甘草甜素對人工誘導小鼠乳腺炎的免疫保護效應研究.pdf

1、奶牛乳腺炎至今不僅對奶牛業(yè)造成嚴重的經濟損失，而且由于治療過程中抗生素的廣泛應用，給人類的健康帶來嚴重的、現(xiàn)實的和潛在的危害。 為了進一步認識奶牛乳腺炎發(fā)生的免疫病理機制和尋找更理想的防治方法提供基礎研究數(shù)據(jù)，本試驗對保定地區(qū)5個奶牛場臨床型奶牛乳腺炎的病原進行了分離鑒定；并用分離到的金黃色葡萄球菌建立了小鼠實驗性乳腺炎模型，觀察和分析了乳腺炎模型的局部及整體的臨床表現(xiàn)和免疫病理變化；探討了甘草甜素對小鼠實驗性乳腺炎，乳腺局部和

2、整體病理機制及免疫功能的影響。 結果表明：將43份臨床型乳腺炎奶樣進行細菌分離鑒定，生化結果表明共分離到10種91株細菌，以金黃色葡萄球菌(21.98％)、鏈球菌(19.78％)、大腸桿菌(19.78％)感染為主。小鼠實驗性乳腺炎模型，以細菌菌落數(shù)(Colony-Forming Units，CFU)為接菌單位，將雌孕鼠分為正常對照組、生理鹽水組及1.0×10<,2>CFU/50uL、4.0×10<'2>CFe/50μL、 7.0

3、×10<'2>CFU/50μL、1.0×10<'3>CFU/50μL、1.0×10<'4>CFU/50μL不同濃度金黃色葡萄球菌懸液組，產后8～10d經乳頭管注入到小鼠的第4對(腹部)乳腺內，24h觀察炎癥反應。結果7.0x10<'2>CFU/50μL，金葡菌組乳腺上皮脫落，腺泡腔內大量炎性細胞浸潤，以嗜中性白細胞為主，充血，腺泡內空泡減少，腺泡分泌量減少，間隔增寬，炎癥明顯。而隨著金黃色葡萄球菌用量的加大，乳腺組織的炎癥程度加劇。間質

4、寬度、TNF-α及IFN-γ含量與對照組相比極顯著升高(P<0.01)，金葡菌在乳腺組織內大量繁殖，CFU急劇增加。小鼠體溫升高、臨床表現(xiàn)等全身癥狀以及病理變化真實反映了急性乳腺炎自然發(fā)病過程，因此選擇7.0×10<'2>CFU/50μL金葡菌繼續(xù)下面的試驗。甘草甜素對小鼠實驗性乳腺炎的影響，將受孕雌鼠隨機分成正常對照組、陽性對照組和試驗組。正常對照組于產后8～10d經乳頭管注入50μL滅菌生理鹽水；陽性對照組和試驗組小鼠分別于產后8～

5、10d經乳頭管注入50μL7.0×10<'2>CFU細菌懸液人工發(fā)病。分別于接菌-12h、0h、12h、36h時，正常對照組和陽性對照組腹腔注射滅菌生理鹽水0.2mL，試驗組分成3個劑量組，將甘草甜素分別配制成2.2 mg/mL、4.4 mg/mL、8.8 mg/mL，三個劑量，分別腹腔注射甘草甜素溶液0.2mL。分別于接菌后6h、18h、42h、66h脫頸致死。取乳腺組織固定，進行組織病理學觀察及間質寬度的測定，甲苯胺藍染色觀察乳腺肥

6、大細胞的變化，取乳腺勻漿液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測TNF-α及IFN-γ含量變化。結果甘草甜素各組小鼠精神狀態(tài)良好、體溫平穩(wěn)，能夠抑制金葡菌在乳腺組織內繁殖，顯著降低CFU(P<0.01)，因而減少了對乳腺組織的刺激，病理變化減輕，間質寬度縮小，充血減輕。 甘草甜素不同劑量組肥大細胞數(shù)在感染6～42h與生理鹽水組、陽性對照組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，且組間無差異性(P>0.05)，但甘草甜素組脫顆粒肥大細

7、胞少于陽性對照組，數(shù)據(jù)表明甘草甜素能夠很好地抑制肥大細胞脫顆粒。ELISA試驗結果顯示甘草甜素顯著降低乳腺內TNF-α和IFN-γ的濃度，且呈劑量依賴性，但高于正常對照組。甘草甜素調節(jié)乳腺內TNF-α和IFN-γ水平在一定范圍內，即參與機體免疫反應又控制組織的過度炎癥。 結論：保定地區(qū)5個奶牛場臨床型乳腺炎其病原體以金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌感染為主；用金黃色葡萄球菌建立的小鼠實驗性乳腺炎模型其局部等癥狀和病理機制與自然感