEPREGNANTBALB／CFEMALEMICEWERERANDOMLYDIVIDEDINTONOMALCONTROLGROUPSTERILEPHYSIOLOGICALSALINESOLUTION口SSGROUPAND1O1∥CFU／50PL，40X102CFU／50PL，70102CFU／5011L1OXL03CFU／50L’10X104CFU／50PLOFSTAPHYLOCOCCUS刪∽∞GROUPSEITHERPSSORSTAPHYLOCOCCUSABLALB50兒WASINOCULATEDINTOTHEFOURTHABDOMINALMAMMARYGLANDVIATHETEATDUCT札10DAFTERPARTURITIONINFLAMMATIONREACTIONWASOBSERVEDON24HOURSLATERHISTOPATHOLOGICEXAMINATIONOFMAMMARYGLANDREVEALEDTHATPOL”NORPHONUCLEARNEUTROPHILSPMNANDEXFOLIATEDEPITHELIALCELLSIN70XL釅CFU，50此STAPHYLO∞CC哪AURETLSGROUPWEREFOUNDINALVEOLICASES，VACUOLEANDSECRETIONOFALVEOLICASESWEREDECREASEDTHEINTERVALWIDTHINCREASEDINFLAMMATIONOFTHEMALNMALFYGLANDWASSIGNIFICANT11∞INTERSTITIALWIDTHTHECONCENTRATIONSOFTNFOIFNYINMAMMARYGLANDINCREASEDSIGNIFICANTLY口001COMPAREDWITHTHOSEOFNOMALCONTROLGROUP，STAPHYLOCOCCUS羽Ⅱ哪WASREPRODUCEDINMAMMARYGLANDANDCFUWASRAPIDLYINCREASEDN掉SPONTANEOUSDISEASEDPROCESSOFACUTEMASTITISWASFACTUALLYREFLECTEDBYBODYSYMPTOMSANDPATHOLOGICALCHANGESBASEDONABOVERESULTS，THEEXPERIMENTALMASTITISMODELBY70XL艫CFU／50ULSTAPHYLOCOCCUSAUREUSVIATEATDUCTINMICEWEREESTABLISHEDSUCCESSFUUYN垃WEGNANTBALB／CFEMALEMICEWERERANDOMLYDIVIDEDINTOHEMALCONTROLGROUPPOSITIVECONTROLGROUPANDEXPERIMENTALGROUPS，ANDINOCULATEDINTOTHEFOURTHABDOMINALMAMMARYGLANDVIATHETEATDUCTWITH50UL70L∥CFUSTAPHYLOCOCCUSAUREUS8一LODAIDERPARTURITIONTHENTHEMICEADMINISTRATEDORALLYON12，0，12，36HOURSAFTERINTRAPERITONEALINJECTIONWITHDIFFERENTDOSAGEOFGLYCYRRHIZINR22MG／ML44MG／ML，88MG／MLOTSTERILEPHYSIOLO酉CALSALINESOLUTION02MLTHEMICEWERESACRIFICEDBYCERVICALDISLOCATION6，18，42，66HOURSLATER11LEMAMMARYLYSMEWASCOLLECTEDNLECONTENTSOFTNFNANDIFNTWEREASSAYEDTHROUGHELISAN地MAMMARY